重组牛痘病毒制造技术

本发明专利技术提供人IL

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】重组牛痘病毒
[0001]相关申请参考
[0002]本申请要求2020年7月14日提交的美国临时专利申请号63/051,628和2020年7月14日提交的美国临时专利申请号63/051,890的利益。各临时申请的内容以其整体通过引用并入本文。
[0003]序列表参考
[0004]本申请通过EFS
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Web电子提交并包括电子提交的.txt格式序列表。.txt文档含有创建于2021年6月22日的名为“PC72649A_SequenceListing_ST25.txt”的序列表并且大小为80KB。该.txt文档含有的序列表是说明书的一部分且以其整体通过引用并入本文。

技术介绍

[0005]白介素
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2(IL
‑
2)是对哺乳动物免疫系统的多种功能诸如刺激T细胞及自然杀伤细胞生长很重要的细胞因子且已批准作为用于癌症的免疫治疗剂。然而，各种因素(例如狭窄治疗范围；潜在严重副作用)已限制其临床用途。使用IL
‑
2作为抗癌剂的局限性之一在于尽管其可刺激并扩增效应T细胞及NK细胞(其等具有抗肿瘤活性)，其还可扩增抑制免疫反应的调节T细胞(Treg)。
[0006]通过IL
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2受体(IL
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2R)介导IL
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2信号传导，所述IL
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2受体以不同形式存在于不同细胞类型中。高亲和力IL
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2受体含有三个多肽链，称为IL
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2Rα(“IL
‑
2Rα”；还称为CD25)、IL
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2Rβ(“IL
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2Rβ”；还称为CD122)及IL
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2Rγ(“IL
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2Rγ”；还称为CD132)。所述高亲和力IL
‑
2R是持续性表达于Treg上并瞬时表达于活化的T细胞及NK细胞上。中等亲和力IL
‑
2R含有IL
‑
2Rβ及IL
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2Rγ多肽链，并表达(例如)于静止CD4+及CD8+T细胞及自然杀伤(NK)细胞上。低亲和力IL
‑
2R含有IL
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2Rα多肽链。
[0007]由于IL
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2经由高亲和力IL
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2R活化Treg细胞并经由中等亲和力IL
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2R活化静止CD4+及CD8+T细胞及自然杀伤(NK)细胞，因此用于选择性活化CD4+T细胞、CD8+T细胞及NK细胞而不活化Treg的一种可能方法是使IL
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2选择性靶向中等亲和力IL
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2R。鉴于高亲和力IL
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2受体与低亲和力IL
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2受体间的差异在于高亲和力IL
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2受体中存在IL
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2Rα多肽链，通过阻断或削弱IL
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2与IL
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2Rα多肽链之间的相互作用，IL
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2可潜在选择性靶向所述中等亲和力IL
‑
2R。
[0008]溶瘤病毒(OV)是选择性或优先感染并杀死癌细胞的病毒。已在各种人类癌症的临床试验中测试活复制型OV。OV可诱导抗肿瘤免疫反应，并直接裂解肿瘤细胞。OV可天然发生或可通过修饰其他病毒构建。常见OV包括其基于以下减毒毒株构建的那些：单纯疱疹病毒(HSV)、腺病毒(Ad)、麻疹病毒(MV)、柯萨奇病毒(CV)、水泡性口炎病毒(VSV)及牛痘病毒(VV)。
[0009]牛痘病毒(VV)是痘病毒科正痘病毒属的成员。所述病毒具有长约190kb的线性双链DNA基因组，其编码约200个基因。牛痘病毒在宿主细胞的细胞质中复制。大牛痘病毒基因组编码用于病毒DNA复制的各种酶及蛋白质。在复制期间，牛痘病毒产生数种其外膜不同的感染性形式：细胞内成熟病毒体(IMV)、细胞内被膜病毒体(IEV)、细胞相关被膜病毒体
(CEV)及细胞外被膜病毒体(EEV)。IMV是最丰富的感染性形式且认为负责在宿主之间传播；相信所述CEV在细胞间传播(cell
‑
to
‑
cell spread)中发挥作用；且认为所述EEV对宿主生物体内远距离播散很重要。EEV特异性蛋白由基因A33R、A34R、A36R、A56R、B5R及F13L编码。A34(由A34R基因编码的II型跨膜糖蛋白)参与诱导肌动蛋白尾、从感染细胞表面释放被膜病毒，及在配体结合后在病毒进入前破坏病毒被膜。

