一种诊断阿尔茨海默病的试剂盒及其用途制造技术

本申请具体涉及一种诊断受试者是否患阿尔茨海默病的试剂盒，以及用于确定生物样品中生物标志物水平的试剂在制备试剂盒中的用途。本申请的方法能够替代传统的脑脊液的p

【技术实现步骤摘要】
一种诊断阿尔茨海默病的试剂盒及其用途


[0001]本申请涉及医药领域、病毒学领域和免疫学领域，特别是免疫学诊断领域。本申请具体涉及一种诊断受试者是否患阿尔茨海默病的试剂盒，以及用于确定生物样品中生物标志物水平的试剂在制备试剂盒中的用途。

技术介绍

[0002]阿尔茨海默病（Alzheimer
’
s disease, AD）最常见的生物标志物是Aβ和tau，它们可以通过脑脊液或PET成像检验。然而这个过程是有创的，且非常昂贵，难以在人群中普遍应用。此外，AD与其他类型的痴呆，如血管性痴呆（vascular dementia, VaD）、帕金森病性痴呆（Parkinson disease, PDD）、行为变异性额颞叶痴呆（behavioural variant frontotemporal dementia, bvFTD）、路易体痴呆（dementia with Lewy bodies, DLB）等，可能存在重叠的临床表现、病理和生物标志物，往往导致临床诊断困难。
[0003]CircRNA是一种具有封闭环状结构的非编码RNA，通过吸附miRNA、调节细胞内RNA结合蛋白和参与蛋白质翻译发挥生物学作用。越来越多的研究证实了circRNA与AD之间的关系。研究发现ciRS
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7通过下调miR
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7的活性降低其对Aβ的清除作用；circ_0000950通过发挥miR
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103的分子“海绵”作用而导致神经元损害；circPCCA 可以抑制糖原合成酶激酶
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3β的活化并且促进tau蛋白沉积。但是以往的研究样本量小，且未经脑脊液核心标志物证实临床诊断，限制了其临床转化。
[0004]基于上述问题，AD的临床治疗急需一种可有效诊断AD及鉴别AD与其他类型痴呆的方法。

