侧流层析免疫检测试剂盒及其应用制造技术

本公开涉及侧流层析免疫检测试剂盒及其制备方法。本公开涉及一种侧流免疫检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：试剂条，所述试纸条包括信号叠色垫；第一信号叠色试剂，其包括过氧化氢；和，第二信号叠色试剂，其包括酪酰胺，其中，所述信号叠色垫设置在样品垫和反应结合垫上；其中，所述信号叠色垫包被有用于偶联酪酰胺的物质。本公开还涉及使用本公开的试剂盒进行检测的方法。试剂盒进行检测的方法。

【技术实现步骤摘要】
侧流层析免疫检测试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及免疫检测领域，尤其涉及侧流层析免疫检测试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]免疫层析是一种即时诊断技术，由于该技术的简便、快速以及低制造成本，在全世界具有广泛的使用。例如，用于妊娠检测的免疫层析是典型的非处方检测方法，在20世纪80年代就被商业化应用。经过20多年的发展，免疫层析已经在临床、农业、生物防疫和环境检测等领域被广泛使用，涉及到的项目从最初的妊娠，扩展到传染病、毒品、食品安全等多领域的抗原或抗体的检测。
[0003]免疫层析的原理主要基于抗原抗体的特异性结合和显色。以硝酸纤维膜为载体，将特异性抗原与胶体金结合并固定在结合垫上，当检测样品中有目标抗体或抗原时，目标抗体或抗原与试纸条中的标记抗原或抗体结合，产生抗原抗体复合物，试纸条硝酸纤维膜上预留的特异性抗体会捕获这种带有显色标志的抗原抗体复合物，试纸条显色，表明检测样品呈阳性；若待测样品中不含目标抗体，试纸条则不显色，表明检测样品呈阴性。该技术检测样品可采用静脉全血、血清或血浆、唾液等形式，具有便捷、成本低、适用于居家自测等优势。
[0004]然而，现有的免疫层析技术仍然存在灵敏度低、特异性差等缺点。免疫层析技术虽然简便实惠，但是其检出能力上相较于核酸检测仍然存在很大的差距。目前，有很多的研究者均对免疫层析技术进行过改良优化，以提高该技术的检测灵敏度，较为常见的方法包括银离子增强，金离子增强以及纳米金花技术，但均由于这些技术稳定性差和可重复性低等缺点无法得到普及。
[0005]因此，需要新的方案来提高免疫层析技术的灵敏度与特异性。

