水产品中黄霉素A的液相色谱串联质谱检测方法技术

本发明专利技术涉及分析化学技术领域，具体涉及一种水产品中黄霉素A的液相色谱—串联质谱检测方法。本发明专利技术通过将水产品中的黄霉素A提取、净化、浓缩后进行测定。首先，采用氨化甲醇提取，经QuEChERS法净化，浓缩后经液相色谱—串联质谱仪测定。本发明专利技术采用外标法进行定量，适用于鱼、虾、蟹、贝、鳖可食组织中黄霉素A残留量的测定。该方法绿色环保，降低了检测成本，且操作简单。单。单。

【技术实现步骤摘要】
水产品中黄霉素A的液相色谱串联质谱检测方法


[0001]本专利技术属于黄霉素A检测
，具体提供了一种水产品中黄霉素A的液相色谱—串联质谱检测方法。

技术介绍

[0002]黄霉素又称富拉磷、默诺霉素、斑伯霉素等，它是一种多组分磷酸糖脂类抗生素，由灰绿链霉菌厌氧发酵产生。黄霉素具有促生长、提高饲料利用效率、抗菌消炎、预防疾病、用量少、效果好等优势，广泛用于畜禽以及水产养殖。在美国，黄霉素被批准用于牛、猪和家禽，但使用水平应在0.5～20mg/kg，可以单独使用，也可以与莫能菌素、拉沙里菌素或盐霉素等离子载体抗生素联合使用，以提高增重率和饲料效率。2002年我国原农业部正式批准黄霉素预混剂为新兽药。但长期食用黄霉素残留的动物源食品会破坏人体肠道菌群，对动物的骨骼发育有影响，大量摄入甚至会产生造血功能障碍。此外，在动物产品中残留或通过动物粪便排到环境中，污染土壤、地表水等环境，给人类安全带来威胁。因此，2005年欧盟农业部长会议决定，自2006年1月1日起，禁止在饲料中添加黄霉素。农业农村部第194号公告指出，自2020年1月1日起，退出除中药外的所有促生长类药物饲料添加剂品种，这其中就包含禁用黄霉素预混剂。
[0003]现有研究表明，黄霉素有5种活性成分，皆具有类似的化学特性和抗菌活性，黄霉素A是黄霉素中最主要活性组分，占活性组分总量60％～80％。由于黄霉素5种活性成分结构相似且难以生产单一成分的标准品，因此，目前对于黄霉素残留量的测定，常通过检测黄霉素A的残留量间接监控样品中的黄霉素残留。目前，国内已颁布的黄霉素残留量的方法标准仅有《DB34/T 1358
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2011饲料中黄霉素的测定高效液相色谱法》及《DB32/T1279
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2008饲料和饲料添加剂中黄霉素A的测定高效液相色谱法》。我国水产品中黄霉素的残留检测标准仍是空白，这给水产品中黄霉素残留的监控带来了很大的不便。
[0004]因此，通过对水产品中黄霉素A残留检测方法的研究，制定出科学的检测方法，为水产品养殖过程的风险评估和质量安全监管提供技术支撑。同时，为应对日益突出的具有重大安全风险的药物残留的检测与监管需求，开发水产品中黄霉素A的残留检测方法势在必行。