技术实现思路

[0005]本申请专利技术人通过分析两个独立的数据集中AD患者与正常人员的circRNA的差异并使用差异circRNAs组来建立AD诊断模型。并在第三个独立人群中验证了该模型的诊断效能，证实了由血液中6种circRNAs组成的模型能够准确诊断及鉴别诊断AD。因此，本申请的circRNAs有助于AD的诊断。
[0006]因此，在第一方面，本申请提供了一种用于诊断受试者是否患阿尔茨海默病的方法，其包括：（1）从受试者获得包含生物标志物的生物样品；（2）测定生物样品中生物标志物的水平；和（3）基于所述生物标志物的水平，诊断受试者是否患阿尔茨海默病；其中，所述生物标志物为hsa_circ_0077001，hsa_circ_0022417，hsa_circ_0014356，hsa_circ_0014353，hsa_circ_0074533和hsa_circ_0089894。
[0007]在某些实施方案中，所述生物样品选自全血（例如，外周血），血清，血浆或脑脊液。
[0008]在某些实施方案中，所述生物样品选自全血（例如，外周血），血清和血浆。
[0009]在某些实施方案中，在进行步骤（2）之前，对所述生物样品进行预处理，以获得
circRNAs；然后进行步骤（2），即，测定生物标志物的水平。对生物样品（例如全血，血清和血浆）进行处理以获得circRNAs的方法是本领域技术人员已知的。例如，可使用商业化的试剂盒（例如miRNeasy Serum Kit （Qiagen, USA）、Ribo
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off rRNA Depletion Kit （Vazyme, Inc.））从生物样品（例如全血，血清和血浆）中分离获得circRNAs。
[0010]在某些实施方案中，在步骤（3）中，通过将所述生物标志物的水平与参考值进行比较，从而诊断受试者是否患阿尔茨海默病。
[0011]在某些实施方案中，所述生物标志物的水平是circRNA的水平。在此类实施方案中，所述参考值是所述circRNA在获自正常人群的生物样品中的水平或范围。在某些实施方案中， 通过定量PCR（例如，实时荧光定量PCR）来测定所述生物样品中生物标志物的水平。
[0012]在某些实施方案中，相对于参考值，外周血中 hsa_circ_0077001, hsa_circ_0022417, hsa_circ_0014356, hsa_circ_0014353, hsa_circ_0074533的水平的升高表明，受试者患有AD。在某些实施方案中，相对于参考值，外周血中hsa_circ_0089894的水平的降低表明，受试者患有AD。
[0013]在某些实施方案中，在步骤（3）中，使用弹性网络回归对所述6种生物标志物的水平进行岭回归，从而获得预测模型；然后，使用所述预测模型预测受试者患神经退行性疾病的风险。
[0014]在某些实施方案中，所述方法还包括，确定受试者的年龄、性别和ApoEε4基因型。在某些优选实施方案中，在步骤（3）中，使用弹性网络回归对所述6种生物标志物的水平进行岭回归，并且用年龄、性别和/或ApoEε4基因型进行校正，从而获得预测模型；然后，使用所述预测模型诊断受试者是否患阿尔茨海默病。
[0015]在某些实施方案中，所述受试者为哺乳动物，例如人。
[0016]在某些实施方案中，所述hsa_circ_0077001的序列如SEQ ID NO:1所示。在某些实施方案中，所述hsa_circ_0022417的序列如SEQ ID NO:2所示。在某些实施方案中，所述hsa_circ_0014356的序列如SEQ ID NO:3所示。在某些实施方案中，所述hsa_circ_0014353的序列如SEQ ID NO:4所示。在某些实施方案中，所述hsa_circ_0074533的序列如SEQ ID NO:5所示。在某些实施方案中，所述hsa_circ_0089894的序列如SEQ ID NO:6所示。
[0017]在某些实施方案中，所述方法能够诊断受试者是否患阿尔茨海默病。
[0018]在第二方面，提供了一种用于诊断受试者是否患阿尔茨海默病的试剂盒，所述剂盒包含用于确定生物样品中生物标志物水平的试剂，所述生物标志物为hsa_circ_0077001，hsa_circ_0022417，hsa_circ_0014356，hsa_circ_0014353，hsa_circ_0074533和hsa_circ_0089894。
