一种基于a1离子的深度覆盖蛋白质组学定量方法技术

本发明专利技术涉及一种基于a1离子的深度覆盖蛋白质组学定量方法。该方法首先对生物样品使用蛋白质组预处理获得酶解肽段，然后使用二甲基试剂对肽段进行标记并进行二维或二维以上分离，进而使用多质量范围及优化的质谱参数进行数据采集，提取高质量范围的谱图信息并借助搜索引擎进行定性分析，提取低质量范围的a1离子强度进行定量分析。该方法避免了检测器采集过程中对高质量端离子的歧视效应以及高丰度a1离子对低丰度离子的信号掩盖，进而提升了覆盖深度。本发明专利技术能够高灵敏度、高覆盖度、高准确度、动态范围宽的实现蛋白质组样品的深度覆盖定量分析，从而广泛应用于生物样品在不同生长条件、疾病状态下的蛋白质表达、以及蛋白质的亚细胞定位和动态相互作用网络研究等，以深入了解复杂的蛋白质特性和行为。了解复杂的蛋白质特性和行为。了解复杂的蛋白质特性和行为。

【技术实现步骤摘要】
一种基于a1离子的深度覆盖蛋白质组学定量方法


[0001]本专利技术涉及一种基于a1离子的蛋白质组学深度覆盖定量方法，对生物样品使用蛋白质组预处理获得酶解肽段，经二甲基标记后结合二维或二维以上分离，并使用多质量范围及优化的质谱参数进行数据采集，显著提升了定量准确度、覆盖深度、动态范围等，可以应用于生物样品在不同生长条件、疾病状态下的蛋白质表达、以及蛋白质的亚细胞定位和动态相互作用网络研究，从而深入了解复杂的蛋白质特性和行为。

技术介绍

[0002]蛋白质作为生命活动的执行者，对其进行全面的定性和定量有助于帮助人们理解蛋白质在生物、生理和病理等生命过程中所起的作用(Mass Spectrom.Rev.2021,06,1)。随着液相色谱
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质谱(LC
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MS)的速度、灵敏度和分辨率的提高，以及数据处理算法等技术的进步，较定性而言更深入的定量蛋白质组学作为新兴领域已成为重要的研究内容之一(Anal.Bioanal.Chem.2012,404,939)，深入地对生物在不同状态下的差异蛋白质组分析可为理解生命活动提供重本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于a1离子的深度覆盖蛋白质组学定量方法，其特征在于：对生物样品使用蛋白质组预处理获得酶解肽段，然后使用二甲基试剂对肽段进行标记并进行二维或二维以上分离，进而使用多质量范围及优化的质谱参数进行质谱数据采集，提取高质量范围的谱图信息进行定性分析，提取低质量范围的a1离子强度进行定量分析，最终获得深度覆盖的蛋白质组定量结果。2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：蛋白质组预处理使用有机溶剂(包括尿素、SDS、SDC、CHAPS、Triton X
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100、离子液体中的一种或二种以上)对生物样品进行蛋白质变性提取，每毫克蛋白加二硫苏糖醇(DTT)至终浓度为100
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200mM，30
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100℃反应0.01
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2.0h,以实现蛋白质的还原；再每毫克蛋白加碘乙酰胺(IAA)至终浓度10
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400mM，避光条件下反应30
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60min，以实现蛋白质的烷基化；按照酶/蛋白比例为1:30至1:100(w/w)加入胰蛋白酶，37℃酶解过夜得到肽段。3.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：二甲基试剂标记采用二甲基试剂组合甲醛和NaBH3CN及其同位素形式对肽段进行标记，pH值控制在3.0～10.0，标记时间5～120min。4.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：二维或三维以上分离包括pH＝3
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6的酸性条件下的反相色谱分离(LpH RPLC)、pH＝8
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11的碱性条件下的反相色谱(HpH RPLC)、阳离子交换色谱(CEC)、阴离子交换色谱(AEC)、体积排阻色谱(SEC)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS
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PAGE)、毛细管电泳(CE)、高场非对称...

【专利技术属性】
技术研发人员：张丽华，王芷婷，刘健慧，杨开广，梁振，张玉奎，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：