一种检测牛多瘤病毒的引物和探针组合及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种检测牛多瘤病毒的引物和探针组合及其应用，所述引物和探针组合包括检测牛多瘤病毒VP1基因的引物和探针组合；所述引物和探针组合包括：正向引物、反向引物和探针；所述正向引物的核苷酸序列包括SEQ ID NO:1所示，所述反向引物的核苷酸序列包括SEQ ID NO:2所示；所述探针的核苷酸序列包括SEQ ID NO:3所示。本发明专利技术针对BPyV 1型病毒的VP1基因设计对应的正反向引物、探针以及反应程序，建立了一种具有良好专一性、灵敏性以及高度覆盖性等优点的实时定量PCR法，且所述检测方法适用于生物制品大批量生产的繁复检测。适用于生物制品大批量生产的繁复检测。

【技术实现步骤摘要】
一种检测牛多瘤病毒的引物和探针组合及其应用


[0001]本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种检测牛多瘤病毒的引物和探针组合及其应用。

技术介绍

[0002]牛多瘤病毒(Bovine Polyomavirus，BPyV)属于多瘤病毒科(polyomaviridae)，是一种无包膜的闭环双链DNA病毒，目前已知有3种基因型。BPyV基因组大小约为4.7kb，病毒颗粒大小为40
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45nm。BPyV最早在从被污染的猴肾细胞(macaque kidney cell)培养物中分离得到，一开始认为是一种内源性病毒，后来被证明其是一种来源于细胞培养过程中使用的牛血清中的外源性病毒。
[0003]BPyV在牛血清和牛肉中普遍存在，甚至城市污水和土壤中也能检测到，因此常用作牛排泄物环境污染的参数。全球70％批次的牛血清存在BPyV污染的风险。健康的牛在感染BPyV后一般不会产生疾病，在特殊情况下(如免疫力下降)可能会导致母牛流产以及肾脏病变的发生；有研究表明BPyV可能会导致牛出现神经系统疾病。目前还没有人类感染BPyV并致病的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测牛多瘤病毒的引物和探针组合，其特征在于，所述引物和探针组合包括检测牛多瘤病毒VP1基因的引物和探针组合；所述引物和探针组合包括：正向引物、反向引物和探针；所述正向引物的核苷酸序列包括SEQ ID NO:1所示，所述反向引物的核苷酸序列包括SEQ ID NO:2所示；所述探针的核苷酸序列包括SEQ ID NO:3所示。2.根据权利要求1所述的检测牛多瘤病毒的引物和探针组合，其特征在于，所述探针的5
’
端修饰荧光素，所述探针的3
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端修饰淬灭剂；优选地，所述荧光素选自FAM、VIC或HEX任意一种；优选地，所述淬灭剂选自MGB、BHQ或TAMRA任意一种；优选地，所述正向引物和反向引物扩增的目的片段的序列如SEQ ID NO:4所示。3.一种检测牛多瘤病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的检测牛多瘤病毒的引物和探针组合。4.根据权利要求3所述的检测牛多瘤病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括病毒核酸标准品和荧光定量PCR反应试剂；优选地，所述病毒核酸标准品为包含SEQ ID NO:4所示核苷酸的质粒；优选地，所述荧光定量PCR反应试剂包括酶液和反应缓冲液，所述酶液包括DNA聚合酶。5.一种权利要求3或4所述的检测牛多瘤病毒的试剂盒以非疾病诊断和/或治疗为目的的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括以下步骤：(1)采集并处理待测样品，配制荧光定量PCR体系；(2)对待测样品和病毒核酸标准品进行荧光定量PCR反应，得到待测样品和病毒核酸标准品的荧光信号，对荧光信号进行数据处理，得到Ct值及扩增曲线；(3)根据病毒核酸标准品的浓度和Ct值，绘制荧光定量标准曲线，根据荧光定量标准曲线对待测样品进行定性和定量检测。6.根据权利要求5所述的使用方法，其特征在于，所述荧光定量PCR体系按终浓度计包括：TaqMan Universal Master Mix 1
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、800
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900nM正向引物、800
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900nM反向引物、220
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250nM探针。7.根据权利要求5或6所述的使用方法，其特征在于，所述荧光定量PCR反应的程序包括：步骤1：94
‑
9...

【专利技术属性】
技术研发人员：董元舒，柳勇，刘存昌，朱大鹏，童涌，
申请(专利权)人：苏州药明检测检验有限责任公司，
类型：发明
国别省市：