[0019]在某些实施方案中，所述2试剂盒包含：用于确定受试者的hsa_circ_0077001水平的第一试剂或试剂组合，用于确定受试者的hsa_circ_0022417水平的第二试剂或试剂组合，用于确定受试者的hsa_circ_0014356水平的第三试剂或试剂组合，用于确定受试者的hsa_circ_0014353水平的第四试剂或试剂组合，用于确定受试者的hsa_circ_0074533水平的第五试剂或试剂组合，用于确定受试者的hsa_circ_0089894水平的第六试剂或试剂组合本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于诊断受试者是否患阿尔茨海默病的试剂盒，所述试剂盒包含用于确定生物样品中生物标志物水平的试剂，所述生物标志物为hsa_circ_0077001，hsa_circ_0022417，hsa_circ_0014356，hsa_circ_0014353，hsa_circ_0074533和hsa_circ_0089894；优选地，所述试剂盒包含：用于确定受试者的hsa_circ_0077001水平的第一试剂或试剂组合，用于确定受试者的hsa_circ_0022417水平的第二试剂或试剂组合，用于确定受试者的hsa_circ_0014356水平的第三试剂或试剂组合，用于确定受试者的hsa_circ_0014353水平的第四试剂或试剂组合，用于确定受试者的hsa_circ_0074533水平的第五试剂或试剂组合，用于确定受试者的hsa_circ_0089894水平的第六试剂或试剂组合。2.权利要求1所述的试剂盒，其中，所述试剂（例如第一、第二、第三、第四、第五和/或第六试剂或试剂组合）通过杂交技术来测定所述生物样品中生物标志物的水平；优选地，所述杂交技术选自Northern印迹分析，微阵列技术，原位杂交，液相芯片技术，夹板连接法；优选地，所述试剂盒具有下列的特征：（1）所述第一试剂或试剂组合包含能够定量hsa_circ_0077001的水平的引物和/或探针；（2）所述第二试剂或试剂组合包含能够定量hsa_circ_0022417的水平的引物和/或探针；（3）所述第三试剂或试剂组合包含能够定量hsa_circ_0014356的水平的引物和/或探针；（4）所述第四试剂或试剂组合包含能够定量hsa_circ_0014353的水平的引物和/或探针；（5）所述第五试剂或试剂组合包含能够定量hsa_circ_0074533的水平的引物和/或探针；（6）所述第六试剂或试剂组合包含能够定量hsa_circ_0089894的水平的引物和/或探针；优选地，所述试剂盒还包括用于捕获生物标志物的工具；更优选地，所述用于捕获生物标志物的工具位于固体支持物（例如，尼龙膜，微球）上。3.权利要求1所述的试剂盒，其中，所述试剂（例如第一、第二、第三、第四、第五和/或第六试剂或试剂组合）通过扩增技术来测定所述生物样品中生物标志物的水平；优选地，所述扩增技术选自qPCR，RT
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PCR，Stem
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loop PCR，Poly A PCR，RCA，测序；优选地，所述试剂盒具有下列的特征：（1）所述第一试剂或试剂组合包含能够定量hsa_circ_0077001的水平的引物和/或探针；（2）所述第二试剂或试剂组合包含能够定量hsa_circ_0022417的水平的引物和/或探针；（3）所述第三试剂或试剂组合包含能够定量hsa_circ_0014356的水平的引物和/或探针；（4）所述第四试剂或试剂组合包含能够定量hsa_circ_0014353的水平的引物和/或探针；（5）所述第五试剂或试剂组合包含能够定量hsa_circ_0074533的水平的引物和/或探
针；（6）所述第六试剂或试剂组合包含能够定量hsa_circ_0089894的水平的引物和/或探针；优选地，所述试剂盒还包括用于进行核酸扩增的试剂和/或用于进行测序的试剂；优选地，所述用于进行核酸扩增的试剂包括，酶（例如核酸聚合酶）的工作缓冲液、dNTPs（标记或未标记的）、水、包含离子（例如Mg
2+
）的溶液、单链DNA结合蛋白、或其任何组合。4.权利要求1
‑
3任一项所述的试剂盒，其中，所述生物样品为获自受试者的全血（例如，外周血），血清，血浆或脑脊液；优选地，所述生物样品选自全血（例如，外周血），血清和血浆；更优选地，所述生物样品选自外周血；优选地，所述受试者为哺乳动物，例如人。5.权利要求1
‑
4任一项所述的试剂盒，所述试剂盒还包含，对生物样品进行预处理的预处理试剂或试剂组合；优选地，所述预处理试剂或试剂组合用于对所述生物样品（例如全血，血清或血浆）进行预处理，以获得circRNAs；优选地，所述预处理试剂或试剂包含circRNA提取纯化溶液，以及任选的缓冲液；优选地，所述试剂盒用于区分患阿尔茨海默病的受试者和正常受试者；优选地，所述试剂盒用于区分患阿尔茨海默病的受试者和患其他痴呆（例如，血管性痴呆（vascular dementia，VaD）、帕金森病性痴呆（Parkinson disease，PDD）、行为变异性额颞叶痴呆（behavioural variant frontotemporal dementia，bvFTD）、路易体痴呆（dem...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾龙飞，任梓烨，庞亚娜，蔡慧敏，傅晓凤，
申请(专利权)人：贾龙飞，
类型：发明
国别省市：