HumanCD68的兔单克隆抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供Human CD68的兔单克隆抗体及其制备方法和应用。本发明专利技术具体提供Human CD68的高亲和力兔单克隆抗体，轻链互补决定区的序列分别如SEQ ID NO:5、SEID NO:6、SEQ ID NO:7所示，重链互补决定区的序列分别如SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10所示。本发明专利技术利用该Human CD68兔单克隆抗体开发的免疫组化检测方法，具有优异的特异性。具有优异的特异性。具有优异的特异性。

【技术实现步骤摘要】
Human CD68的兔单克隆抗体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及免疫检测
，具体涉及一种Human CD68的兔单克隆抗体及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]CD68是一种高度糖基化的跨膜蛋白，是目前常规应用最广泛的巨噬细胞标记物。CD68在巨噬细胞的吞噬活动，胞内溶酶体的新陈代谢，胞外的细胞与细胞以及细胞与病原体间的相互作用中发挥功能。CD68在不同类型的巨噬细胞中被检测出来，且与骨髓中的骨髓前体细胞发生反应。CD68阳性可见于Kupffer细胞、正常淋巴组织细胞、肥大细胞和小神经胶质细胞。在肿瘤组织中，CD68表达于纤维组织肿瘤、部分上皮肿瘤以及一些恶性黑色素瘤的上皮细胞。
[0003]但是，目前针对HumanCD68跨膜蛋白的高敏检测技术并未得到有效研究和开发。

