免疫层析试验片制造技术

本发明专利技术提供一种不受检测对象物质的浓度影响的包含对照线检测试剂的免疫层析试验片。本发明专利技术的免疫层析试验片的特征在于，是用于将生物体试样中的检测对象物质定量的免疫层析试验片，具有：a)结合垫，其浸渗有与所述检测对象物质特异性地结合的检测试剂及对照线检测试剂；以及b)多孔膜垫，其在上游侧固定化有用于捕捉检测对象物质的抗体，并且在下游侧固定化有用于特异性地捕捉对照线检测试剂的抗体。化有用于特异性地捕捉对照线检测试剂的抗体。化有用于特异性地捕捉对照线检测试剂的抗体。

【技术实现步骤摘要】
免疫层析试验片
[0001]本申请是申请日为2016年10月13日、申请号为201680060111.9、专利技术名称为“免疫层析试验片”的专利技术专利申请的分案申请。


[0002]本专利技术涉及基于免疫层析法的生物体试样中所含的检测对象物质的检测方法、用于检测的试剂盒、该试剂盒的制造方法。

技术介绍

[0003]所谓免疫层析法，是如下的免疫测定法，即，从固定化有与检测对象物质特异性地结合的抗体的多孔支撑体的一端，生物体试样借助毛细管现象在多孔支撑体内一边移动一边展开，在该过程中经过标记的检测对象物质与抗体因免疫反应而结合，从而随着时间的推移而集聚，在局部发生显色，由此判定生物体试样中的检测对象物质的有无。
[0004]作为免疫层析法的优点，可以举出操作简便、能够目视判定等。利用了这些优点的妊娠检查药、流感诊断药等体外诊断药已经在世界上普及，作为POCT(Point Of Care Testing)受到关注(专利文献1)。
[0005]所谓POCT，是指医疗从业人员在被测者的旁边进行的临床检查。POCT与大型医院的中央检查室等中进行的临床检查不同，可以在当场瞬间地获得检查结果，因此在医疗现场需求日益高涨。
[0006]以往的免疫层析法通常是目视判定(定性评价)，然而近年来，不断开发出通过利用测定显色强度的层析读数仪等装置而将生物体试样中所含的检测对象物质的浓度定量化的技术。
[0007]作为所述定量化的手法，夹心法是代表性的方法。夹心法中利用检测对象物质中的表位不同的2种抗体。第一抗体作为与金胶体、着色胶乳、荧光粒子等检测粒子发生过敏反应的检测试剂使用。第二抗体作为固定于多孔支撑体的一端的捕捉抗体用于检测线的测定。此外，将与检测抗体特异性结合的抗体固定化于多孔支撑体的另一端而用于对照线的测定。生物体试样中所含的检测对象物质一边从多孔支撑体的一端展开，与检测抗体形成免疫复合体，一边移动，在检测线上与捕捉抗体接触而被捕捉并显色。未与检测对象物质形成免疫复合体的游离的检测试剂在检测线上通过，被对照线的抗体捕捉并显色。通过利用层析读数仪等装置读取这些显色强度，就可以将检测对象物质的浓度定量。
[0008]以往的免疫层析法中，由于在检测检测线和对照线时使用了共同的检测试剂，因此存在有对照线的显色强度受检测对象物质的浓度的影响而变化的问题。在生物体试样中存在有高浓度的检测对象物质的情况下，大量的检测粒子与检测对象物质形成免疫复合体，在上游侧的检测线处被捕捉，检测线的显色强度提高。另一方面，游离的检测试剂变少，因此存在有对照线的显色强度变低的问题。在生物体试样中存在低浓度的检测对象物质的情况下，由于与检测对象物质形成免疫复合体的检测粒子变少，因此游离的检测粒子在对照线处被大量地捕捉，其结果是，存在有对照线的显色强度提高的问题。
[0009]在免疫层析法的定量化中，有时为了测定检测试剂向多孔支撑体的流入量而使用对照线，因此在在多孔支撑体中展开有一定量的检测试剂的情况下，希望显色强度总是恒定。如果如前所述对照线的显色强度受检测对象物质的浓度的影响而变化，则会对测定精度造成很大的影响。
[0010]现有技术文献
[0011]专利文献
[0012]专利文献1：日本特开2006
‑
67979号公报

