一种基于ERA技术的基因Ⅰ型和基因Ⅱ型黄头病毒多重快速检测方法及检测用引物和探针技术

本发明专利技术提供一种基于ERA技术的基因Ⅰ型和基因Ⅱ型黄头病毒多重快速检测方法及检测用引物和探针。本发明专利技术以黄头病毒的ORF1b区域作为检测靶基因，设计合成引物和探针，并进行ERA检测即可判断检测结果。本发明专利技术方法可以实现两种基因型黄头病毒的多重检测，并且摆脱了对热循环仪的依赖，实验操作步骤简单，耗时短速度快，检测灵敏度较高，灵敏度可达1.0

【技术实现步骤摘要】
一种基于ERA技术的基因Ⅰ型和基因Ⅱ型黄头病毒多重快速检测方法及检测用引物和探针


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种基于ERA技术的基因Ⅰ型和基因Ⅱ型黄头病毒多重快速检测方法及检测用引物和探针。

技术介绍

[0002]在过去的几十年中，对虾养殖产业迅速扩大和发展，已经成为海水养殖业中发展最快、最具经济价值的产业之一，但同时也存在诸多问题。当前对虾主要养殖种类包括凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)、斑节对虾(Penaeus monodon)、中国对虾(Penaeus chinensis)等，其中，凡纳滨对虾是当今世界水产养殖经济产值最高的种类。随着产业的发展，对虾养殖行业也面临多种致病原的出现，包括细菌、真菌、病毒等。1990年，人们在泰国的黑虎虾中首次发现了黄头病毒(Yellow
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head virus，YHV)，该病毒引起了黑虎虾的大量死亡。此外，在澳洲再次发现一种病毒—鳃联病毒(Gill
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associated virus，GAV)，此种病毒跟在泰国发现的黄头病毒核酸序列与结本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于ERA技术的基因Ⅰ型和基因Ⅱ型黄头病毒多重快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以黄头病毒的ORF1b区域作为检测靶基因，设计合成用于检测基因Ⅰ型黄头病毒的引物YHV2和探针YHV
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Probe，以及用于检测基因Ⅱ型黄头病毒的引物GAV1和探针GAV
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Probe或用于检测基因Ⅱ型黄头病毒的引物GAV2和探针GAV
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Probe；引物YHV2的上游引物序列如SEQ ID NO:9所示，下游引物序列如SEQ ID NO:10所示；引物GAV1的上游引物序列如SEQ ID NO:3所示，下游引物序列如SEQ ID NO:4所示；引物GAV2的上游引物序列如SEQ ID NO:13所示，下游引物序列如SEQ ID NO:14所示；(2)以待测样品的基因组DNA为模板，采用步骤(1)的引物和探针进行ERA检测，判断检测结果。2.根据权利要求1所述基于ERA技术的基因Ⅰ型和基因Ⅱ型黄头病毒多重快速检测方法，其特征在于，步骤(2)进行基础型ERA检测，判断检测结果的方法是：若在100
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300bp处出现特异性条带，则表明扩增结果为阳性。3.根据权利要求2所述基于ERA技术的基因Ⅰ型和基因Ⅱ型黄头病毒多重快速检测方法，其特征在于，步骤(1)选择的引物是引物YHV2和GAV1，步骤(2)进行基础型ERA检测，判断检测结果的方法是：若在100bp处出现特异性条带，则表明扩增结果为基因Ⅱ型黄头病毒阳性；若在300bp处出现特异性条带，则表明扩增结果为基因Ⅰ型黄头病毒阳性。4.根据权利要求1所述基于ERA技术的基因Ⅰ型和基因Ⅱ型黄头病毒多重快速检测方法，其特征在于，步骤(2)进行荧光型ERA检测，判断检测结果的方法是：在ERA扩增的30min内扩增曲线的荧光值出现拐点，则表明扩增结果为阳性，即待测样品感染基因Ⅰ型或基因Ⅱ型黄头病毒，若出现两条扩增曲线，则表明同时待测样品同时感染两种基因Ⅰ型和基因Ⅱ型黄头病毒；若ERA扩增产物不满足上述条件，则表明扩增结果为阴性，即待测病毒不是黄头病毒。5.根据权利要求1所述基于...

【专利技术属性】
技术研发人员：王孟强，张璐，胡景杰，包振民，王燕，刘可欣，邵烁如，
申请(专利权)人：中国海洋大学三亚海洋研究院，
类型：发明
国别省市：