一种生物合成3-脱氢莽草酸过程中降低副产物没食子酸的工程菌株及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种生物合成3

【技术实现步骤摘要】
一种生物合成3
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脱氢莽草酸过程中降低副产物没食子酸的工程菌株及其应用


[0001]本专利技术涉及一种生物合成3
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脱氢莽草酸过程中降低副产物没食子酸的工程菌株及其应用，属于基因工程


技术介绍

[0002]3‑
脱氢莽草酸，分子式为C7H8O5，分子量172.14，是芳香族氨基酸生物合成代谢途径中一种重要的中间产物，可作为一些化学合成制剂和药物中间原料，也是一种十分有效的抗氧化剂。工业上，一般采用化学合成法生产3
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脱氢莽草酸，但有毒的苯和甲苯这些原料试剂会对人体和环境造成严重的危害；研究者探索了以生物合成的方式生产3
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脱氢莽草酸，中国专利CN201711002831.2公开了生产3
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脱氢莽草酸的工程菌株，但是会产生大量的没食子酸副产物，而没食子酸与3
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脱氢莽草酸的化学性质极为相似，很难分离，使得生物合成3
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脱氢莽草酸的纯度较低。为此，本专利技术提供了一种生物合成3
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脱氢莽草本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种生物合成3
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脱氢莽草酸过程中降低副产物没食子酸的工程菌株，其特征在于，以大肠杆菌重组菌株WJ060为起始菌种，依次敲除莽草酸脱氢酶ydiB、aroE基因构建得到，命名为菌株HG17。2.根据权利要求1所述的一种生物合成3
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脱氢莽草酸过程中降低副产物没食子酸的工程菌株，其特征在于，所述菌株HG17的构建方法，具体步骤如下：（1）以大肠杆菌重组菌株WJ060为起始菌种，筛选基因ydiB的靶位点N20导入质粒sgRNA中获得质粒sgRNA
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ydiB
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N20，将基因ydiB经PCR扩增获得ydiB打靶片段，接着将质粒sgRNA
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ydiB
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N20和ydiB打靶片段导入大肠杆菌重组菌株WJ060中，培养，待长出单菌落，挑选单菌落，获得阳性单克隆，菌株命名为HG16；（2）以菌株HG16为宿主菌种，筛选基因aroE的靶位点N20导入质粒sgRNA中获得质粒sgRNA
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aroE
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N20，将基因aroE经PCR扩增获得aroE打靶片段，接着将质粒sgRNA
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aroE
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N20和aroE打靶片段导入菌株HG16中，培养，待长出单菌落，挑选单菌落，获得阳性单克隆，菌株命名为HG17。3.根据权利要求1或2所述的一种生物合成3
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脱氢莽草酸过程中降低副产物没食子酸的工程菌株，其特征在于，所述大肠杆菌重组菌株WJ060来源于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.14602。4.一种根据权利要求1或2所述的工程菌株应用生物合成3
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脱氢莽草酸过程中降低副产物没食子酸的方法，其特征在于，利用菌株HG17进行摇瓶发酵，所述摇瓶发酵培养方法，具体步骤如下：将菌株HG17以1%的接种量接种于摇瓶液体培养基Ⅰ中，在30~37℃、220rpm 下震荡培养40h，利用氨水或氢氧化钠调节pH为7.0；所述摇瓶液体培养基Ⅰ的配方：胰蛋白胨 10g/L、酵母粉 5g/L、Na2HPO
4 2~3.55g/L、KH2PO
4 2~3.4g/L、NH4Cl 1.2~2.5g/L、Na2SO
4 0.5~0.71g/L、MgSO4·
7H2O 0.2~0.5g/L、MgSO
4 0.1~0.3g/L、消泡剂0.15~1ml/L、葡萄糖 0.2~0.5g/L、甘油0.5%。5.一种根据权利要求1或2所述的工程菌株应用生物合成3
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脱氢莽草酸过程中降低副产物没食子酸的方法，其特征在于，利用菌株HG17进行优化摇瓶发酵，所述优化摇瓶发酵培养方法具体步骤如下：将菌株HG17以1%的接种量接种于摇瓶液体培养基Ⅱ中，在30~37℃、220rpm 下震荡培养40h；所述摇瓶液体培养基Ⅱ的配方：胰蛋白胨 10g/L、酵母粉 5g/L、Na2HPO
4 2~3.55g/L、KH2PO
4 2~3.4g/L、NH4Cl 1.2~2.5g/L、Na2SO
4 0.5~0.71g/L、MgSO4·
7H2O 0.2~0.5g/L、FeSO
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【专利技术属性】
技术研发人员：华夏，李亚，
申请(专利权)人：徐州合谷生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：