技术实现思路

[0013]专利技术所要解决的问题
[0014]本专利技术的目的在于，鉴于上述的问题，作为不受检测对象物质的浓度影响的检测试剂提供一种对照线检测试剂，由此提供与以往相比高精度的免疫层析分析方法、使用了该分析方法的免疫层析试验片及试剂盒、试剂盒的制造方法。
[0015]用于解决问题的方法
[0016]本专利技术为了解决上述问题进行了深入研究，结果发现，通过作为用于检测对照线的检测试剂，使用包含对照线检测试剂的检测试剂，可以不受生物体试样中的检测对象物质的浓度的影响，使对照线的显色强度稳定化。本专利技术人进一步基于该见解，完成了包含对照线检测试剂的免疫层析试验片、该试验片的制造方法、使用了该免疫层析试验片的生物体试样中的检测对象物质的定量法等专利技术。
[0017]即，代表性的本申请专利技术如下所示。
[0018](1)一种免疫层析试验片，其特征在于，是用于将生物体试样中的检测对象物质定量的免疫层析试验片，具有：
[0019]a)结合垫，其被浸渗有与所述检测对象物质特异性地结合的检测试剂及对照线检测试剂；以及
[0020]b)多孔膜垫，在上游侧固定化有用于捕捉检测对象物质的抗体，并且在下游侧固定化有用于特异性地捕捉对照线检测试剂的抗体。
[0021](2)根据(1)中记载的免疫层析试验片，其特征在于，所述对照线检测试剂包含结合有生物素标记蛋白的检测粒子。
[0022](3)根据(2)中记载的免疫层析试验片，其特征在于，所述蛋白质为微生物来源或动物来源的蛋白质。
[0023](4)根据(3)中记载的免疫层析试验片，其特征在于，所述微生物来源的蛋白质为封闭肽片段。
[0024](5)根据(3)中记载的免疫层析试验片，其特征在于，所述动物来源的蛋白质为牛血清白蛋白或酪蛋白。
[0025](6)根据(1)～(5)中任一项记载的免疫层析试验片，其特征在于，用于特异性地捕捉所述对照线检测试剂的抗体为抗生物素抗体。
[0026](7)一种生物体试样中的检测对象物质的定量方法，其使用(1)～(6)中任一项记载的免疫层析试验片。
[0027](8)一种免疫层析分析试剂盒，其包含(1)～(6)中任一项记载的免疫层析试验片、
样品稀释液及分析装置。
[0028](9)一种免疫层析试验片的制造方法，是(1)～(6)中任一项记载的免疫层析试验片的制造方法。
[0029]专利技术效果
[0030]根据本专利技术的免疫层析试验片，由于可以不依赖于生物体试样中的检测对象物质的浓度地使对照线的显色强度稳定化，因此可以提供测定精度高的免疫层析试验片。
附图说明
[0031]图1是表示本专利技术中使用的免疫层析试验片的一例的俯视图。
[0032]图2是表示本专利技术中使用的免疫层析试验片的一例的侧视图。
[0033]图3表示使用本专利技术的免疫层析试验片测定人绒毛膜促性腺激素(hCG)时的照片。
[0034]图4表示使用本专利技术的免疫层析试验片测定人绒毛膜促性腺激素(hCG)时的稀释直线性。
[0035]图5表示使用以往的免疫层析试验片测定人绒毛膜促性腺激素(hCG)时的照片。
[0036]图6表示使用以往的免疫层析试验片测定人绒毛膜促性腺激素(hCG)时的稀释直线性。
具体实施方式
[0037]对本专利技术的免疫层析试验片的一个实施方式进行说明。作为本专利技术的实施方式，是包含与检测对象物质特异性地结合的检测试剂和对照线检测试剂的免疫层析试验片。
[0038](对照线检测试剂)
[0039]本专利技术中所用的对照线检测试剂是结合有生本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.封闭肽片段、牛血清白蛋白或酪蛋白用于制造免疫层析试验片的用途，其中所述疫层析试验片具有：a)结合垫，其浸渗有与检测对象物质特异性地结合的检测试剂及对照线检测试剂；以及b)多孔膜垫，其在上游侧固定化有用于捕捉检测对象物质的抗体，并且在下游侧固定化有用于特异性地捕捉对照线检测试剂的抗体，其中所述对照线检测试剂包含结合有生物素标记蛋白的检测粒子，所述蛋白为所述封闭肽片段、牛血清白蛋白或酪蛋白。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，用于特异性地捕捉所述对照线检测试剂的抗体为抗生物素抗体。3.封闭肽片段、牛血清白蛋白或酪蛋白用于使用免疫层析试验片定量生物体试样中的检测对象物质的用途，其中所述疫层析试验片具有：a)结合垫，其浸渗有与所述检测对象物质特异性地结合的检测试剂及对照线检测试剂；以及b)多孔膜垫，其在上游侧固定化有用于捕捉检测对象物质的抗体，并且在下游侧固定化有用于特异性地捕捉对照线检测试剂的抗体，其中所述对照线检测试剂包含结合有生物素标记蛋白的检测粒子，所述蛋白为所述封闭肽片段、牛血清白蛋白或酪蛋白。4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，用于特异性地捕捉所述对照线检测试剂的抗体为抗生物素抗体。5.封闭肽片段、牛血清白蛋白或酪蛋白用于制造免疫层析分析试剂盒的用途，其中所述免疫层析分析试剂盒包括免疫层析试验片、样品稀释液及分析装置，其中所述疫层析试验片具有：a)结合垫，其浸...

【专利技术属性】
技术研发人员：川南裕，辻裕二，米田圭三，
申请(专利权)人：东洋纺株式会社，
类型：发明
国别省市：