一种tRNA来源的小分子非编码RNA作为病理性心肌肥厚标志物的临床应用制造技术

本发明专利技术公开了一种tRNA来源的小分子非编码RNA病理性心肌肥厚标志物，tRF病理性心肌肥厚标志物：tRF

【技术实现步骤摘要】
一种tRNA来源的小分子非编码RNA作为病理性心肌肥厚标志物的临床应用


[0001]本专利技术属于生物学
，具体涉及一种tRNA来源的小分子非编码RNA作为病理性心肌肥厚标志物在心肌肥厚初筛中的应用。

技术介绍

[0002]转移RNA(tRNA)是一类非编码RNA(ncRNAs)，可将特定氨基酸输送到核糖体以进行蛋白质合成。最近的研究表明，tRNA可以通过切割产生小的ncRNA，这些小ncRNA被称为tRNA衍生的小RNA(tsRNAs)。根据前体或成熟tRNA转录本的不同切割位置，tsRNA通常可分为tRNA相关片段(tRF)和tRNA半体(tiRNA)两类。tsRNA不仅仅是tRNA降解的随机产物,新兴研究已经开始揭示tsRNA在基本生物过程中的多种作用，包括基因沉默、核糖体生物发生、逆转录转座和表观遗传，这些都植根于tsRNA序列保守、RNA修饰和蛋白质结合能力。tsRNAs的生物功能使其在生理和病理状况中发挥重要作用，例如发育、衰老、神经退行性疾病、癌症和心血管疾病。在心血管疾病方面，研究表明tsRNAs存在于心脏组织中，并与心肌肥厚的遗传有关。此外，心肌肥厚与tsRNA诱导剂或调节剂之间似乎存在关系，例如氧化应激、缺氧、ANG、衰老和热量摄入，这表明tsRNA在心肌肥厚中的重要作用。
[0003]心肌肥厚是心脏维持心脏功能以对抗心脏生理和病理超负荷的生理适应性反应，其主要特征是心肌细胞大小增加和心脏质量增加。然而，持续的病理应激会导致病理性心肌肥厚(PCH)，主要表现为心肌细胞体积增大、心脏纤维化、心肌细胞死亡、胶原合成增加和肌成纤维细胞活化。病理性肥大最初是通过心室腔室尺寸减小和壁厚增加(同心肥大)来识别的，这会导致射血分数保留的心衰(HFpEF)。随着疾病的进展，病理性肥大导致心室扩张(偏心性肥大)伴收缩功能受损(适应不良重塑)，这通常导致射血分数降低的心衰(HFrEF)。因此，探索PCH中的关键分子势在必行，这可能为早期诊断和靶向治疗提供新的见解。
[0004]在病理性心肌肥厚到心衰发生发展过程中有几种生物标记物与之相关，其中最为重要的是脑钠肽(natriureticpeptides，BNP)，对于病理性心肌肥厚及心衰具有较高的临床诊断价值，但在某些疾病如肾功能不全、源发性醛固酮增多症以及某些甲状腺疾病时，这些标志物也会增高；此外，不同病因所致的心衰使其增高的反应性和程度不同，因此，其对病理性心肌肥厚及心衰诊断的特异性和敏感性受到质疑，需要发现一种新的、更可靠的、更特异性的和更灵敏的预测心衰发生发展的生物标志物并应用于临床病理性心肌肥厚及心衰的早期诊断。

