含GPI锚定区的膜表面蛋白制造技术

本发明专利技术涉及含GPI锚定区的膜表面蛋白，具体提供包括功能结构域和GPI锚定区的融合蛋白及其用途。所述融合蛋白能有效地激活和增殖免疫细胞，提升免疫细胞的效应功能。提升免疫细胞的效应功能。

【技术实现步骤摘要】
含GPI锚定区的膜表面蛋白


[0001]本专利技术涉及生物
，具体地涉及一种含GPI锚定区的膜表面蛋白。

技术介绍

[0002]跨膜蛋白通常通过跨膜结构域即跨膜多肽锚定在膜表面。然而，除了常见的多肽跨膜结构域外，蛋白也可以通过翻译后进行的脂修饰被定位在膜表面。大多数的脂修饰发生在胞质内，帮助将蛋白定位至膜上，在某些时候定位到特定的膜微结构域上。另一类脂修饰，糖基磷脂酰肌醇(Glycosylphosphatidylinositol,GPI)修饰，发生在内质网膜的腔内一侧。当GPI的核心结构在内质网膜上被合成后，其被整体转移至刚完成内质网移位(ER translocation)的前体蛋白上，形成新生的GPI锚定蛋白，新生的GPI锚定蛋白在内质网和高尔基体中再重新经历过几步修饰后，形成成熟的GPI锚定蛋白，最终被转运到细胞膜表面，成为通过GPI结构整合在细胞膜脂质双分子层上的膜表面蛋白。
[0003]GPI锚定蛋白的GPI部分由保守的核心多聚糖、磷脂酰肌醇和多聚糖支链组成。其核心多聚糖结构为EtNP
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6Manα2
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Manα6
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(EtNP)2Manα4
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GlNα6
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肌醇
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P
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脂。蛋白部分基本为缺失跨膜区的疏水多肽，在C末端共价连接的GPI被锚定在细胞膜上。对于需要通过形成二聚体或多聚体发挥作用的分子，例如细胞因子、抗体等，如果通过GPI锚定蛋白的结构锚定在膜表面，则可能能够使这些分子更好地发挥各自的功能。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供一种融合蛋白，其包括功能结构域和GPI锚定区。
[0005]在一个或多个实施方案中，所述功能结构域通过二聚化或多聚化行使其功能。
[0006]在一个或多个实施方案中，所述功能结构域包括：抗体或其抗原结合片段，和/或，基于氨基酸的细胞因子或其功能片段。
[0007]在一个或多个实施方案中，所述细胞因子包括介素或其受体、趋化因子或其受体、干扰素和TNF
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α。
[0008]在一个或多个实施方案中，所述介素或其受体包括选自以下的一种或多种：IL
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2、IL
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4、IL
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6、IL
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7、IL
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8、IL
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10、IL
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12、IL
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15、CD25、IL
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7R、IL
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12Rβ1、IL
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12Rβ2和IL
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15R。
[0009]在一个或多个实施方案中，所述趋化因子或其受体包括选自以下的一种或多种：CXCL2、CXCL3、CXCL4、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL12、CXCL13、CXCL14、CCL1、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL7、CCL8、CCL11、CCL13、CCL14、CCL15、CCL17、CCL18、CCL19、CCL20、CCL21、CCL22、CCL23、CCL24、CCL25、CCL26、CCL27、CCL28、CXCR1、CXCR2、CXCR3A、CXCR3B、CXCR4、CXCR5、CXCR6、CCR2、CCR5、CCR1、CCR3、CCR4、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCR10和XCR1。
[0010]在一个或多个实施方案中，所述干扰素为IFN
‑
γ。
[0011]在一个或多个实施方案中，所述抗体包括封闭型抗体和激活型抗体。
[0012]在一个或多个实施方案中，所述抗体为靶向肿瘤相关抗原的抗体，例如靶向HER2、
HER3、CD137或PD
‑
1的抗体。
[0013]在一个或多个实施方案中，所述GPI锚定区包括选自以下的一种或多种或其GPI锚定结构域：CD44、CD56、CD73、CD55、Thy1、AchE、IAP、ALPP、CD59、CD14、CD16、CD24、CD28、CD48、CD52、CD58、CD66a、CD66c、CD66d、CD66e、CD67、CD87、CD108、CD157、uPAR、JMH蛋白、GDNFR、CNTFR、TAG
‑
1、PrP、磷脂酰肌醇蛋白、信号素7、CEA、GFR、Ly6G、转铁蛋白受体、接触素(F3)和T
‑
钙黏蛋白。
