一种微生物低温保存液及其保存方法技术

本发明专利技术属于微生物保存技术领域，涉及一种微生物低温保存液及其保存方法。本发明专利技术提供了一种微生物低温保存液，其由保护液和载体构成；所述保护液由脱脂奶粉、β

【技术实现步骤摘要】
一种微生物低温保存液及其保存方法


[0001]本专利技术属于微生物保存
，涉及一种微生物低温保存液及其保存方法。

技术介绍

[0002]工业、农业、医学和科学研究的需要促进了微生物保存技术的发展。例如，当发现微生物就是某些传染性疾病的特殊病原时，为发展疫苗、抗生素和化学药品，人们需要分离、鉴定和保存微生物。农业上最明显的例子就是对固氮菌的研究，关于工业应用微生物的例子更是不胜枚举。微生物发酵还提供了大量的食品、饮料和药品。在分子生物学研究中，用先进的DNA重组技术可以修饰微生物(U.S.Congress1981)，微生物是基因工程的基础。微生物是重要的生物资源，保存微生物的目的，不仅使微生物菌株以活的生命状态保存下来，并使其遗传性状从分离时或从实验开始就一直保持不变。
[0003]目前，市场上的微生物菌剂产品大部分为固体保存状态，固体微生物菌剂产品的保存时间虽然较之液体菌剂产品长，但其制备方法较之液体菌剂产品多了很多设备、工序、人工和成本投入。此外，在野外进行科研活动时，需要进行微生物采集和临时保存。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种微生物低温保存液，延长微生物样本的保存时间。本专利技术另一个目的在于提供一种微生物保存方法，配合微生物低温保存液，能够在在保证有效微生物含量的前提下，极大地延长微生物的保存时间。
[0005]基于上述目的，本专利技术提供了一种微生物低温保存液及其保存方法来解决本领域内的这种需要。
[0006]一方面，本专利技术涉及一种微生物低温保存液，其由保护液和载体构成；保护液由脱脂奶粉、β
‑
环糊精、甘油和葡萄糖构成；载体为丙烯酸表面修饰的多孔泡沫金属材料。
[0007]进一步地，本专利技术提供的微生物低温保存液中，每100mL保护液配合10～15cm3载体。
[0008]进一步地，本专利技术提供的微生物低温保存液中，保护液由10～30g/mL脱脂奶粉、1～5g/mLβ
‑
环糊精、2～10g/mL甘油和1～5g/mL葡萄糖构成。
[0009]优选地，本专利技术提供的微生物低温保存液中，保护液由12.5g/mL脱脂奶粉、1.3g/mLβ
‑
环糊精、6.5g/mL甘油和3.4g/mL葡萄糖构成。
[0010]进一步地，本专利技术提供的微生物低温保存液中，载体的制备方法包括：将多孔泡沫金属材料浸泡在稀盐酸溶液中去除氧化层，然后浸入在丙烯酰胺的水溶液中30～60min，即为丙烯酸表面修饰的多孔泡沫金属材料。
[0011]进一步地，本专利技术提供的微生物低温保存液中，丙烯酰胺的水溶液的质量浓度为20～40％。
[0012]另一方面，本专利技术涉及一种微生物保存方法，其采用上述的微生物低温保存液保存微生物。
[0013]进一步地，本专利技术提供的微生物保存方法中，包括：
[0014]以体积计，微生物悬液与保护液的配比为1:2～5；每100mL保护液配合10～15cm3载体；
[0015]将微生物悬液、保护液和载体置于容器中，密闭震荡至少30s；然后液氮冷冻后得到固态微生物，将固态微生物进行真空冻干后，
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80℃～
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20℃真空保存。
[0016]进一步地，本专利技术提供的微生物保存方法中，真空冻干包括：将所述固态微生物
‑
50～
‑
35℃保存4～6h，然后在
‑
35～
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20℃进行主干燥8～12h，最后在10～25℃进行解析干燥7～10h
[0017]另一方面，本专利技术涉及上述微生物低温保存液在微生物保存中的应用，保存条件为不高于25℃。
[0018]与现有技术相比，本专利技术的提供的技术方案，至少具有下述的优点或有益效果：
