胆碱激酶突变体及其在胞磷胆碱生产中的应用制造技术

本发明专利技术公开了胆碱激酶突变体及其在胞磷胆碱生产中的应用。本发明专利技术通过对野生型胆碱激酶进行突变，获得了具有更高酶活性的突变体，并在此基础上通过融合可溶性表达标签有效提高了胆碱激酶的可溶性表达，从而有效提高了胞磷胆碱的生产效率及转化率。磷胆碱的生产效率及转化率。

【技术实现步骤摘要】
胆碱激酶突变体及其在胞磷胆碱生产中的应用


[0001]本专利技术涉及酶催化
，具体地说，涉及胆碱激酶突变体及其在胞磷胆碱生产中的应用。

技术介绍

[0002]胞磷胆碱是磷脂生物合成的重要中间体，具有保护脑神经，调节脑血管张力以及修复脑损伤等药理功能，临床上用于急性颅脑外伤和脑术术后意识障碍。
[0003]目前胞磷胆碱的主要生产方法包括化学合成法、生物发酵法以及酶促合成法。
[0004]化学合成法见于早期工艺路线，但是需要多种毒性有机试剂，且底物转化率低，因此不适于大规模生产应用（Kennedy E P. The synthesis of cytidine diphosphate choline, cytidine diphosphate ethanolamine, and related compounds [J]. Journal of Biological Chemistry, 1956, 222(1): 185
‑
191.）。
[0005]生物发酵法的原理是在微生物细胞中利用微生物自身的酶系本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.胆碱激酶突变体，其特征在于，所述突变体包含如下的氨基酸序列或由其组成：1）来自酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）胆碱激酶如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列中第70位氨基酸由Q到E的突变；2）来自酿酒酵母胆碱激酶如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列中第79
‑
80位氨基酸由KG到DE的突变；3）来自酿酒酵母胆碱激酶如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列中第344
‑
348位氨基酸由NTPSL到ETEDD的突变；4）来自酿酒酵母胆碱激酶如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列中第368位氨基酸由S到D的突变；5）来自酿酒酵母胆碱激酶如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列中第569位氨基酸由K到E的突变；6）来自酿酒酵母胆碱激酶如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列中第580位氨基酸由S到E的突变；7）来自酿酒酵母胆碱激酶如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列中包含上述1）
‑
6）中的两种或两种以上突变；或8）在1）
‑
7）的N端和/或C端连接标签得到的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变体包含如下的氨基酸序列或由其组成：a）来自酿酒酵母胆碱激酶如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列中第79
‑
80位氨基酸由KG到DE以及第368位氨基酸由S到D的突变；或a
′
）在a）的N端和/或C端连接标签得到的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变体包含如下的氨基酸序列或由其组成：b）来自酿酒酵母胆碱激酶如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列中第79
‑
80位氨基酸由KG到DE以及第569位氨基酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔玮博，马成伟，李杰，林振泉，
申请(专利权)人：北京量维生物科技研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：