一种LuxM重组工程菌及酰基高丝氨酸内酯信号分子的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种LuxM重组工程菌的制备方法，所述LuxM重组工程菌能够分泌酰基高丝氨酸内酯，所述制备方法具体包括如下步骤：S1：构建包含LuxM基因的大肠杆菌重组表达载体pET

【技术实现步骤摘要】
一种LuxM重组工程菌及酰基高丝氨酸内酯信号分子的制备方法


[0001]本专利技术涉及细菌的基因重组工程领域，尤其涉及一种LuxM重组工程菌及酰基高丝氨酸内酯信号分子(AHL)的制备方法法和AHL的提取及检测，通过基因重组制备了一种能够过表达酰基高丝氨酸内酯(AHL)合成酶的LuxM重组工程菌，进而发酵培养产生大量的AHL；然后再从发酵液中提取AHL，通过高效液相色谱(HPLC)检测分析。

技术介绍

生物膜工艺是一种高效节能的废水处理生物技术，具有净化效率高、微生物多样性丰富、表面积大、污泥膨胀少和运营成本低等优点，生物膜工艺被广泛用于农业、工业、城市等领域的污水处理，例如移动床生物膜反应器(MBBR)、生物滤池(Biofilters)、集成固定膜活性污泥(IFAS)等。然而，生物膜的形成一直以来是生物膜废水处理过程中关注的焦点问题。
[0002]研究表明，基于酰基高丝氨酸内酯(AHLs)的群体感应(QS)通讯系统与废水生物膜的形成密切相关。为了加强QS通讯，细菌将化学信号分泌到环境中，当信号分子达到一定的浓度就会调节相关基因的表达。细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种LuxM重组工程菌的制备方法，所述LuxM重组工程菌能够分泌酰基高丝氨酸内酯，其特征在于，所述制备方法具体包括如下步骤：S1：构建包含LuxM基因的大肠杆菌重组表达载体pET
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LuxM；S2：将重组表达载体pET
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LuxM转化到大肠杆菌，得到LuxM重组工程菌。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S1具体包括如下步骤：S11：将哈维氏弧菌接种至LB培养基中培养一段时间；S12：提取哈维氏弧菌的基因组作为扩增模板，对重组前的LuxM基因进行PCR扩增；S13：对PCR扩增产物进行切胶回收、纯化；S14：用限制性内切酶BamH I、Hind III分别双酶切纯化后的PCR扩增产物和载体pET
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28a(+)；S15：将双酶切后的PCR扩增产物和pET
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28a载体骨架连接，得到重组表达载体pET
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LuxM。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，PCR引物序列如下，下划线表示酶切位点：LuxM
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F:CGGGATCCCGATGCTGTCGCTATTGTCTTTGTCTC；LuxM
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R:CCAAGCTTGGAACATGCTCATCCCTTTCTAACGA。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S2具体包括如下步骤：S21：取一定量的大肠杆菌感受态细胞冰上溶解；S22：将溶解后的大肠杆菌感受态细胞加入一定量的重组表达载体pET

【专利技术属性】
技术研发人员：李志斐，李军霖，谢骏，龚望宝，王广军，张凯，夏耘，郁二蒙，李红燕，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院珠江水产研究所，
类型：发明
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