一株植物乳杆菌AY01及其应用制造技术

本发明专利技术公开一株植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）AY01，该植物乳杆菌保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 20221517，所述植物乳杆菌具有阻断HT

【技术实现步骤摘要】
一株植物乳杆菌AY01及其应用


[0001]本专利技术涉及微生物领域，尤其涉及一株性能优良的植物乳杆菌株及其在抑制结直肠癌细胞HT
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29增殖、抗结直肠癌益生菌辅助治疗中的应用。

技术介绍

[0002]结直肠癌(CRC)的高发病率和高死亡率对生命造成严重威胁，研究表明，结直肠癌患者的肠道微生物区系的紊乱与结直肠癌细胞的发生和发展密切相关。与健康人相比，结直肠癌患者肠道微生物群落结构发生了显著变化，导致与结直肠癌相关的致病菌的数量显著增加，如梭杆菌属、肠球菌属和弯曲杆菌属。目前，治疗结直肠癌的主要方法是化疗、放疗和手术，但其毒副作用大限制了临床应用，因此，增强免疫反应和改善肠道菌群是预防结直肠癌的有效策略。
[0003]植物乳杆菌属益生菌，其无污染、无残留，同时还可以提高免疫力，增加动物对疾病的抵抗力，已被广泛应用于酸奶发酵和泡菜生产。有研究发现在术后结直肠癌患者中使用益生菌的实验组复发率为10％，而不使用益生菌的对照组复发率为33.3％，也有一些研究分析了乳酸杆菌或其代谢物在CRC辅助治疗中的作用，如萨德吉等人发现热灭活的植物乳杆菌A7、鼠李糖乳杆菌GG和无菌细胞培养上清液对Caco
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2和HT
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29细胞具有抑制作用。尽管这些结果支持了实验室辅助治疗CRC的可行性，但都没有直接证实实验室辅助治疗CRC的分子机制，因此，有必要进一步研究乳酸菌抑制结直肠癌发生发展的分子机制，筛选出能够阻断HT
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29细胞的细胞周期、诱导HT
‑r/>29细胞凋亡抑制HT
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29细胞的增殖的植物乳杆菌，对结直肠癌的预防和抗结直肠癌益生菌辅助治疗具有重要意义。

技术实现思路

[0004]针对上述现有技术中存在的不足，提供一株具有抑制结直肠癌细胞HT
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29增殖的植物乳杆菌AY01及其应用。该植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)AY01是从云南传统发酵食品中分离的乳酸菌库中筛选而得，命名为：植物乳杆菌AY01，已于2022年9月27日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC，地址：湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山17)，保藏编号为:CCTCC M 20221517。
[0005]本专利技术采取的技术方案如下：
[0006]一株植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)AY01，所述植物乳杆菌AY01保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 20221517。
[0007]进一步地，所述植物乳杆菌具有阻断HT
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29细胞的细胞周期、诱导HT
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29细胞凋亡抑制HT
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29细胞增殖的特性。
[0008]一株植物乳杆菌的发酵上清液/菌悬液在制备抑制肿瘤或抑制肿瘤细胞增殖产品中的应用。
[0009]进一步地，所述肿瘤为结直肠癌；所述肿瘤细胞为结直肠癌细胞HT
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29。
[0010]本专利技术的有益效果如下：
[0011]本专利技术的植物乳杆菌AY01是从云南传统发酵食品中分离的乳酸菌库中筛选得到具有肿瘤抑制作用的菌株，通过流式细胞仪检测和转录组检测，该植物乳杆菌具有诱导HT
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29细胞凋亡和阻断HT
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29细胞的细胞周期抑制肿瘤增殖的特性；小鼠实验结果表明，该菌株发酵的上清液和活菌菌悬液显著降低了小鼠结肠炎相关性结直肠癌的敏感性，为抗结直肠癌益生菌辅助治疗提供理论支持。
附图说明
[0012]图1本专利技术的植物乳杆菌AY01菌落形态图；
[0013]图2为本专利技术的植物乳杆菌AY01系统进化树；
[0014]图3为本专利技术实施例3经浓度为1mg
·
mL
‑1的植物乳杆菌培养上清液冻干粉处理后HT
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29细胞的生长曲线图；
[0015]图4为本专利技术实施例3植物乳杆菌AY01上清液阻断HT
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29细胞的细胞周期图；
[0016]图5为本专利技术实施例3植物乳杆菌AY01上清液诱导HT
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29细胞的凋亡结果图；
[0017]图6为本专利技术实施例3含和不含植物乳杆菌AY01上清液的HT
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29细胞中基因表达水平的差异结果图；
[0018]图7为本专利技术实施例4小鼠结肠组织样品的H&E染色图。
具体实施方式
[0019]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0020]实施例1
[0021]植物乳杆菌株AY01的分离筛选、鉴定及保藏
[0022]1、从云南石林发酵羊奶中分离筛选所述植物乳杆菌，具体过程：吸取羊奶样品1mL放入5mL灭菌的生理盐水中，震荡混匀后取20uL接种到MRS液体培养基中，37℃静置培养48h，将菌液用生理盐水稀释一定梯度，取100μL直接涂于MRS平板，在37℃培养48h后，挑选形态不同的单菌落，接种至MRS液体培养基中，37℃静置培养48h后，用50％甘油保存至
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80℃冰箱备用。
[0023]2、菌种形态学鉴定：将筛选得到的菌株进行革兰氏染色，用显微镜的油镜观察细菌的形态及颜色，该菌株为革兰氏阳性菌，短杆状，表面光滑，细密，色白，植物乳杆菌AY01的菌落形态如图1所示。
[0024]3、菌株的分子生物学鉴定：将菌株接种于MRS的液体培养基中，放置到37℃恒温培养箱进行活化培养，然后提取菌株的基因组DNA(DNA提取采用试剂盒QIAamp genomic DNA and RNA kits进行)，使用细菌16S rRNA基因通用引物27F(5'
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AGAGTTTGATCCTGGCTCAG
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3')和1492R(5'
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TACGACTTAACCCCAATCGC
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3')对该离菌株的16S rRNA基因进行PCR扩增。反应体系：2
×
TaqPCR Master Mix 12.5μL、上下游引物各1μL、DNA模板1μL、ddH2O 9.5μL；反应程序：95℃3min；95℃15s，55℃15s，72℃30s，30个循环；72℃5min；PCR产物送测序公司基因序列测定见序列表，然后将所测的16S rRNA基因序列在NCBI数据库的GenBank中进行Blast比
对，并应用MEGA 7.0软件构建系统进化树，构建系统进化树见图2。
[0025]实验结果：从云南省石林发酵羊奶中筛选出的菌株，经形态观察、构建系统进化树、16SrRNA基因序列比对，该菌株AY01鉴定为植物乳杆菌。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)AY01，其特征在于，所述植物乳杆菌AY01保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 20221517。2.如权利要求1所述的一株植物乳杆菌，其特征在于，所述植物乳杆菌具有阻断HT
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29细胞的细胞周期、诱导HT
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【专利技术属性】
技术研发人员：危勇华，柳陈坚，孙世意，赵志敏，
申请(专利权)人：朗恒科技集团有限公司，
类型：发明
国别省市：