[0019](1)本专利技术提供了一种微生物低温保存液，其直接与含微生物的样本混合，能实现微生物在
‑
5～0℃条件下常规保存至少30天。
[0020](2)本专利技术提供了一种微生物低温保存液，其直接与含微生物的样本混合，通过液氮速冻和真空冻干，能在
‑
90～
‑
80℃条件下真空冷干保存12个月。
具体实施方式
[0021]下面，结合实施例对本专利技术的技术方案进行说明，但是，本专利技术并不限于下述的实施例。
[0022]下述各实施例中实验方法和检测方法，如无特殊说明，均为常规方法；药剂和材料，如无特殊说明，均可在市场上购买得到；指标数据，如无特殊说明，均为常规测量方法。
[0023]实施例1
[0024]本实施例提供了一种微生物低温保存液的制备。
[0025]保护液的制备：由10g/mL脱脂奶粉、1g/mLβ
‑
环糊精、2g/mL甘油和1g/mL葡萄糖构成，溶剂为无菌水。
[0026]载体的制备：将多孔泡沫金属镍(购自河北宙斯盾金属材料有限公司)浸泡在稀盐酸溶液中去除氧化层，然后浸入在质量浓度为20％的丙烯酰胺水溶液中30min，取出后热风烘干。
[0027]微生物低温保存液的制备：将100mL保护液与10cm3载体置于玻璃容器中。
[0028]实施例2
[0029]本实施例提供了一种微生物低温保存液的制备。
[0030]保护液的制备：由12.5g/mL脱脂奶粉、1.3g/mLβ
‑
环糊精、6.5g/mL甘油和3.4g/mL葡萄糖构成，溶剂为无菌水。
[0031]载体的制备：将多孔泡沫金属镍浸泡在稀盐酸溶液中去除氧化层，然后浸入在质量浓度为20％的丙烯酰胺水溶液中30min，取出后热风烘干。
[0032]微生物低温保存液的制备：将100mL保护液与10cm3载体置于玻璃容器中。
[0033]实施例3
[0034]本实施例提供了一种微生物低温保存液的制备。
[0035]保护液的制备：由30g/mL脱脂奶粉、5g/mLβ
‑
环糊精、10g/mL甘油和5g/mL葡萄糖构
成，溶剂为无菌水。
[0036]载体的制备：将多孔泡沫金属镍浸泡在稀盐酸溶液中去除氧化层，然后浸入在质量浓度为40％的丙烯酰胺水溶液中60min，取出后热风烘干。
[0037]微生物低温保存液的制备：将100mL保护液与15cm3载体置于玻璃容器中。
[0038]实施例4
[0039]本实施例提供了微生物低温保存液应用于保存菌体的试验。
[0040]试验供试菌株：市售大肠杆菌标准菌株(ATCC25922)和金黄色葡萄球菌标准菌株(ATCC6538)。
[0041]试验分组如表1所示。
[0042]表1：试验分组
[0043][0044](1)常温保存
[0045]将活化后的大肠杆菌稀释于LB液体培养基，配制成5
×
104cfu/mL的菌体悬液，依照表1所示分组进行试验本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种微生物低温保存液，其特征在于，由保护液和载体构成；所述保护液由脱脂奶粉、β
‑
环糊精、甘油和葡萄糖构成；所述载体为丙烯酸表面修饰的多孔泡沫金属材料。2.根据权利要求1所述的微生物低温保存液，其特征在于，每100mL所述保护液配合10~15cm3所述载体。3.根据权利要求1所述的微生物低温保存液，其特征在于，所述保护液由10~30g/mL脱脂奶粉、1~5g/mL β
‑
环糊精、2~10g/mL甘油和1~5g/mL葡萄糖构成。4.根据权利要求3所述的微生物低温保存液，其特征在于，所述保护液由12.5g/mL脱脂奶粉、1.3g/mL β
‑
环糊精、6.5g/mL甘油和3.4g/mL葡萄糖构成。5.根据权利要求1所述的微生物低温保存液，其特征在于，所述载体的制备方法包括：将多孔泡沫金属材料浸泡在稀盐酸溶液中去除氧化层，然后浸入在丙烯酰胺的水溶液中30~60min，即为所述丙烯酸表面修饰的多孔泡沫金属材料。6.根据权利要求5所述的微生物低温保存液，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：张楠，郭超，罗彪彪，李春燕，吴娇，荆云，
申请(专利权)人：新乡医学院三全学院，
类型：发明
国别省市：