[0014]在一个或多个实施方案中，所述GPI锚定区包括选自以下的一种或多种或其GPI锚定结构域：CD52、CD48、CD55、ALPP、CD90蛋白。
[0015]在一个或多个实施方案中，所述GPI锚定区具有SEQ ID NO:2第232
‑
268位所示序列，或与其具有至少90％序列相同性并且具有形成GPI锚定结构的功能的变体。
[0016]在一个或多个实施方案中，所述功能结构域位于所述GPI锚定区的N端方向。
[0017]在一个或多个实施方案中，所述融合蛋白还任选包括位于所述功能结构域和所述GPI锚定区之间的间隔区。
[0018]在一个或多个实施方案中，所述间隔区的长度为12
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66aa，例如为12aa、54aa、55aa或66aa。
[0019]在一个或多个实施方案中，所述间隔区包含：接头和/或蛋白胞外区。
[0020]在一个或多个实施方案中，所述接头具有SEQ ID NO:4第177
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188位所示序列，或与其具有至少90％序列相同性的序列。
[0021]在一个或多个实施方案中，所述蛋白胞外区是CD8胞外区和/或BCMA胞外区。
[0022]在一个或多个实施方案中，所述蛋白胞外区具有SEQ ID NO:2第177
‑
231位或SEQ ID NO:4第189
‑
242位所示序列，或与其具有至少90％序列相同性的序列。
[0023]在一个或多个实施方案中，所述融合蛋白还包含信号肽。
[0024]在一个或多个实施方案中，所述信号肽为所述GPI锚定区对应的蛋白的信号肽。
[0025]在一个或多个实施方案中，所述信号肽为CD52、CD48、CD55、ALPP、CD90蛋白信号肽中任一种或多种。
[0026]本专利技术还提供一种核酸分子，包含选自以下的序列：
[0027](1)本文第一方面所述融合蛋白的编码序列或其作为扩增引物或检测探针的片段，
[0028](2)与(1)具有至少80％序列相同性的变体，
[0029](3)(1)或(2)的互补序列。
[0030]本专利技术另一方面提供一种核酸构建物，所述核酸构建物包含本文任一实施方案所述的核酸分子。
[0031]在一个或多个实施方案本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种融合蛋白，其包括功能结构域和GPI锚定区，优选地，所述功能结构域通过二聚化或多聚化行使其功能。2.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述GPI锚定区包括选自以下的一种或多种或其GPI锚定结构域：CD44、CD56、CD73、CD55、Thy1、AchE、IAP、ALPP、CD59、CD14、CD16、CD24、CD28、CD48、CD52、CD58、CD66a、CD66c、CD66d、CD66e、CD67、CD87、CD108、CD157、uPAR、JMH蛋白、GDNFR、CNTFR、TAG
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1、PrP、磷脂酰肌醇蛋白、信号素7、CEA、GFR、Ly6G、转铁蛋白受体、接触素(F3)和T
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钙黏蛋白，优选地，所述GPI锚定区包括选自以下的一种或多种或其GPI锚定结构域：CD52、CD48、CD55、ALPP、CD90蛋白，更优选地，所述GPI锚定区具有SEQ ID NO:2第232
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268位所示序列，或与其具有至少90％序列相同性并且具有形成GPI锚定结构的功能的变体。3.如权利要求1或2所述的融合蛋白，其特征在于，所述功能结构域包括：抗体或其抗原结合片段，和/或，基于氨基酸的细胞因子或其功能片段；优选地，所述抗体包括封闭型抗体和激活型抗体，所述细胞因子包括介素或其受体、趋化因子或其受体、干扰素和TNF
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α，更优选地，所述融合蛋白具有选自以下的一项或多项特征：所述抗体为靶向肿瘤相关抗原的抗体，所述介素或其受体包括选自以下的一种或多种：IL
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2、IL
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4、IL
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6、IL
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7、IL
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8、IL
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10、IL
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12、IL
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15、CD25、IL
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7R、IL
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12Rβ1、IL
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12Rβ2和IL
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15R，所述趋化因子或其受体包括选自以下的一种或多种：CXCL2、CXCL3、CXCL4、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL12、CXCL13、CXCL14、CCL1、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL7、CCL8、CCL11、CCL13、CCL14、CCL15、CCL17、CCL18、CCL19、CCL20、CCL21、CCL2...

【专利技术属性】
技术研发人员：金华君，周莹，王超，黄晨，
申请(专利权)人：上海君赛生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：