与湖羊睾丸性状相关的FAM151B基因分子标记及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种与湖羊睾丸性状相关的FAM151B基因分子标记及其应用，所述的分子标记由FAM151B基因序列（Gene Bank ID:101120919）通过设计的特异性引物扩增得到，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示，在序列表SEQ ID NO.1的第306bp处有一个C/T的碱基突变，该突变导致BsaJI

【技术实现步骤摘要】
与湖羊睾丸性状相关的FAM151B基因分子标记及其应用


[0001]本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一种与湖羊睾丸性状相关的FAM151B基因分子标记，本专利技术同时还涉及该分子标记在湖羊分子标记辅助选择中的应用。

技术介绍

[0002]近年来，随着经济的快速发展和人民生活水平的提高，人们对羊肉的需求增大，羊肉市场供不应求。湖羊因早熟、高繁、肉质细嫩、生态幅度大和适于规模舍饲等优异特性，在舍饲和半放牧半舍饲养羊地区得到大面积的推广，是我目前市场占有率最高的肉羊品种因此，通过培育高繁殖力绵羊新品种或品系，是缓解目前羊肉市场紧张的迫切要求。睾丸是雄性哺乳动物特有的生殖器官，其基本功能是产生精子和分泌雄激素。公羊精子生成的数量和精液质量直接关系到其配种能力和母羊的受胎率，对于最大限度地提高生产性能至关重要。研究发现，睾丸大小主要由睾丸支持细胞数目所决定，而睾丸支持细胞数目则决定了精子产生数量，因此睾丸大小在一定程度上反映了公畜繁殖能力。生产上往往通过睾丸大小来判断种公羊繁殖潜力，但睾丸大小这一睾丸性状需要公羊成年之后才可度量，增加了选择时间，从而导致选育进展缓慢。随着分子标记技术的发展，利用分子生物学方法对睾丸性状进行标记从而进行早期选育的辅助选择，减少育种过程中选择的盲目性，同时缩短选育时间，可极大提升育种效率。
[0003]FAM151B（family with sequence similarity 151 member B）基因家族广泛分布于动物中，编码的蛋白属于磷酸二酯酶超家族成员（Findlay Amy S等，2020）。磷酸二酯酶具有水解细胞内第二信使的功能，其通过降解细胞内cAMP或cGMP，进而终止cAMP或cGMP在细胞内的生化作用（Preedy MEJ.等，2020）。有研究显示，在精子发生过程中，cAMP通过调节促卵泡素的分泌从而调节支持细胞的生精细胞发育成精子的能力（孙燕等，2006）。目前，FAM151B基因与湖羊乃至绵羊繁殖力相关的研究尚未见报道。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种与湖羊睾丸性状相关的FAM151B基因分子标记，为湖羊睾丸性状检测提供一种辅助选择的分子标记，以提高选育高繁殖力公羊的准确性。
[0005]本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：本专利技术提供的一种与湖羊睾丸性状相关的FAM151B基因分子标记，是由FAM151B基因序列通过设计的特异性引物扩增得到，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，在序列SEQ ID NO.1的306bp处y表示有一个C/T的碱基突变，该突变导致BsaJI
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RFLP多态性；扩增所述FAM151B基因分子标记的引物对为：正向引物F：GATTTTATTTAATTCAAGCAT；反向引物R：TTCTCTCCATTAGGCTCT。
[0006]利用上述与湖羊睾丸性状相关的FAM151B基因分子标记可以用于湖羊分子标记辅助选择，尤其是可用于与睾丸重量、睾丸长径、睾丸短径、附睾重或精子数相关性状湖羊公
羊的分子标记辅助选择。
[0007]本专利技术通过采集湖羊公羊睾丸组织，提取基因组DNA，并设计特异性引物对，对湖羊基因组进行PCR扩增，并采用PCR
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RFLP方法对湖羊FAM151B基因SNP位点进行基因分型，最后分析了湖羊FAM151B基因分型与睾丸相关性状的关联，结果显示，湖羊个体的基因分型包含TT基因型、CC基因型和TC基因型，且CC基因型湖羊个体其睾丸大小、附睾重以及精子数均显著优于TT基因型个体，因此，湖羊公羊的早期选种中可以选择CC基因型个体，从而实现精子产量较高的湖羊公羊的早期选育。