技术实现思路

[0006]为了解决现有技术中存在的上述技术问题之一，本公开提供了一种基于酪酰胺(tyramine)化学叠色的信号叠色免疫层析检测新方法。本公开利用酪酰胺化学增强反应，对免疫层析试纸条的显色区域进行叠色，从而实现检测信号的放大。另外，本公开还进一步结合新型层析方式，最终实现在保持原有层析技术简便性的同时，大幅提升其检测灵敏度和检测线性范围。
[0007]根据本公开的一个方面，提供了一种侧流免疫检测试剂盒，所述试剂盒包括：试剂条，所述试纸条包括信号叠色垫；第一信号叠色试剂，其包括过氧化氢；和，第二信号叠色试剂，其包括酪酰胺，其中，所述信号叠色垫设置在样品垫和反应结合垫上；所述叠色垫包被有用于偶联酪酰胺的物质。
[0008]在一些实施方式中，所述第一信号叠色试剂可以包括0.00196％～0.0021％(体积比)的过氧化氢(即，每100mL添加5.6～6μL 35％过氧化氢)。在一些实施方式中，所述第一信号叠色试剂还可以包括约10～15mg/mL的Tris、5～10mg/mL的氯化钠，0.5mg/mL的叠氮化
钠，1～2％(体积比)的吐温20，和/或5～10mg/mL的聚乙烯吡咯烷酮。在一些实施方式中，所述第一信号叠色试剂可以包括约10～15mg/mL的Tris、5～10mg/mL的氯化钠，0.5mg/mL的叠氮化钠，1～2％(体积比)的吐温20，5～10mg/mL的聚乙烯吡咯烷酮，和0.00196％～0.0021％(体积比)的过氧化氢。在一些实施方式中，所述第一信号叠色试剂可以包括约12.1mg/mL的Tris。在一些实施方式中，所述第一信号叠色试剂可以包括约0.5mg/mL的叠氮化钠。在一些实施方式中，所述第一信号叠色试剂的pH可以为8.2～8.6。
[0009]在一些实施方式中，所述第二信号叠色试剂可以包括与生物素/链霉亲和素、受体/配体偶联的酪酰胺。在一些实施方式中，所述第二信号叠色试剂可以包括生物素基酪酰胺。在一些实施方式中，所述第二信号叠色试剂可以包括0.01～0.02mg/mL的生物素基酪酰胺。在一些实施方式中，所述第二信号叠色试剂还可以包括10～15mg/mL的Tris，5～10mg/mL的氯化钠，0.1～1mg/mL的叠氮化钠，1～2％(体积比)吐温20，和/或5～10mg/mL的聚乙烯吡咯烷酮。在一些实施方式中，所述第二信号叠色试剂可以包括10～15mg/mL的Tris，5～10mg/mL的氯化钠，0.1～1mg/mL的叠氮化钠，1～2％(体积比)吐温20，5～10mg/mL的聚乙烯吡咯烷酮，和0.01～0.02mg/mL的生物素基酪酰胺。在一些实施方式中，所述第二信号叠色试剂可以包括12.1mg/mL的Tris。在一些实施方式中，所述第二信号叠色试剂可以包括0.5mg/mL的叠氮化钠。在一些实施方式中，所述第二信号叠色试剂pH可以为8.2～8.6。
[0010]在一些实施方式中，所述试剂盒还可以包括样本裂解液，其包括10～15mg/mL的Tris，5～10mg/mL的氯化钠，0.1～1mg/mL的叠氮化钠，1～2％(体积比)曲拉通X
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100，和/或0.5～1％(体积比)的吐温20。在一些实施方式中，所述样本裂解液可以包括12.1mg/mL的Tris。在一些实施方式中，所述样本裂解液可以包括0.5mg/mL的叠氮化钠。在一些实施方式中，所述样本裂解液的pH可以为8.2～8.6。
[0011]在一些实施方式中，所述试剂盒还可以包括上样缓冲液，其包括10～15mg/mL的Tris，5～10mg/mL的氯化钠，3～5mg/mL的氯化钾，0.1～1mg/mL的叠氮化钠，0.5～1％(体积比)的吐温20，5～10mg/mL的聚乙烯吡咯烷酮，和/或5～10mg/mL的酪蛋白。在一些实施方式中，所述上样缓冲液可以包括12.1mg/mL的Tris。在一些实施方式中，所述上样缓冲液可以包括0.5mg/mL的叠氮化钠。在一些实施方式中，所述上样缓冲液的pH可以为8.2～8.6。
[0012]在一些实施方式中，所述信号叠色垫包被的用于偶联酪酰胺的物质可以包括链霉亲和素/生物素、配体/受体。在一些实施方式中，所述信号叠色垫可以包被有链霉亲和素。在一些实施方式中，所述链霉亲和素可以结合在第一标记物上。在一些实施方式中，所述第一标记物可以选自胶体金、乳胶微球、量子点、荧光染料、时间分辨荧光微球、上转换发光微球、磁性微球。在优选的实施方式中，所述第一标记物选自乳胶微球或胶体金。
[0013]在一些实施方式中，所述样本垫和/或所述信号叠色垫可以经预处理缓冲液包被。在一些实施方式中，所述预处理缓冲液可以包括有50～150mM的Tris、5～10mg/mL的NaCl、0.1％～1％的Tween
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20(体积比)和5～20mg/mL的酪蛋白。在一些实施方式中，所述预处理缓冲液可以包括有100mM的Tris。
[0014]在一些实施方式中，所述反应结合垫可以包被有辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗体或抗原。在一些实施方式中，所述HRP标记的抗体或抗原可以结合在第二标记物上。在一些实施方式中，所述第二标记物选自胶体金、乳胶微球、量子点、荧光染料、时间分辨荧光微球、上转换发光微球、磁性微球。在优选的实施方式中，所述第二标记物选自乳胶微球或胶
体金。
[0015]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种侧流免疫检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：试剂条，所述试纸条包括信号叠色垫；第一信号叠色试剂，其包括过氧化氢；和，第二信号叠色试剂，其包括酪酰胺，其中，所述信号叠色垫设置在样品垫和反应结合垫上；其中，所述信号叠色垫包被有用于偶联酪酰胺的物质。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第一信号叠色试剂包括0.00196％～0.0021％(体积比)的过氧化氢，优选地，所述第一叠色试剂还包括10～15mg/mL的Tris、5～10mg/mL的氯化钠，0.5mg/mL的叠氮化钠，1～2％(体积比)的吐温20，和/或5～10mg/mL的聚乙烯吡咯烷酮。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第二信号叠色试剂包括与生物素/链霉亲和素、受体/配体偶联的酪酰胺；优选地，所述第二信号叠色试剂包括生物素基酪酰胺；优选地，所述第二信号叠色试剂包括0.01～0.02mg/mL的生物素基酪酰胺，优选地，所述第二叠色试剂还包括10～15mg/mL的Tris，5～10mg/mL的氯化钠，0.1～1mg/mL的叠氮化钠，1～2％的吐温20，和/或5～10mg/mL的聚乙烯吡咯烷酮。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括样本裂解液，优选地，所述样本裂解液包括10～15mg/mL的Tris，5～10mg/mL的氯化钠，0.1～1mg/mL的叠氮化钠，1～2％(体积比)曲拉通X
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100，和/或0.5～1％(体积比)的吐温20。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括上样缓冲液，优选地，所述上样缓冲液包括10～15mg/mL的Tris，5～10mg/mL的氯化钠，3～5mg/mL的氯化钾，0.1～1mg/mL的叠氮化钠，0.1～0.2％(体积比)的曲拉通X
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100，5～10mg/mL的聚乙烯吡咯烷酮，和/或5～10mg/mL的酪蛋白。6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述信号叠色垫包被的用于偶联酪酰胺的物质包括链霉亲和素/生物素、配体/受体；优选地，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：揭辉洋，刘倩，王秀珍，王煜，徐涛，
申请(专利权)人：广州国家实验室，
类型：发明
国别省市：