技术实现思路

[0005]为解决上述
技术介绍
中提出的问题。本专利技术提供了一种tRNA来源的小分子非编码RNA作为病理性心肌肥厚标志物在病理性心肌肥厚初筛中的应用。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种tRNA来源的小分子非编码RNA病理性心肌肥厚标志物，tRF病理性心肌肥厚标志物，为：
[0007]tRF
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NB8PLML3E。
[0008]本专利技术一个较佳实施例中，所述tRF
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NB8PLML3E的特异性引物序列为5'
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CAGGTTGTCTGAATCCTTCAC
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3'、5'
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TATGGTTGTTCACGACTCCTTCAC
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3'。
[0009]一种基于tRF病理性心肌肥厚标志物的病理性心肌肥厚初筛检测试剂盒，所述病理性心肌肥厚初筛检测试剂盒包括逆转录反应体系和PCR反应体系，所述PCR反应体系包括针对1个所述tsRNAs病理性心肌肥厚标志物的特异性引物和通用引物。
[0010]本专利技术一个较佳实施例中，所述逆转录反应体系：以总RNA其中的mRNA作为模板，通过Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。
[0011]一种病理性心肌肥厚初筛检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
[0012]步骤1、采集静脉血提取血浆并提取全RNA，采用二代测序技术建立tsRNAs文库和病理性心肌肥厚患者循环血tsRNAs表达谱；
[0013]步骤2、将病理性心肌肥厚患者循环血tsRNAs表达变化与正常对照组比较增高1.5倍以上且统计学有显著性差异(P＜0.05)作为备选病理性心肌肥厚诊断标志物；
[0014]步骤3、比较病理性心肌肥厚备选诊断标志物并筛选出显著增高或者降低的tsRNAs制备病理性心肌肥厚初筛检测试剂盒。
[0015]本专利技术一个较佳实施例中，提取的血浆以1000g离心10分钟(4℃)，然后收集血浆样本并储存在
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80℃冰箱中。
[0016]本专利技术解决了
技术介绍
中存在的缺陷，本专利技术具备以下有益效果：
[0017]该tRNA来源的小分子非编码RNA作为病理性心肌肥厚标志物在病理性心肌肥厚初筛中的应用，通过检测循环血差异表达的tRF可将病理性心肌肥厚与正常对照组区分开，具有快速、敏感和特异等特点，为临床诊断和治疗提供一种新的检测方法和重要的实验依据；转移RNA(tRNA)衍生的小RNA(tsRNAs)是所有生命领域中最古老的小RNA之一，因此具有良好的序列保守性，此外，tsRNA存在于所有类型的体液中，并且在病理生理条件下受到动态调节，这两个特性使tsRNA成为临床转化应用的液体活检生物标志物的绝佳候选者。
附图说明
[0018]附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制。在附图中：
[0019]图1为本专利技术中1个tsRNAs显着差异表达图；
[0020]图2为所筛选的tRF病理性心肌肥厚标志物在对照组(CON)和病理性心肌肥厚组(PCH)病人血浆中的表达差异图；
[0021]图3为所筛选的tRF病理性心肌肥厚标志物的ROC曲线图。
具体实施方式
[0022]现在结合附图和实施例对本专利技术作进一步详细的说明，这些附图均为简化的示意图，仅以示意方式说明本专利技术的基本结构，因此其仅显示与本专利技术有关的构成。
[0023]一种tRNA来源的小分子非编码RNA病理性心肌肥厚标志物，tRF病理性心肌肥厚标志物，为：
[0024]tRF
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NB8PLML3E。
[0025]一种基于tRF病理性心肌肥厚标志物的病理性心肌肥厚初筛检测试剂盒，病理性心肌肥厚初筛检测试剂盒包括逆转录反应体系和PCR反应体系，PCR反应体系包括针对1个tRF病理性心肌肥厚标志物的特异性引物和通用引物。
[0026]逆转录反应体系：以总RNA其中的mRNA作为模板，通过Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。
[0027]一种病理性心肌肥厚初筛检测试剂盒的制备方法，包括以本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种tRNA来源的小分子非编码RNA病理性心肌肥厚标志物，其特征在于，tRF病理性心肌肥厚标志物，为：tRF
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NB8PLML3E。2.根据权利要求1所述的一种tRNA来源的小分子非编码RNA病理性心肌肥厚标志物，其特征在于，所述tRF
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NB8PLML3E的特异性引物序列为5'
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CAGGTTGTCTGAATCCTTCAC
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3'、5'
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TATGGTTGTTCACGACTCCTTCAC
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3'。3.一种基于tRF病理性心肌肥厚标志物的心肌肥厚初筛检测试剂盒，其特征在于：所述病理性心肌肥厚初筛检测试剂盒包括逆转录反应体系和PCR反应体系，所述PCR反应体系包括针对1个所述tsRNAs病理性心肌肥厚标志物的特异性引物和通用引物。4.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：胥婧祎，李渊，王峰，孙康云，
申请(专利权)人：苏州市立医院，
类型：发明
国别省市：