技术实现思路

[0004]基于此，有必要提供针对HumanCD38的兔单克隆抗体及其制备方法和应用。该Human CD38的兔单克隆抗体适用于免疫组化检测人CD68蛋白，特异性好。
[0005]本专利技术采用如下技术方案：
[0006]本专利技术提供针对HumanCD68的兔单克隆抗体，兔单克隆抗体的轻链全长序列如SEQ ID NO:1所示，重链全长序列如SEQ ID NO:2所示，轻链可变区的序列如SEQ ID NO:3所示，重链可变区的序列如SEQ ID NO:4所示，轻链互补决定区的序列分别如SEQ ID NO:5、SEID NO:6、SEQ ID NO:7所示，重链互补决定区的序列分别如SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ IDNO:10所示。
[0007]本专利技术还可以提供编码上述针对HumanCD68的兔单克隆抗体的基因，或者包含该基因的表达载体或者宿主。
[0008]本专利技术还可以提供兔单克隆抗体偶联物，主要由上述针对人CD68的兔单克隆抗体与抗原和/或荧光标记分子反应制备而成。
[0009]本专利技术还可以提供针对HumanCD68的兔单克隆抗体在制备检测人CD68的试剂或者试剂盒中的应用。
[0010]所述检测的方法为免疫检测，所述免疫检测为免疫组织化学法、免疫印迹法中的一种。
[0011]本专利技术还提供用于制备针对HumanCD68的兔单克隆抗体的免疫原，所述免疫原为由蛋白KLH或BSA与如SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15所示氨基酸序列片段合成的重组蛋白。
[0012]本专利技术还提供针对Human CD68兔单克隆抗体的制备方法，包括如下步骤：将编码针对HumanCD68的兔单克隆抗体的重链基因、轻链基因分别装载在表达载体上，转染宿主；培养获得包含兔单克隆抗体的上清液；纯化，即得。
[0013]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0014]本专利技术选取人CD68蛋白第124
‑
135、146
‑
158位氨基酸片段为抗原，经与KLH或BSA偶联后为免疫原。利用免疫原对新西兰大白兔进行免疫，基于单个B淋巴细胞筛选和培养的单克隆抗体开发技术，获得抗CD68蛋白的兔单克隆抗体及重链序列、轻链序列。本专利技术制备得到的兔单克隆抗体具有高特异性，可以特异性识别含人CD68蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测人CD68蛋白。
附图说明
[0015]图1为免疫印迹的方法检测N11874兔多克隆抗体针对细胞样本中CD68的识别特异性。
[0016]图2为采用免疫组化检测人组织样本中N11874兔多克隆抗体的染色定位图。
[0017]图3为实施例4中用免疫印迹的方法检测兔单克隆抗体针对细胞样本中CD68的识别特异性。
[0018]图4为实施例5中采用免疫组化检测人组织样本中兔单克隆抗体的染色定位图。
[0019]图5为实施例2中Human CD68的兔单克隆抗体的纯化胶图。
具体实施方式
[0020]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的详细说明，以使本领域的技术人员更加清楚地理解本专利技术。以下各实施例，仅用于说明本专利技术，但不止用来限制本专利技术的范围。基于本专利技术中的具体实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的情况下，所获得的其他所有实施例，都属于本专利技术的保护范围。
[0021]在本专利技术实施例中，若无特殊说明，所有原料组分均为本领域技术人员熟知的市售产品；在本专利技术实施例中，若未具体指明，所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0022]本专利技术筛选获得了针对Human CD68的兔单克隆抗体，其序列如下：
[0023]轻链氨基酸序列：
[0024]MDTRAPTQLLGLLLLWLPGATFAQVLTQTPSPVSAAVGGTVTINCQASQSVYDNNNCAWFQQKPGQPPKLLIYDASTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGEFSCNNECDVFGGGTEVVVKGDPVAPTVLIFPPSADLVATGTVTIVCVANKYFPDVTVTWEVDGTTQTTGIENSKTPQNSADCTYNLSSTLTLTSTQYNSHKEYTCKVTQGTTSVVQSFNRGDC(SEQ ID NO:1)。
[0025]重链氨基酸序列：
[0026]METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTTSGFSLSNYYMSWVRQAPGKGLKWIGVITYHGKTSYASWAKGRFTISRTSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCVRDVGKSGWSYDAFNPWGPGTLVTVSSGQPKAPSVFPLAPCCGDTPSSTVTLGCLVKGYLPEPVTVTWNSGTLTNGVRTFPSVRQSSGLYSLSSVVSVTSSSQPVTCNVAHPATNTKVDKTVAPSTCSKPMCPPPELPGGPSVFIFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQDDPEVQFTWYINNEQVRTARPPLREQQFNSTIRVVSTLPIAHQDWLRGKEFKCKVHNKALPAPIEKTISKARGQPLEPKVYTMGPPREELSSRSVSLTCMINGFYPSDISVEWEKNGKAEDNYKTTPTVLDSDGSYFLYSKLSVPTSEWQRGDVFTCSVMHEALHNHYTQKSISRSPGK(SEQ ID NO:2)。
[0027]轻链可变区的氨基酸序列：
[0028]GLLLLWLPGATFAQVLTQTPSPVSAAVGGTVTINCQASQSVYDNNNCAWFQQKPG QPPKLLIYDAST
LASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGEFSCNNECDV FGGGTEVVVK(SEQ ID NO:3)。
[0029]重链可变区的氨基酸序列：
[0030]QSVEESGGRLVTPGTPLTLT本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种Human CD68的兔单克隆抗体，其特征在于，所述Human CD68的兔单克隆抗体的轻链互补决定区的序列分别如SEQ ID NO:5、SEID NO:6、SEQ ID NO:7所示，重链互补决定区的序列分别如SEQ ID NO:8、SEQ IDNO:9、SEQ ID NO:10所示。2.根据权利要求1所述的Human CD68的兔单克隆抗体，其特征在于，所述兔单克隆抗体的轻链可变区的序列如SEQ ID NO:3所示；和/或所述兔单克隆抗体的重链可变区的序列如SEQ ID NO:4所示。3.根据权利要求2所述的Human CD68的兔单克隆抗体，其特征在于，所述兔单克隆抗体的轻链全长序列如SEQ ID NO:1所示；和/或所述兔单克隆抗体的重链全长序列如SEQ ID NO:2所示。4.编码权利要求1至3任一项所述的HumanCD68的兔单克隆抗体的基因，或者包含该基因的表达载体或者宿主。5.一种兔单克隆抗体偶联物，其特征在于，主要由权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：周涛，李倩倩，程瑶，雷雅君，田科，张云，刘政泽，吴海，
申请(专利权)人：武汉爱博泰克生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：