技术实现思路

[0005]本专利技术是为解决上述不足进行的，提供了一种水产品中黄霉素A的液相色谱—串联质谱检测方法。为了实现该目的，本专利技术所采用的具体方案如下：
[0006]本专利技术提供的水产品中黄霉素A的液相色谱—串联质谱检测方法，包括如下步骤：
[0007]A、黄霉素A的提取和净化
[0008]将水产品中可食部分取出，均质后采用氨化甲醇提取试样中的黄霉素A，使用QuEChERS法对提取液进行净化后通过氮吹法浓缩，复溶、过滤后得到待测样品；
[0009]B、检测
[0010]采用液相色谱—串联质谱进行检测，具体检测条件如下：
[0011](1)液相色谱条件：色谱柱：T3；流速：0.4mL/min；柱温：40℃；进样量：10μL；流动相A：含10mmol/L乙酸铵的水；流动相B：甲醇；
[0012]洗脱梯度：0.5min，10％B、90％A；0.5～4min，10％
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95％B、90％
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5％A；4～6.5min，95％B、5％A；6.5～6.6min，95％
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10％B、5％～90％A；6.6～10min，10％B、90％A，
[0013](2)质谱分析条件：采用电喷雾离子源，负离子扫描，多反应监测；喷雾电压：
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4500V；离子传输毛细管温度：550℃；碰撞气CAD：Medium；气帘气CUR：40.0psi；雾化气GS1：65.0psi；辅助气GS2：60.0psi。
[0014]优选的，水产品包括鱼、虾、蟹、贝及鳖。本专利技术以草鱼、大黄鱼、虾、蟹、文蛤鳖为例，对其中的黄霉素A进行检测，结果显示本专利技术方法能达到的检测限为1.0μg/kg，定量限为2.0μg/kg，检测效果优异。
[0015]步骤A和步骤B中的具体操作步骤优选如下：
[0016]步骤A中，采用氨化甲醇提取试样中黄霉素A的步骤如下：称取一定质量的试样，置于体积为试样重量25倍的塑料离心管中，加入体积为试样重量2～3倍的氨化甲醇提取液，涡旋振荡5min，超声10min，以4000r/min离心10min；取上清液至另一离心管中，样品残渣再加入上述体积的氨化甲醇提取液，重复提取一次，以8000r/min离心10min，合并上清液待净化。其中，氨化甲醇提取液为氨水体积分数为5
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30％的氨化甲醇溶液。
[0017]提取液浓缩、复溶、过滤的处理步骤如下：往提取液的上述清液中加入C18吸附剂，涡旋震荡30s，4000r/min离心5min；准确量取一定体积的上清液于离心管中，20～60℃下氮气吹干至约1/10体积，加入甲醇稀释至2倍体积，4000r/min离心5min，过0.22μm滤膜，得到供液相色谱—串联质谱仪测定的样品。
[0018]步骤B中，色谱分析时采用的T3色谱柱的规格为2.1
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100mm，1.8μm；
[0019]采用质谱进行定性检测时，母离子为789.9m/z，子离子为554.1m/z，去簇电压为
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100V，碰撞能量为
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45eV；采用质谱进行定量检测时，母离子为789.9m/z，子离子为575.6m/z，去簇电压为
‑
100V，碰撞能量为
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36eV。
[0020]专利技术的作用与效果
[0021]本专利技术结合黄霉素A的特点，适用氨化甲醇进行提取，QuEChERS法净化，使用液相色谱—串联质谱法测定了水产品，包括鱼、虾、蟹、贝及鳖可食部分中的黄霉素A残留量，建立了适用于水产品中黄霉素A残留的检测方法，弥补了我国水产品中黄霉素A残留检测的空白，为水产品中黄霉素A药物残留的检测与监管需求提供方法。
[0022]此外，高分辨质谱的高灵敏度降低了定量分析时对分离度的要求，消除复杂基体中其他物质带来的干扰，使定性、定量结果更为准确。在前处理方法上也进行一定程度的创新，通过QuEChERS法净化大大简化了净化过程，避免了复杂前处理引入更多的基质干扰，影响结果的准确性。同时，节约了大量的前处理时间，采用外标法进行定量，该方法绿色环保，降低了检测成本，且操作简单。
附图说明
[0023]图1为本专利技术黄霉素A标准溶液的选择离子流图(50μg/L)。
[0024]图2为本专利技术草鱼中黄霉素A的线性回归曲线。
[0025]图3为本专利技术大黄鱼中黄霉素A的线性回归曲线。
[0026]图4为本专利技术虾中黄霉素A的线性回归曲线。
[0027]图5为本专利技术蟹中黄霉素A的线性回归曲线。
[0028]图6为本专利技术文蛤中黄霉素A的线性回归曲线。
[0029]图7为本专利技术鳖本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.水产品中黄霉素A的液相色谱—串联质谱检测方法，其特征在于，包括如下步骤：A、黄霉素A的提取和净化将水产品中可食部分取出，均质后采用氨化甲醇提取试样中的黄霉素A，使用QuEChERS法对提取液进行净化后通过氮吹法浓缩，复溶、过滤后得到待测样品；B、检测采用液相色谱—串联质谱进行检测，具体检测条件如下：(1)色谱分析条件：色谱柱：T3；流速：0.4mL/min；柱温：40℃；进样量：10μL；流动相A：含10mmol/L乙酸铵的水；流动相B：甲醇；洗脱梯度：0.5min，10％B、90％A；0.5～4min，10％
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95％B、90％
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5％A；4～6.5min，95％B、5％A；6.5～6.6min，95％
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10％B、5％～90％A；6.6～10min，10％B、90％A，(2)质谱分析条件：采用电喷雾离子源，负离子扫描，多反应监测；喷雾电压：
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4500V；离子传输毛细管温度：550℃；碰撞气CAD：Medium；气帘气CUR：40.0psi；雾化气GS1：65.0psi；辅助气GS2：60.0psi。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：其中，所述水产品包括鱼、虾、蟹、贝及鳖。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：其中，步骤A中，采用氨化甲醇提取试样中黄霉素A的步骤如下：称取一定质量的试样，置于体积为试样重量25倍的塑料离心管中，加入体积为试样重...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤云瑜，黄冬梅，杨光昕，孔聪，史永富，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院东海水产研究所，
类型：发明
国别省市：