用于检测肺癌特异性标志物甲基化的凝胶法试剂盒及应用制造技术

本发明专利技术属于基因检测技术领域，公开了用于检测肺癌特异性标志物甲基化的凝胶法试剂盒及应用。具体公开了用于检测肺癌特异性标志物甲基化的试剂盒，其中，上述标志物包括HIST1H3A、SHOX2、PITX2、HOXA9和RASSF1基因。从肺癌组织提取的DNA中，上述标志物特异CpG位点发生高度甲基化。本发明专利技术采用上述试剂盒对肺癌5基因和内参基因ACTB甲基化进行PCR扩增，联合琼脂糖凝胶电泳检查结果，以任何2个或2个以上标志物阳性为肺癌诊断标准，灵敏度为80％，特异性为90％。本发明专利技术适用于医院对肺癌早期患者的筛查及对易感人群做风险评估，显示了很好的检出效果。检出效果。检出效果。

【技术实现步骤摘要】
用于检测肺癌特异性标志物甲基化的凝胶法试剂盒及应用


[0001]本专利技术属于基因检测
，具体涉及用于检测肺癌特异性标志物甲基化的凝胶法试剂盒及应用。

技术介绍

[0002]肺癌已经成为人类癌症死亡的主要原因之一。肺癌的发病率和死亡率居所有肿瘤之首，且呈快速上升趋势。我国肺癌死亡的主要原因之一，是缺乏有效的早期诊断手段。早期肺癌的5年生存率可以达到90％，而晚期肺癌的5年生存率只有15％。
[0003]肺癌的早期诊断总是比较困难。目前，肺癌的诊断主要依据临床症状、影像学检查和组织病理学检查等，如常见的磨玻璃为主的肺结节，它们的良恶性判断最主要就是基于胸部CT影像的表现，但是很难给予鉴别，最终诊断往往是在中晚期。
[0004]肺癌从最初病变发展成癌浸润转移需要5～10年时间，虽然有许多肿瘤早期已经出现，但是缺乏高敏感性和特异性的早期诊断技术。早期发现不仅治疗效果好，其医疗开支也低。一旦癌变中期，病变速度加快，治疗费用高，效果很差。因此，早期诊断和治疗是应对肺癌的最佳方法。
[0005]随着科技的快速发展，肿瘤标志物已本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.肺癌特异性标志物，其特征在于，包括如下5个基因：HIST1H3A、SHOX2、PITX2、HOXA9和RASSF1；所述5个基因经亚硫酸盐修饰后得到的甲基化基因的核酸序列分别如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:5所示。2.检测权利要求1所述肺癌特异性标志物甲基化的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于检测所述肺癌特异性标志物甲基化的引物对；所述引物对包括所述肺癌特异性标志物对应的5个引物对：HIST1H3A引物对的上、下游核酸序列分别如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示；SHOX2引物对的上、下游核酸序列分别如SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10所示；PITX2引物对的上、下游核酸序列分别如SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示；HOXA9引物对的上、下游核酸序列分别如SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14所示；RASSF1引物对的上、下游核酸序列分别如SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16所示。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述引物对还包括内参基因ACTB对应的1个引物对；所述内参基因ACTB经亚硫酸盐修饰后得到的DNA序列如SEQ ID NO:6所示，ACTB引物对的上、下游核酸序列分别如SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18所示。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR反应试剂，用于与所述肺癌特异性标志物对应的5个引物对和所述内参基因ACTB对应的1个引物对配合，在PCR扩增条件下进行6重甲基化特异性PCR扩增，使6个引物对同时在一个试管反应体系内完成各基因间无干扰的扩增。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡立夫，南熠郎，
申请(专利权)人：胡立夫，
类型：发明
国别省市：