酸性蛋白酶AGP及其制备方法和应用技术

本申请提供了酸性蛋白酶AGP及其制备方法和应用。制备酸性蛋白酶AGP的方法包括：将目的基因接入表达载体中，构建重组质粒；将所述重组质粒转化到感受态细胞之后，加入异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达；从诱导表达的蛋白中纯化得到酸性蛋白酶AGP。本申请提供的酸性蛋白水解酶AGP具有以下特点：在酸性条件(pH 2.5)和低温、少量变性剂和还原剂存在条件下依然保持比较强的活性；具有广泛的酶切位点，主要酶切位点为天门冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、苯丙氨酸(Phe)、组氨酸(His)、赖氨酸(Lys)等，与Pepsin酶切位点具有高度互补性；AGP酶切时产生的肽段长度比Pepsin产生的肽段更短。产生的肽段长度比Pepsin产生的肽段更短。产生的肽段长度比Pepsin产生的肽段更短。

【技术实现步骤摘要】
酸性蛋白酶AGP及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物质谱
，更具体地，涉及酸性蛋白酶AGP及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]蛋白质是生命的基础，一切生命的表现形式，本质上都是蛋白质功能的体现。了解细胞、组织乃至整个生命体内蛋白质的结构和动态变化，会对疾病的发生、发展等过程有一个全面的认识，把握疾病诊治的关键，提高药物开发的效率。
[0003]氢氘交换质谱(Hydrogen Deuterium Exchange Mass spectrometry,HDX
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MS)是研究蛋白质结构的常见手段，该技术利用质谱监测蛋白骨架中酰胺氢与氘水发生交换的特性，反映蛋白质在溶液中的构象特征和动态变化。HDX
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MS凭借分析快速、灵敏、样品消耗量少，适用于复杂蛋白体系分析等优势，目前已广泛应用于膜蛋白相互作用、抗体、甚至蛋白质组装和病毒研究中。由于HDX
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MS主要以自下而上(Bottom up)蛋白组学方法为主，因此在MS分析之前需要采用蛋白酶酶切产生多肽。为了尽量减少氘本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种制备酸性蛋白酶AGP的方法，其特征在于，包括：将目的基因SEQ.ID.NO.1接入表达载体中，构建重组质粒；将所述重组质粒转化到感受态细胞之后，加入异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达；从诱导表达的蛋白中纯化得到酸性蛋白酶AGP。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述诱导表达的条件为：重组表达宿主菌37℃振摇培养至OD600为0.6时，加入终浓度为1mM的异丙基硫代半乳糖苷，37℃...

【专利技术属性】
技术研发人员：李惠琳，张颖，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：