一种抗NT-proBNP的结合蛋白制造技术

本发明专利技术涉及一种包含NT

【技术实现步骤摘要】
一种抗NT
‑
proBNP的结合蛋白


[0001]本专利技术涉及生物技术和医学
，尤其是涉及一种包含NT
‑
proBNP抗原结合结构域的分离的结合蛋白及其应用。

技术介绍

[0002]1988年日本学者Sudoh首次从猪脑内分离得到一种具有强有力的利尿、扩血管和降压作用的多肽，将其命名为脑钠肽(Brain Natriuretic Peptide，BNP)。BNP分布在心脏含量最高，但心肌细胞首先合成的是含有108个氨基酸的proBNP(BNP前体)，当心肌细胞受到刺激后，proBNP在内切酶的作用下裂解为含有76个氨基酸、无生物活性的N末端B型利钠肽原(NT
‑
proBNP)和含有32个氨基酸、具有活性的B型利钠肽(BNP)，两者来源相同并且等摩尔分泌释放进入血循环。
[0003]当心脏容量负荷增加或心脏功能受损时，N末端脑钠肽前体(NT
‑
proBNP)与BNP的指标浓度会异常升高，其中NT
‑
proBNP相对BNP生物稳定性较好，半衰期较长(120min),浓度相对较稳定,有效检测时间长,血液中含量相对比BNP高约16～20倍,因此检测相对容易,并且血浆标本在体外的稳定性长(>48h),是诊断心力衰竭和评价心脏功能的最佳心肌标志物。
[0004]正常的人血液中NT
‑
proBNP含量一般低于0.3ng/mL。当心脏功能受损，心肌扩张时，NT
‑
proBNP会快速合成并大量分泌释放进入到人体血液中。在发现一些相关早期病症的时候，准确、灵敏、高效稳定地测定血液中NT
‑
proBNP的量，能给早期心功能不全、心衰、呼吸困难的心源性及非心源性心衰治疗及预后监测、急性冠状动脉综合征的分级等方面提供快速、准确的早期诊断依据。目前用于检NT
‑
proBNP含量的方法主要有金标定性试验、荧光免疫法、酶联免疫吸附试验(ELISA)和磁微粒化学发光法(CMIA)，但是这些测量方法都需要针对于NT
‑
proBNP的特异性单克隆抗体。
[0005]目前针对NT
‑
proBNP的单克隆抗体来源少，只能依靠进口价格贵，灵敏度、亲和力以及特异性都存在缺陷。

