检测SARS-CoV-2的引物组、核酸组合产品和试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种检测SARS

【技术实现步骤摘要】
检测SARS
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CoV
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2的引物组、核酸组合产品和试剂盒


[0001]本专利技术涉及分子检测领域，尤其涉及一种检测SARS
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CoV
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2的LAMP引物组、核酸组合产品和试剂盒。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒(SARS
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CoV
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2)是一种RNA病毒，具有宿主范围广，传播力强，变异率高等特点。
[0003]针对新型冠状病毒检测主要有抗原检测法和核酸检测法。
[0004]抗原检测法检测的是人体内是否存在病毒蛋白。抗原检测试剂盒操作简单，通常在15分钟左右就可以显示结果。缺点是由于不能放大病毒抗原，导致抗原检测灵敏性较低，对于处于感染早期的新冠患者可能会出现假阴性的结果。
[0005]核酸检测法主要为实时荧光PCR检测，实时荧光PCR需要特定的引物、具有荧光团/猝灭剂双标记探针以及具有5'
→
3'核酸外切酶活性Taq DNA聚合酶，通过聚合酶链反应(PCR)扩增SARS
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2的保守片段，探针退火至内部特定序列。引物伸长后，Taq DNA聚合酶置换并水解探针，从而释放并激活荧光团。反应过程中观察到的荧光增加可检测SARS
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2的存在，且荧光信号的增加与样品中扩增产物的数量成正比，并由实时荧光PCR仪器检测。实时荧光PCR检测的准确性高，被视为新冠检测的“金标准”，其缺点是需要专业人员使用昂贵的仪器进行检测，同时检测需要拭子采集、保存运输、样本处理、上机检测等多个环节，耗时较长，且各环节的严格操作以及衔接，是保障核酸检测结果的必要性因素。
[0006]传统的核酸检测法例如CN115058542A、CN115261511A、CN114807432A、CN114410848B、CN114369688B、CN114107574A、CN113881812B等。然而，传统的核酸检测法灵敏度有待提升。
[0007]有鉴于此，特提出本申请。

