一种SARS-CoV-2S1蛋白的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种SARS

【技术实现步骤摘要】
一种SARS
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CoV
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2 S1蛋白的检测方法


[0001]本专利技术涉及一种SARS
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CoV
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2 S1蛋白的检测方法，属于生物分析


技术介绍

[0002]SARS
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CoV
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2是一种单链RNA病毒，病毒颗粒表面的刺突糖蛋白(S 蛋白)作为冠状病毒感染宿主细胞的关键蛋白，结合宿主细胞的血管紧张素转化酶Ⅱ(ACE2)，宿主细胞内2型跨膜丝氨酸蛋白酶将S蛋白裂解成 S1和S2两部分，S1具有与宿主细胞结合的受体结合区(RBD)，变异性较大，在不同病毒或同一病毒不同毒株间有明显差异。因此，实现SARS
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CoV
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2S1蛋白的高灵敏、特异性检测，对于阻断新冠病毒传播具有重要意义。
[0003]对于实现新型冠状病毒的快速、准确检测，目前最常用的检测技术包括核酸检测、血清学检测等方法。SARS
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CoV
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2核酸检测是在采用宏基因组新一代测序技术确定核本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种SARS
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CoV
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2S1蛋白的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)利用离心破裂SARS
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CoV
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2病毒颗粒，再用甲酸和乙腈进行蛋白质提取，最后通过尺寸排阻色谱进行S1蛋白的纯化；(2)利用溶液酶解的方法，进行蛋白质样品预处理；(3)利用C18色谱柱实现样品分离，再用orbitrap高分辨质谱进行数据采集；(4)利用DDA模式挑选出特异性肽段，构建出PRM模式的肽段库；(5)利用构建的PRM肽段库进行待分析肽段样品的SARS
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CoV
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2S1蛋白的鉴定。2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(1)所述的提取蛋白质溶液的过程为：将SARS
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CoV
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2病毒颗粒在60000
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80000g高转速下离心1
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3h，破碎病毒颗粒；然后用50
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80％(v/v)甲酸振荡悬浮沉淀物，随后加入等体积的乙腈振荡；最后用14000
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16000g离心5
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20min，取出上清液，即提取出的蛋白质溶液。3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(2)所述的溶液酶解方法包括：将SARS
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CoV
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2S1蛋白用水溶解，加入尿素溶液混匀；添加二硫苏糖醇或三(2
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羧乙基)膦在37
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56℃处理0.5
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2h，将S1蛋白进行变性还原处理；随后加入碘乙酰胺，室温避光烷基化25
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40min；加入碳酸氢铵溶液稀释尿素，最后加入胰蛋白酶酶解12
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16h；将得到的肽段用除盐柱进行除盐处理，并冻干，得到SARS
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CoV
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2S1肽段样品。4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(3)所述的C18色谱柱包括：25μm内径、10
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15cm长的C18反相柱，填料粒径为1.9μm。5.如...

【专利技术属性】
技术研发人员：张丽华，周雯，随志刚，刘健慧，贺映云，袁辉明，赵宝锋，杨开广，张玉奎，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：