[0008]通过本专利技术提供的FAM151B基因分子标记进行高精子产量湖羊公羊的辅助选择，只需检测分子标记的特征扩增条带，即可预测幼年湖羊公羊成年后的精子产量，可在湖羊公羊幼年时选择出精子产量较高的湖羊个体，选择目标明确，选择效率高，且不受生长环境影响，使湖羊品种的早期选育成为可能，缩短了育种周期。
附图说明
[0009]图1为本专利技术的湖羊FAM151B基因部分测序结果和SNP位点；图2为本专利技术湖羊FAM151B基因PCR
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BsaJI
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RFLP检测结果；检测中琼脂糖浓度为3%，图中泳道M为Trans2K Plus DNA Marker (包含100 bp、200 bp、500 bp、750 bp、1000 bp、2000 bp、3000bp和5000bp共8种带型)；TT基因型片段大小为457 bp，CC基因型片段大小分别为151 bp和306 bp；TC基因型片段大小分别为457 bp、306 bp和151 bp。
具体实施方式
[0010]下面结合附图对本专利技术做进一步说明，以下说明不应理解为对本专利技术的限制。在不背离本专利技术精神和实质的前提下，对本专利技术所做的任何修饰或替换，均应视为落入本专利技术的保护范围。
[0011]1. 湖羊睾丸组织及精液采集湖羊睾丸组织样品采自民勤县德福农业生物科技有限公司。取上述湖羊公羊左侧睾丸组织，冷冻保存，用于DNA提取。并将湖羊左侧附睾尾称重并浸泡在50 mL盐水中，用无菌剪刀将组织剪成小块置于试管中，于37℃的水浴中孵育1小时，通过200目铜网过滤去除组织碎片，获得精液后利用细胞计数板统计精子数目。
[0012]2. 睾丸DNA提取睾丸组织基因组DNA利用天根DNA提取试剂盒分离，使用前在漂洗液GD和PW中按要求加入无水乙醇，主要步骤如下：（1）20mg睾丸组织样液氮研磨；（2）加入200 μL GA缓冲液，用吸头悬浮细胞后加入20 μL 蛋白酶K，56℃水浴10 min；（3）加入200 μL GB缓冲液，充分混匀后70℃水浴10 min至溶液变亮；（4）加入200 μL 无水乙醇，充分混匀，出现絮状沉淀；（5）将步骤（4）中溶液和沉淀全部转移到吸附柱CB3中，12000 r/min离心30 s，弃去液体；（6）向CB3上加500 μL漂洗液GD，12000 r/min离心30 s，弃去液体；
（7）向CB3上加700 μL 漂洗液PW，12000 r/min 离心30 s，弃去液体，重复一遍；（8）将CB3放入收集管，12000 r/min离心2 min，取出CB3，打开盖子，室温放置5 min干燥；（9）将CB3放入干净的离心管，加40 μL洗脱液，放置2 min， 12000r/min 离心2 min，所得液体即为湖羊DNA样品；（10）用1%琼脂糖凝胶进行电泳检测，利用Nanodrop 2000进行DNA纯度和浓度测定。
[0013]3. 引物设计根据FAM151B的DNA序列 (Gene Bank ID:101120919 )利用Oligo7设计P1
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P6六对引物（如表1所示），分别扩增FAM151B基因片段。
[0014]表1基因多态性研究引物4. 聚合酶链反应（PCR）将随机选取的20个湖羊DNA样品进行本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.与湖羊睾丸性状相关的FAM151B基因分子标记，其特征在于，该分子标记由FAM151B基因序列通过设计的特异性引物扩增得到，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，在序列SEQ ID NO.1的306bp处y表示有一个C/T的碱基突变，该突变导致BsaJI
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RFLP多态性；扩增所述FAM151B基因分子标记的引物对如下：正向引物F：GATTTTATTTAATTCAA...

【专利技术属性】
技术研发人员：李万宏，张丽，路婷婷，李建栋，沈先林，郭旭，叶炜，董彦琴，
申请(专利权)人：甘肃润牧生物工程有限责任公司，
类型：发明
国别省市：