技术实现思路

[0006]本专利技术涉及一种包含NT
‑
proBNP抗原结合结构域的分离的结合蛋白，并对其进行制备、应用等方面的研究。
[0007]所述抗原结合结构域包括以下互补决定区之一；
[0008]互补决定区CDR
‑
VH1为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；
[0009]互补决定区CDR
‑
VH2为SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列；
[0010]互补决定区CDR
‑
VH3为SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列；
[0011]互补决定区CDR
‑
VL1为SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列；
[0012]互补决定区CDR
‑
VL2为SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列；
[0013]互补决定区CDR
‑
VL3为SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列。
[0014]在一些实施方式中，所述结合蛋白中包括至少3个CDRs；或者，所述结合蛋白包括至少6个CDRs。
[0015]在一些实施方式中，本申请所述结合蛋白可以包含3个CDRs、4个CDRs、5个CDRs、6个CDRs，可选的，所述CDRs可以是选自重链CDR区域和/或轻链CDR区域的任意组合。
[0016]在一些实施方式中，所述结合蛋白为抗体、双链抗体、单链抗体、纳米抗体、F(ab
’
)2、Fab
’
、Fab、Fv、scFv、双特异抗体和抗体最小识别单位中的一种。
[0017]在一些实施方式中，所述的结合蛋白，包括重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区序列如SEQ ID NO.7所示；所述轻链可变区序列如SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12或SEQ ID NO.13所示。
[0018]在一些实施方式中，所述结合蛋白还包含抗体恒定区序列。
[0019]在一些实施方式中，所述恒定区序列选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE、IgD任何其中之一恒定区的序列。
[0020]在一些实施方式中，所述恒定区的种属来源为牛、马、乳牛、猪、绵羊、山羊、鼠、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅、火鸡、斗鸡或人。
[0021]在一些实施方式中，所述恒定区来源于鼠。
[0022]在另一些实施方式中，本专利技术的恒定区可以来源于人，以构成人源化的抗体。
[0023]在一些实施方式中，所述
[0024]重链恒定区序列如SEQ ID NO:14所示；
[0025]轻链恒定区序列如SEQ ID NO:15所示。
[0026]在一些实施方式中，所述结合蛋白为包含可变区和恒定区的完整抗体。
[0027]本专利技术还提供一种核酸分子，所述所述核酸分子为DNA或RNA，其编码上述的结合蛋白。
[0028]本专利技术还提供了一种载体，其包含上述的核酸分子。
[0029]本专利技术还提供了一种宿主细胞，其包含上述核酸分子或上述载体。
[0030]在一些实施方式中，所述的宿主细胞包括细菌、真核细胞、酵母和杆状病毒系统。
[0031]在一些实施方式中，所述宿主细胞为真核细胞，进一步的为哺乳动物细胞。
[0032]在一些实施方式中，所述宿主细胞为中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、HeLa细胞、幼仑鼠肾细胞或小鼠骨髓瘤细胞。
[0033]在一些实施方式中，所述宿主细胞为中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。
[0034]本专利技术还提供了一种生产上述结合蛋白的方法，包括如下步骤：
[0035]在培养基中培养上述的宿主细胞，从培养基中或从所培养的宿主细胞中回收产生的结合蛋白。
[0036]根据本专利技术的一方面，本专利技术还涉及一种试剂或试剂盒，其包含上述结合蛋白。
[0037]在一些实施方案中，所述试剂或试剂盒还包含缓冲剂、稳定剂、稀释剂或载体中的一种或多种。
[0038]在一些实施方案中，本专利技术提供用于检测心力衰竭或心脏功能评价受试者中的NT
‑
proBNP蛋白存在的试剂盒。
[0039]根据本专利技术的一方面，本专利技术还涉及一种检测测试样品中的NT
‑
proBNP的方法，其包括：
泛指包含CDR区的一切蛋白/蛋白片段，包括Fab、F(ab
’
)2、Fd、Fv、scFv、双特异抗体、抗体最小识别单位和抗体，以及这些抗体和片段的单链衍生物。“抗体”此用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种包含NT
‑
proBNP抗原结合结构域的分离的结合蛋白，其特征在于，其包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区序列如SEQ ID NO.7所示；所述轻链可变区序列如SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12或SEQ ID NO.13所示。2.根据权利要求1所述的结合蛋白，其特征在于，所述结合蛋白还包含抗体恒定区序列；优选的，所述恒定区序列选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE、IgD任何其中之一恒定区的序列；优选的，所述恒定区的种属来源为牛、马、乳牛、猪、绵羊、山羊、鼠、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅、火鸡、斗鸡或人；优选的，所述恒定区来源于鼠；更优选的，重链恒定区序列如SEQ ID NO:14所示；轻链恒定区序列如SEQ ID NO:15所示。优选的，所述结合蛋白为抗体、单链抗体、双价抗体、纳米抗体、F(ab
’
)2、Fab
’
、Fab、Fv、scFv、双特异抗体和抗体最小识别单位中的一种。3.一种分离的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子为DNA或RNA，其编码权利要求1～2任一项所述的结合蛋白。4.一种载体，其包含权利要求3所述的核酸分子。5.一种宿主细胞，其包含权利要求3所述的核酸分子或权利要求4所述的载体；优选的，所述宿主细...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟媛，钟冬梅，叶庆妮，刘桂兰，
申请(专利权)人：东莞市朋志生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：