技术实现思路

[0008]本申请实施例的主要目的包括提供一组检测SARS
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CoV
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2的LAMP引物组，其能够和合适的分子信标搭配，实现SARS
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2的高灵敏度检测。
[0009]在本申请的第一方面，提供一种检测SARS
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CoV
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2的LAMP引物组，所述LAMP引物组包括靶向N基因的引物组和/或靶向Orf1ab基因的引物组；
[0010]所述靶向N基因的引物组包括如SEQ ID No.1所示的上游外部引物F3、如SEQ ID No.2所示的下游外部引物B3、如SEQ ID No.3所示的上游内部引物FIP、如SEQ ID No.4所示的下游内部引物BIP；
[0011]所述靶向Orf1ab基因的引物组包括如SEQ ID No.8所示的上游外部引物F3、如SEQ IDNo.9所示的下游外部引物B3、如SEQ ID No.10所示的上游内部引物FIP、如SEQ ID No.11所示的下游内部引物BIP。
[0012]在其中一些实施例中，所述LAMP引物组满足如下条件中的一个或者多个：
[0013](1)所述靶向N基因的引物组还包括如SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示的环引物；和，
[0014](2)所述靶向Orf1ab基因的引物组还包括如SEQ ID No.12和SEQ ID No.13所示的环引物。
[0015]在其中一些实施例中，所述LAMP引物组还包括的靶向内参基因的引物组。
[0016]在其中一些实施例中，所述内参基因包括人源Actin基因。
[0017]在其中一些实施例中，靶向所述人源Actin基因的引物组包括如SEQ ID No.15所示的上游外部引物F3、如SEQ ID No.16所示的下游外部引物B3、如SEQ ID No.17所示的上游内部引物FIP、如SEQ ID No.18所示的下游内部引物BIP。
[0018]在其中一些实施例中，靶向所述人源Actin基因的引物组还包括如SEQ ID No.19和SEQ IDNo.20所示的环引物。
[0019]在本申请的第二方面，提供一种检测SARS
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2的LAMP核酸组合产品，所述LAMP核酸组合产品包括靶向N基因的引物组和/或靶向Orf1ab基因的引物组，以及N基因特异性分子信标或/和Orf1ab基因特异性分子信标；
[0020]或者，还包括靶向内参基因的引物组，以及内参基因特异性分子信标；
[0021]其中，所述的靶向N基因、靶向Orf1ab基因的引物组或/和所述靶向内参基因的引物组如第一方面中任一项定义。
[0022]在其中一些实施例中，所述LAMP核酸组合产品满足如下条件中的一个或者多个：
[0023](I)所述N基因特异性分子信标如SEQ ID No.7所示，一端标记荧光基团A1，另一端标记淬灭基团B1；
[0024](II)所述Orf1ab基因特异性分子信标如SEQ ID No.14所示，一端标记荧光基团A2，另一端标记淬灭基团B2；和，
[0025](III)所述内参基因特异性分子信标如SEQ ID No.21所示，一端标记荧光基团A3，另一端标记淬灭基团B3。
[0026]在其中一些实施例中，所述LAMP核酸组合产品满足如下条件中的一个或者多个：
[0027]①
所述荧光基团A1、所述荧光基团A2和所述荧光基团A3各自独立子选自6
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FAM、CY5、JOE、HEX、ROX、Quasar 670、TAMRA、Texas Red和VIC中的一种；和，
[0028]②
所述淬灭基团B1、所述淬灭基团B2和所述淬灭基团B3各自独立子选自BHQ1、BHQ2和Dabcyl中的一种。
[0029]在本申请的第三方面，提供一种检测SARS
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2的LAMP试剂盒，所述LAMP试剂盒包括第二方面中所述的LAMP核酸组合产品。
[0030]在其中一些实施例中，所述LAMP试剂盒还包括其他扩增反应试剂、样本释放剂、拭子和移液器中的一种或者多种。
[0031]在其中一些实施例中，所述LAMP试剂盒满足如下条件中的一个或者多个：
[0032](i)所述其他扩增反应试剂包含链置换Bst酶、逆转录酶、UNG酶、dNTP、Mg2SO4、(NH4)2SO4、KCl、BSA、DMSO和Tris
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Hcl中的一种或多种；和，
[0033](ii)样本释放剂包含Tween 20、Tween 80、EDTA、甜菜碱、NaOH、异硫氰酸胍和Tris中的一种本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测SARS
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CoV
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2的LAMP引物组，其特征在于，所述LAMP引物组包括靶向N基因的引物组和/或靶向Orf1ab基因的引物组；所述靶向N基因的引物组包括如SEQ ID No.1所示的上游外部引物F3、如SEQ ID No.2所示的下游外部引物B3、如SEQ ID No.3所示的上游内部引物FIP、如SEQ ID No.4所示的下游内部引物BIP；所述靶向Orf1ab基因的引物组包括如SEQ ID No.8所示的上游外部引物F3、如SEQ IDNo.9所示的下游外部引物B3、如SEQ ID No.10所示的上游内部引物FIP、如SEQ ID No.11所示的下游内部引物BIP。2.根据权利要求1所述的检测SARS
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CoV
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2的LAMP引物组，其特征在于，所述LAMP引物组满足如下条件中的一个或者多个：(1)所述靶向N基因的引物组还包括如SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示的环引物；和，(2)所述靶向Orf1ab基因的引物组还包括如SEQ ID No.12和SEQ ID No.13所示的环引物。3.根据权利要求1或者2所述的检测SARS
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CoV
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2的LAMP引物组，其特征在于，所述LAMP引物组还包括的靶向内参基因的引物组；可选地，所述内参基因包括人源Actin基因；进一步可选地，靶向所述人源Actin基因的引物组包括如SEQ ID No.15所示的上游外部引物F3、如SEQ ID No.16所示的下游外部引物B3、如SEQ ID No.17所示的上游内部引物FIP、如SEQ ID No.18所示的下游内部引物BIP。4.根据权利要求3所述的检测SARS
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CoV
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2的LAMP引物组，其特征在于，靶向所述人源Actin基因的引物组还包括如SEQ ID No.19和SEQ ID No.20所示的环引物。5.检测SARS
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CoV
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2的LAMP核酸组合产品，其特征在于，所述LAMP核酸组合产品包括靶向N基因的引物组和/或靶向Orf1ab基因的引物组，以及N基因特异性分子信标或/和Orf1ab基因特异性分子信标；或者，还包括靶向内参基因的引物组，以及内参基因特异性分子信标；其中，所述的靶向N基因、靶向Orf1ab基因的引物组或/和所述靶向...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭爱女，郭永超，王艳平，蔡锦刚，刘文腾，
申请(专利权)人：深圳联合医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：