高产阿扎霉素F的基因工程菌及其构建方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种高产阿扎霉素F的基因工程菌及其构建方法与应用，属于基因工程和微生物技术领域。本发明专利技术高产阿扎霉素F的基因工程菌为过表达azl4基因(SEQ ID NO.1)和/或azl6基因(SEQ ID NO.2)的链霉菌，其构建方法包括如下步骤：构建强启动子元件驱动目的基因表达的过表达质粒，通过接合转移的方法将所构建质粒转移到产生阿扎霉素F的链霉菌宿主中。本发明专利技术通过基因工程手段，对阿扎霉素F生物合成相关的内源基因azl4和azl6进行过表达，使阿扎霉素F的产量得到大幅度提高。本发明专利技术为提高阿扎霉素F产量，降低阿扎霉素F生产成本奠定了基础。础。础。

【技术实现步骤摘要】
高产阿扎霉素F的基因工程菌及其构建方法与应用


[0001]本专利技术属于基因工程和微生物
，具体涉及一种高产阿扎霉素F的基因工程菌及其构建方法与应用。

技术介绍

[0002]阿扎霉素F是从吸水链霉菌阿扎霉素变种(Streptomyces hygroscopicus var.azalomyceticus)液体培养基中分离得到的36元大环内酯类化合物，其主要组分含有阿扎霉素F5a、F4a和F3a。据报道S.hygroscopicus MSU/MN
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75B、S.malaysiensis MJM1968等链霉菌均可代谢产生阿扎霉素F类大环内酯，之后袁干军等人也从海洋链霉菌Streptomyces sp.211726的发酵液中分离得到包括阿扎霉素F5a、F4a、F3a和9个新类似物在内的12个36元大环内酯，并在Chandra和Iwasaki等研究的基础上，对阿扎霉素F5a、F4a和F3a的平面结构、13C、1H核磁共振信号归属进行了修正和完善后，首次报道了阿扎霉素F5a、F4a、F3a及其7个新的结构类似物的相对构型。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高产阿扎霉素F的基因工程菌，其特征在于：所述的基因工程菌通过在产生阿扎霉素F的链霉菌宿主中过表达以下基因中的至少一种获得：核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的azl4基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的azl6基因。2.根据权利要求1所述的高产阿扎霉素F的基因工程菌，其特征在于：所述的产生阿扎霉素F的链霉菌为保藏编号为CCTCC NO：M2013221的链霉菌TKPJ3039。3.根据权利要求1所述的高产阿扎霉素F的基因工程菌，其特征在于：azl4基因和/或azl6基因以含有强启动子的位点特异性整合型载体在链霉菌宿主中过表达。4.根据权利要求3所述的高产阿扎霉素F的基因工程菌，其特征在于：所述的位点特异性整合型载体为pSET152或者pIB139质粒。5.根据权利要求3所述的高产阿扎霉素F的基因工程菌，其特征在于：所述的强启动子为组成型启动子hrdBp，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。6.权利要求1
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5任一项所述的高产阿扎霉素F的基因工程菌的构建方法，其特征在于：包括如下步骤：构建强启动子元件驱动目的基因表达的过表达质粒，通过接合转移的方法将所构建质粒转移到产生阿扎霉素F的链霉菌宿主中，得到高产阿扎霉素F的基因工程菌。7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)对不同的启动子在产生阿扎霉素F的链霉菌宿主菌中的强度进行表征和筛选，得到在宿主菌中活性强的启动子；(2)构建含目的基因的过表达质粒，所述质粒含有步骤(1)筛选的强启动子元件，以阿伯拉霉素抗性基因作为标记...

【专利技术属性】
技术研发人员：洪葵，赵明侠，朱冬青，李欣玥，张倩倩，邓子新，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：