靶向SARS-CoV-2RBD与其受体ACE2共享表位的驼源纳米抗体制造技术

本发明专利技术提供靶向SARS

【技术实现步骤摘要】
靶向SARS
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CoV
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2 RBD与其受体ACE2共享表位的驼源纳米抗体


[0001]本专利技术属于抗体
，具体涉及一种靶向SARS
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CoV
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2 RBD与其受体ACE2共享表位的驼源纳米抗体，以及该抗体在预防和/或治疗与SARS
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2病毒感染相关的疾病中的用途。

技术介绍

[0002]SARS
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2是单链正义RNA包膜病毒，其膜表面表达有众多的刺突蛋白(spike protein，S
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protein，简称S蛋白)，由此形成了SARS
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2的花冠外观。S蛋白实际为同源三聚体蛋白，每个蛋白单体包含一个S1亚基(14
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685aa)与一个S2亚基(686
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1273aa)。S蛋白可识别并结合细胞膜表面的血管紧张素转化酶2受体(angiotensin converting enzyme 2，ACE2)，并且在经过细胞表面的丝氨酸蛋白酶TMPRSS2的切割处理后，介导病毒包膜与细胞膜融合，促使病毒RNA基因组进入宿主细胞。这其中S1亚基的受体结合结构域(Receptor
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binding domain，RBD)是研究SARS
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2与ACE2受体结合以及抗体识别的关键区域，被认为是迄今为止最有效的抗SARS
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2中和抗体(neutralizing antibodies,NAbs)的靶标。
[0003]中和抗体疗法是人类应对重大公共卫生危机过程中的有利武器之一，因其能达到治疗加预防的双重效果而备受关注和期待。中和抗体发挥作用往往是通过与病毒RBD结合，进而阻止病毒吸附于ACE2受体，使其不能穿入胞内进行复制增殖，此外中和抗体与病毒形成免疫复合物，易被巨噬细胞吞噬清除。
[0004]驼源免疫球蛋白的单域抗体(single domain antibody，sdAb)是一种天然缺失轻链的抗体，只包含一个重链可变区和两个常规的CH2与CH3区。单域抗体通过其重链上可变区结合抗原，该可变区可以单独稳定地在体外存在，被称为重链可变区单域抗体(variable domain of heavy chain of heavy
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chain antibody，VHH)或者纳米抗体(nanobody，Nb)，分子量为12
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15千道尔顿(KDa)，是目前已知的能与抗原结合的最小片段，相比传统的单抗(150KDa)更进一步具有多个特征，例如存在更多的可获得表位、相对较低的生产成本、更高的组织穿透力、在原核表达系统中也更易于生产等。

技术实现思路

[0005]在本专利技术中利用噬菌体展示技术进行纳米抗体筛选，该技术利用基因工程方法，将外源性基因片段插入到噬菌体的基因组中，使其编码的蛋白或多肽与噬菌体衣壳蛋白形成融合蛋白，得以展示于噬菌体表面。被展示的蛋白可以保持相对的空间结构和生物活性，因而以靶蛋白为“鱼饵”钓出与其结合的目的蛋白，可达到对噬菌体库的筛选。
[0006]基于噬菌体展示的方法、纳米抗体的优良生物特性及RBD与ACE2结合介导病毒进入宿主细胞的基本原理，本专利技术是利用构建的噬菌体纳米抗体免疫文库，以野生型SARS
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2 RBD(记为SARS
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2 RBD WT)为靶标抗原，采用RBD
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ACE2竞争淘选的方法淘筛纳米抗体，并对筛选得到的VHH进行表达和鉴定，针对SARS
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2 RBD重组蛋白特异性结合的高亲和力纳米抗体。
[0007]在一种实施方式中，本专利技术提供靶向SARS
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2 RBD与其受体ACE2共享表位的驼源纳米抗体或其抗原结合片段，所述纳米抗体或其抗原结合片段与SARS
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2 RBD的关键位点F486、Q493和S494同时结合，所述纳米抗体或其抗原结合片段与以下SEQ ID NO:1具有至少95％的同源性：ATGGCCCAGTTGCAGCTCGTGGAGTCCGGAGGAGGCGCGGTGCAGCCTGGGGGGTCTCTGACACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGAACCATCAGTCACTATCGCATGGGCTGGTACCGCCAACGTCCAAGGGGGCCGCGCGAGAAGGTTGCGATCATTACTATTAATGCTTCGACTGACTATGACGGCTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCGGTTTATCTCCAAATGAACAACCTGAAACCTGAGGACACGGCCGTCTATTACTGTAACACCGACCCCCCGGGACTGTCTCAGAATGACTACTGGGGGCCGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCAGCGCACCACAGCGAAGACCCC。
[0008]在一种实施方式中，纳米抗体或其抗原结合片段是SEQ ID NO:1：ATGGCCCAGTTGCAGCTCGTGGAGTCCGGAGGAGGCGCGGTGCAGCCTGGGGGGTCTCTGACACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGAACCATCAGTCACTATCGCATGGGCTGGTACCGCCAACGTCCAAGGGGGCCGCGCGAGAAGGTTGCGATCATTACTATTAATGCTTCGACTGACTATGACGGCTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCGGTTTATCTCCAAATGAACAACCTGAAACCTGAGGACACGGCCGTCTATTACTGTAACACCGACCCCCCGGGACTGTCTCAGAATGACTACTGGGGGCCGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCAGCGCACCACAGCGAAGACCCC。
[0009]在一种实施方式中，本专利技术提供一种分离的核酸分子，其编码权利要上述的靶向SARS
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2 RBD与其受体ACE2共享表位的驼源纳米抗体或其抗原结合片段。
[0010]在一种实施方式中，本专利技术提供包含上述抗体的抗体缀合物。
[0011]在一种实施方式中，本专利技术提供包含上述靶向SARS
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2 RBD与其受体ACE2共享表位的驼源纳米抗体或其抗原结合片段的组合物。
[0012]在一种实施方式中，本专利技术提供包含上述靶向SARS
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.靶向SARS
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2RBD与其受体ACE2共享表位的驼源纳米抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述纳米抗体或其抗原结合片段与SARS
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2RBD的关键位点F486、Q493和S494同时结合，所述纳米抗体或其抗原结合片段与以下SEQ ID NO:1具有至少95％的同源性：ATGGCCCAGTTGCAGCTCGTGGAGTCCGGAGGAGGCGCGGTGCAGCCTGGGGGGTCTCTGACACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGAACCATCAGTCACTATCGCATGGGCTGGTACCGCCAACGTCCAAGGGGGCCGCGCGAGAAGGTTGCGATCATTACTATTAATGCTTCGACTGACTATGACGGCTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCGGTTTATCTCCAAATGAACAACCTGAAACCTGAGGACACGGCCGTCTATTACTGTAACACCGACCCCCCGGGACTGTCTCAGAATGACTACTGGGGGCCGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCAGCGCACCACAGCGAAGACCCC。2.根据权利要求1所述的驼源纳米抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述纳米抗体或其抗原结合片段是SEQ ID NO:1：ATGGCCCAGTTGCAGCTCGTGGAGTCCGGAGGAGGCGCGGTGCAGCCTGGGGGGTCTCTGACACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGAACCATCAGTCACTATCGC...

【专利技术属性】
技术研发人员：王建勋，和似琦，王伽利，陈汉祎，钱朝晖，胡克平，
申请(专利权)人：深圳北京中医药大学研究院，
类型：发明
国别省市：