成对的二分免疫受体多核苷酸的高通量克隆及其应用制造技术

技术编号:37674879 阅读:19 留言:0更新日期:2023-05-26 04:38
本文提供了组合物和高通量克隆编码二分免疫受体同源对的融合的二分免疫受体多核苷酸的方法。本文还提供了融合的二分免疫受体多核苷酸的各种应用、包含融合的二分免疫受体多核苷酸的表达载体或包含融合的二分免疫受体多核苷酸或表达载体的细胞。多核苷酸或表达载体的细胞。多核苷酸或表达载体的细胞。

【技术实现步骤摘要】
成对的二分免疫受体多核苷酸的高通量克隆及其应用
本申请是申请日为2019年08月12日、申请号为201980067485.7、专利技术名称为“成对的二分免疫受体多核苷酸的高通量克隆及其应用”的中国专利申请(其对应PCT申请的申请日为2019年08月12日、申请号为PCT/US2019/046170)的分案申请。相关领域的交叉申请
[0001]本申请要求2018年8月13日提交的美国临时专利申请62/718,227、2018年8月31日提交的美国临时专利申请62/725,842、2018年9月18日提交的美国临时专利申请62/732,898、2019年3月14日提交的美国临时专利申请62/818,355和2019年3月26日提交的美国临时专利申请62/823,831的权益,每个申请通过参考全部并入本文。

技术介绍

[0002]T细胞受体(TCR)负责识别抗原主要组织相容性复合体,从而引发抗炎应答的发生。存在许多T细胞子集,包括细胞毒性T细胞和辅助T细胞。细胞毒性T细胞(也称为CD8+T细胞)可杀死异常的细胞,例如病毒感染细胞或肿瘤细胞。辅助T细胞(也称为C本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种制备融合的二分免疫受体多核苷酸的文库的方法,其包括:(a)生成多个容器,每个容器包括(1)细胞,其中所述细胞包含编码二分免疫受体的第一肽链的第一核酸和编码二分免疫受体的第二肽链的第二核酸,和(2)多个可聚合或可胶凝聚合物和/或单体;以及(b)将所述多个可聚合或可胶凝聚合物和/或单体聚合或胶凝化以形成多个硬化颗粒,所述多个硬化颗粒中的每个硬化颗粒具有由聚合或胶凝化的多个聚合物和/或单体构成的基质,其中所述多个硬化颗粒中的每个硬化颗粒包括所述第一核酸的第一引物延伸产物和所述第二核酸的第二引物延伸产物;其中所述第一引物延伸产物和所述第二引物延伸产物嵌入或包埋在所述基质内,并且其中所述第一引物延伸产物和所述第二引物延伸产物的扩散受到限制。2.根据权利要求1所述的方法,其中所述第一和第二引物延伸产物是逆转录(RT)产物、第二链合成(SSS)产物或扩增产物。3.一种鉴定靶反应性T细胞受体(TCR)的方法,其包括:(a)提供表达多个TCR的多个T细胞,其中所述多个T细胞中的每个T细胞表达所述多个TCR中的TCR的同源对;(b)将所述多个T细胞分配至多个隔室,其中每个隔室包括所述多个T细胞中的单个T细胞;(c)在每个隔室内,将编码第一TCR链的第一多核苷酸与编码所述单个T细胞的TCR的同源对的第二TCR链的第二多核苷酸连接,从而生成多个融合的多核苷酸,其中(i)所述第一多核苷酸和所述第二多核苷酸是所述单个T细胞的内源性核酸的转录产物或扩增产物,或者(ii)所述第一多核苷酸和所述第二多核苷酸不是使用亚磷酰胺化学合成的;(d)将所述多个融合的多核苷酸递送至多个细胞中,其中所述多个细胞中的每个细胞包含所述多个融合的多核苷酸中的至少一个融合的多核苷酸;(e)在所述多个细胞中从所述多个载体表达所述多个融合的多核苷酸,其中所述多个细胞的子集表达多个靶反应性TCR;(f)将所述多个细胞与一个或多个靶抗原接触,其中表达所述多个靶反应性TCR的所述多个细胞的子集与所述一个或多个靶抗原结合;以及(g)鉴定所述多个细胞的所述子集的所述多个靶反应性TCR中的靶反应性TCR。4.一种鉴定多个靶反应性T细胞受体(TCR)的方法,其包括:(a)提供表达多个TCR的多个细胞,所述多个细胞中的每个细胞表达所述多个TCR中的TCR,其中所述多个TCR包括至少50个不同的同源对并且包括来自多个V基因的V区,并且其中所述多个TCR对所述多个细胞来说是外源性的;(b)使所述多个细胞与一个或多个靶抗原接触,其中表达所述多个靶反应性TCR的所述多个细胞的子集与所述一个或多个靶抗原结合;以及(c)鉴定所述多个细胞的所述子集中的至少两个细胞,所述至少两个细胞表达所述多个靶反应性TCR中的至少两个靶反应性TCR,从而鉴定所述多个靶反应性TCR中的所述至少两个靶反应性TCR。5.一种治疗受试者中的癌症的方法,其包括:(a)提供表达多个TCR的多个T细胞,其中所述多个T细胞中的每个T细胞表达所述多个
TCR中的TCR的同源对;(b)将所述多个T细胞分配至多个隔室,其中每个隔室包括所述多个T细胞中的单个T细胞;(c)在每个隔室内,将编码第一TCR链的第一多核苷酸与编码所述单个T细胞的所述TCR的所述同源对的第二TCR链的第二多核苷酸连接,从而生成多个融合的多核苷酸,其中(i)所述第一多核苷酸和所述第二多核苷酸是所述单个T细胞的内源性核酸的转录产物或扩增产物,或者(ii)所述第一多核苷酸和所述第二多核苷酸不是使用亚磷酰胺化学合成的;(d)将所述多个融合的多核苷酸递送至多个细胞中、其中所述多个细胞中的每个细胞包含所述多个融合的多核苷酸中的至少一个融合的多核苷酸;(e)在所述多个细胞中表达所述多个融合的多核苷酸,其中所述多个细胞的子集从所述融合的多核苷酸...

【专利技术属性】
技术研发人员:陈曦伊利
申请(专利权)人:根路径基因组学公司
类型:发明
国别省市:

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