一株变形假单胞菌vgrG基因回补菌株及其构建与应用制造技术

本发明专利技术公开了一株变形假单胞菌vgrG基因回补菌株及其构建与应用。所述菌株分类命名为Pseudomonas plecoglossicida C

【技术实现步骤摘要】
一株变形假单胞菌vgrG基因回补菌株及其构建与应用


[0001]本专利技术属于微生物
，具体涉及一株变形假单胞菌vgrG基因回补菌株及其构建与应用。

技术介绍

[0002]变形假单胞菌(Pseudomonasplecoglossicida)是一种革兰氏阴性菌，广泛分布在海水中，是典型的条件致病菌，在多种海洋鱼类中引发流行病，是大黄鱼、香鱼等海水经济鱼类“内脏白点病”的病原，具有较高的感染率和死亡率，给我国养殖业造成巨大的经济损失。
[0003]细菌
Ⅵ
型分泌系统(T6SS)在霍乱弧菌和铜绿假单胞菌中首次被发现，且与细菌的致病性有关。T6SS可以将效应蛋白注和溶血素共调节蛋白(Hcp)共同作用，通过T6SS的转移将效应物分泌到靶细胞中。由特定VgrG蛋白携带的C端结构域毒素(CTD)是目前鉴定出的两种靶向真核细胞的效应蛋白之一。VgrG蛋白复合物形成的尖峰通过穿透膜攻击靶细胞，帮助病原菌直接将致命毒素注射到目标细胞中。
[0004]本专利技术构建了一株变形假单胞菌vgrG基因回补菌株，将vgrG基因与pCM本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株变形假单胞菌vgrG基因回补菌株，其特征在于：所述菌株分类命名为Pseudomonas plecoglossicida C
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vgrG，已于2022年10月20日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 20221616，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号。2.一种构建权利要求1所述的变形假单胞菌vgrG基因回补菌株的方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤1：使用比较转录组学技术分析变形假单胞菌在斜带石斑鱼脾脏内的基因表达情况，发现vgrG基因高表达，锁定vgrG基因为目标基因；步骤2：PCR扩增vgrG基因序列，纯化回收PCR产物；将pCM130/tac载体用 BsrGI和NsiI限制性内切酶进行酶切，将酶切后的pCM130/tac载体与纯化的vgrG基因PCR产物进行连接，得到重组载体pCM130/tac
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vgrG；将重组载体pCM130/tac
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vgrG通过电击转化的方式导入变形假单胞菌vgrG基因敲除菌株感受态细胞，得到重组变形假单胞菌细胞；取重组变形假单胞菌细胞悬浮液涂布在含有四环素的LB固体平板上，筛选阳性克隆，PCR检验vgrG基因序列是否已经克隆到变形假单胞菌vgrG基因敲除菌株中，得到变形假单胞菌vgrG基因回补菌株；步骤3：利用qRT
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PCR对变形假单胞菌vgrG基因回补菌株的vgrG基因表达量进行检验，进一步确定vgrG基因回补成功，得到最终的变形假单胞菌vgrG基因回补菌株；其中，所述变形假单胞菌vgrG基因敲除菌株分类命名为Pseudomonas plecoglossicida
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vgrG...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵玲敏，杨豆，鄢庆枇，黄力行，覃映雪，
申请(专利权)人：集美大学，
类型：发明
国别省市：