技术实现思路

[0010]在一些方面中，本专利技术提供人白介素2(IL
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2)变体，及相关融合蛋白、组合物、方法及用途。所述IL
‑
2变体保留结合至中等亲和力二聚体IL
‑
2受体复合物(含有IL
‑
2Rβ+IL
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2Rγ)的能力，但与IL
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2受体α(“IL
‑
2Rα”/CD25)的结合相较于野生型人IL
‑
2多肽减小或不结合至IL
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2受体α(“IL
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2Rα”/CD25)，或与高亲和力三聚体IL
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2受体复合物(含有IL
‑
2Rα+IL
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2Rβ+IL
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2Rγ)的结合相较于野生型人IL
‑
2多肽减小或不结合至。
[0011]本文提供的IL
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2变体相较于野生型人IL
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2氨基酸序列具有一或多个氨基酸取代。在一些实施方式中，所述IL
‑
2变体中的氨基酸取代导致IL
‑
2变体蛋白中的一或多个工程化N
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糖基化位点。
[0012]在一些实施方式中，分离的人白介素2(IL
‑
2)变体相较于野生型人IL
‑
2包含至少一个氨基酸取代，其中野生型人IL
‑
2具有如SEQ ID NO:1中显示的氨基酸序列及IL
‑
2变体包含选自由以下组成的群的氨基酸位置的一或多个取代：a)K35，b)R38及L40两者，c)T41及K43两者，d)K43及Y45两者，e)E62及K64两者，及f)L72及Q74两者。任选地，所述变体包含选自由以下组成的群的氨基酸位置的一或多个取代：a)K35，其中所述K35取代是K35N，b)R38及L40两者，其中所述R38取代是R38N及所述L40取代是L40S或L40T，c)T41及K43两者，其中所述T41取代是T41N及所述K43取代是K43S或K43T，d)K43及Y45两者，其中所述K43取代是K43N及所述Y45取代是Y45S或Y45T，e)E62及K64两者，其中所述E62取代是E62N及所述K64取代是K64S或K64T，及f)L72及Q本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种分离的人白介素2(IL
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2)变体，其相较于具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的野生型人IL
‑
2包含至少一个氨基酸取代，其中所述IL
‑
2变体包含选自由以下组成的群的氨基酸位置的一或多个取代：a)K35，b)R38及L40两者，c)T41及K43两者，d)K43及Y45两者，e)E62及K64两者，及f)L72及Q74两者。2.一种分离的融合蛋白，其包含：a)如权利要求1的IL
‑
2变体；及b)人抗体的Fc区，其中所述IL
‑
2变体共价连接至所述Fc区。3.一种分离的核酸，其编码如权利要求1的IL
‑
2变体。4.一种宿主细胞，其包含如权利要求1的分离的核酸。5.一种药物组合物，其包含如权利要求1的IL
‑
2变体。6.一种治疗对象的癌症的方法，其包括向有此需要的对象施用有效量的如权利要求5的药物组合物。7.一种重组溶瘤病毒(OV)，其包含编码如权利要求1的IL
‑
2变体的核苷酸序列。8.如权利要求7的OV，其中所述IL
‑
2变体包含选自由以下组成的群的氨基酸位置的一或多个取代：a)K35，其中所述K35取代是K35N，b)R38及L40两者，其中所述R38取代是R38N及所述L40取代是L40S或L40T，c)T41及K43两者，其中所述T41取代是T41N及所述K43取代是K43S或K43T，d)K43及Y45两者，其中所述K43取代是K43N及所述Y45取代是Y45S或Y45T，e)E62及K64两者，其中所述E62取代是E62N及所述K64取代是K64S或K64T，及f)L72及Q74两者，其中所述L72取代是L72N及所述Q74取代是Q74S或Q74T。9.如权利要求7的OV，其中所述IL
‑
2变体包含位置K35的取代，且其中所述IL
‑
2变体另外包含选自由以下组成的群的位置的取代：a)R38及L40两者，其中所述R38取代是R38N及所述L40取代是L40S或L40T，b)T41及K43两者，其中所述T41取代是T41N及所述K43取代是K43S或K43T，c)K43及Y45两者，其中所述K43取代是K43N及所述Y45取代是Y45S或Y45T，d)E62及K64两者，其中所述E62取代是E62N及所述K64取代是K64S或K64T，e)L72及Q74两者，其中所述L72取代是L72N及所述Q74取代是Q74S或Q74T，及f)E62，其中所述E62取代是E62N、E62A、E62K或E62R。10.如权利要求7的OV，其中所述IL
‑
2变体包含位置R38及L40的取代，且其中所述IL
‑
2变体另外包含选自由以下组成的群的位置的取代：a)T41及K43两者，其中所述T41取代是T41N及所述K43取代是K43S或K43T，b)K43及Y45两者，其中所述K43取代是K43N及所述Y45取代是Y45S或Y45T，c)E62及K64两者，其中所述E62取代是E62N及所述K64取代是K64S或K64T，d)L72及Q74两者，其中所述L72取代是L72N及所述Q74取代是Q74S或Q74T，及
e)E62，其中所述E62取代是E62N、E62A、E62K或E62R。11.如权利要求7的OV，其中所述IL
‑
2变体包含位置T41及K43的取代，且其中所述IL
‑
2变体另外包含选自由以下组成的群的位置的取代：a)E62及K64两者，其中所述E62取代是E62N及所述K64取代是K64S或K64T，b)L72及Q74两者，其中所述L72取代是L72N及所述Q74取代是Q74S或Q74T，及c)E62，其中所述E62取代是E62N、E62A、E62K或E62R。12.如权利要求7的OV，其中所述IL
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2变体包含位置K43及Y45的取代，且其中所述IL
‑
2变体另外包含选自由以下组成的群的位置的取代：a)E62及K64两者，其中所述E62取代是E62N及所述K64取代是K64S或K64T，b)L72及Q74两者，其中所述L72取代是L72N及所述Q74取代是Q74S或Q74T，及c)E62，其中所述E62取代是E62N、E62A、E62K或E62R。13.如权利要求7的OV，其中所述IL
‑
2变体包含位置E62及K64的取代，且其中所述IL
‑
2变体另外包含位置L72及Q74处的取代，其中所述L72取代是L72N及所述Q74取代是Q74S或Q74T。14.如权利要求7的OV，其中所述IL
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2变体包含位置R38、L40、K43及Y45的取代。15.如权利要求7的OV，其中所述IL
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2变体包含氨基酸取代R38...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：辉瑞公司，
类型：发明
国别省市：