无需逆转录多位点启动指数扩增的新冠病毒检测方法、试剂盒及应用技术

本发明专利技术涉及无需逆转录多位点启动指数扩增的新冠病毒检测方法、试剂盒及应用，属于分子生物学核酸检测技术。本发明专利技术方法由结合DNA特异识别新冠病毒RNA，经限制性内切酶BstNI切割释放触发DNA，在切刻限制性内切酶Nt.BstNBI、链置换Bst 2.0 DNA聚合酶共同作用下，结合特殊设计的模板DNA在恒温条件下启动指数扩增产生双链DNA，通过嵌入性核酸染料实时监测荧光曲线变化，完成新冠病毒的检测。该方法在一次反应中对多个位点同时进行检测，检测的灵敏度高（约100拷贝/ml），检测时间短（<10分钟），可用于新冠病毒快速检测。可用于新冠病毒快速检测。可用于新冠病毒快速检测。

【技术实现步骤摘要】
无需逆转录多位点启动指数扩增的新冠病毒检测方法、试剂盒及应用


[0001]本专利技术属于分子生物学核酸检测技术，具体涉及一种无需逆转录多位点启动指数扩增的新冠病毒快速检测的方法及其应用。

技术介绍

[0002]新冠病毒属于冠状病毒科、冠状病毒属，基因组为单链RNA，包括11段编码序列，全长~29.9 kb。
[0003]新冠病毒的检测方法主要有核酸检测、抗原检测和分离病原体。虽然抗原检测操作便捷、检测迅速，但是抗原检出率较低，有“假阳性”和“假阴性”的局限性；病原体分离过程繁琐，并且需要专业的科研人员在专门的实验室才能够开展，因此，这些方法均不适用于新冠病毒大规模和快速检测；核酸检测具有灵敏度高、特异性好、检测方法易于建立等诸多优点，是新冠病毒检测的主要方法。
[0004]逆转录
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荧光定量PCR是新冠病毒核酸检测的“金标准”，但是该方法检测时间长达3~4小时，不能满足快速检测的需求；虽然恒温扩增方法如环介导等温扩增方法（LAMP），可以缩短检测时间至1~2小时，效率依然不高，并且其存在一定的假阳性，准确性较差本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
ID NO：07所示；所述模板DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示；所述阳性标准品为含有新冠病毒待测片段RNA的假病毒，所述阴性标准品为无DNA酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：祖向阳，胡志刚，薛云，杜喆，魏亚菲，林思漫，徐苛岚，宋克纳，高伟娜，付东辽，张晓兰，黄磊，王新征，黄梦姣，陈新刚，王静静，
申请(专利权)人：河南科技大学，
类型：发明
国别省市：