冠状病毒疫苗制造技术

本发明专利技术是关于适用于治疗或预防冠状病毒感染，较佳冠状病毒SARS

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】冠状病毒疫苗
[0001]概述
[0002]本专利技术尤其是关于适用于治疗或预防冠状病毒感染，较佳冠状病毒SARS
‑
CoV
‑
2感染或与此类感染相关的病症，较佳COVID
‑
19的核酸。本专利技术亦关于组成物、多肽及疫苗。组成物及疫苗较佳包含所述核酸序列中的至少一者，较佳与聚合载体、聚阳离子蛋白或肽或脂质纳米粒子(LNP)缔合的核酸序列。本专利技术亦关于核酸、组成物、多肽、疫苗及套组的第一及第二医疗用途，及治疗或预防冠状病毒感染，较佳SARS
‑
CoV
‑
2感染的方法。
[0003]冠状病毒为冠状病毒科家族的具套膜、阳性单股RNA病毒。
[0004]其代表性在不同脊椎动物(诸如哺乳动物、鸟类及鱼类)中引起各种疾病。
[0005]冠状病毒为基因高度可变的，且个别病毒物种亦可以借由克服物种屏障感染若干宿主物种。此类转移已引起人类感染SARS
‑
相关冠状病毒(SARS
‑
CoV)及中东呼吸症候群冠状病毒(MERS
‑
CoV)。2019/2020年开始的冠状病毒流行归因于先前未知的冠状病毒，其初步命名为nCoV
‑
2019；后来将该病毒正式命名为SARS
‑
CoV
‑
2。
[0006]SARS
‑
CoV
‑
2引起的病毒感染的典型症状，亦称为COVID
‑
19疾病(冠状病毒疾病2019)，包括发烧、咳嗽、呼吸短促、肺炎及胃肠症状(例如腹泻)。严重疾病会导致需要在加护病室中进行机械通风及支持的呼吸衰竭。在2020年1月30日，世界卫生组织(WHO)宣布了彼新型冠状病毒爆发的全球健康紧急情况。世界卫生组织在3月11日宣布COVID
‑
19为大流行性疾病，指出全世界超过110个国家及地区总共有超过118,000个冠状病毒疾病的病例且存在进一步全球扩散的持续风险。截至2020年3月底，有超过800,000例SARS
‑
CoV
‑
2感染的确诊病例，其在世界上几乎每个国家间扩散，其中有超过40,000例COVID
‑
19相关的死亡。
[0007]目前，无疫苗或专一性治疗可用于SARS
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CoV
‑
2感染及/或COVID
‑
19疾病。
[0008]诊断患有SARS
‑
CoV
‑
2感染的患者仅接受基于个体症状及临床状况的支持性治疗。归因于严重的全球大流行性疾病的较大风险，迫切需要对SARS
‑
CoV
‑
2感染的安全且有效的治疗或预防。特定言之，需要疫苗来保护其中已观测到高死亡率的老年人群。
[0009]基于核酸的疫苗接种(包括DNA或RNA)代表一种用于针对新兴病毒的新颖疫苗的有前景的技术。核酸可以经基因工程改造且向人类个体投予。经转染的细胞直接产生编码的抗原(例如由DNA或RNA，尤其mRNA提供)，其产生保护性免疫反应。
[0010]已阐明病毒专一性记忆T细胞在针对SARS
‑
CoV感染的广泛及长期保护中的关键作用(参见例如Channappanavar、Rudragouda等人「Virus
‑
specific memory CD8T cells provide substantial protection from lethal severe acute respiratory syndrome coronavirus infection.」Journal of virology 88.19(2014):11034
‑
11044)。病毒专一性CD8 T细胞例如为病原体清除及在病毒攻击之后介导保护所需。因此，有效SARS
‑
CoV
‑
2疫苗不仅应诱导强功能性体液免疫反应，而且诱导SARS
‑
CoV
‑
2专一性CD8+T细胞及CD4+T细胞反应。
[0011]因此，本专利技术的目标为提供用于冠状病毒感染，特定言的SARS
‑
CoV
‑
2感染的基于核酸的疫苗。本专利技术的另一目标为提供一种有效冠状病毒疫苗，其可以在无冷链情况下储存及运输且其能够实现快速及可扩展的冠状病毒疫苗生产。
[0012]如权利要求及本说明书中进一步定义，此等目标尤其借由提供核酸(例如RNA或DNA)来解决，该核酸包含至少一个编码至少一种衍生自冠状病毒SARS
‑
CoV
‑
2的抗原肽或蛋白的编码序列。
[0013]此外，将需要此类核酸，或例如包含该核酸的组成物/疫苗具有以下有利特征中的至少一些：
[0014]·
核酸在注射/疫苗接种(例如肌肉)部位的转译；
[0015]·
以极低剂量及给药方案极有效诱导针对经编码的SARS
‑
CoV
‑
2蛋白的抗原专一性免疫反应；
[0016]·
对婴儿及/或新生儿或老年人，尤其老年人进行疫苗接种的适用性；
[0017]·
肌内投予组成物/疫苗的适用性；
[0018]·
诱导针对冠状病毒(在例如SARS
‑
CoV
‑
2中)的专一性及功能性体液免疫反应；
[0019]·
诱导针对冠状病毒(在例如SARS
‑
CoV
‑
2中)的广泛功能性细胞T细胞反应；
[0020]·
诱导针对冠状病毒(在例如SARS
‑
CoV
‑
2中)的专一性B细胞记忆；
[0021]·
诱导可以有效中和病毒(例如SARS
‑
CoV
‑
2)的功能性抗体；
[0022]·
诱导可以有效中和SARS
‑
CoV
‑
2的新兴变异体的功能性抗体；
[0023]·
借由诱导黏膜IgA抗体来引发黏膜IgA免疫，
[0024]·
诱导均衡的B细胞及T细胞反应；
[0025]·
针对冠状病毒感染，例如针对SARS
‑
CoV
‑
2或其新兴变异体诱导保护性免疫；
[0026]·
针对冠状病毒(在例如SARS
‑
CoV
‑
2中)的免疫保护的快速起效；
[0027]·
针对冠状病毒(在例如SARS
‑
CoV
‑
2中)所诱导的免疫反应的寿命；
[0028]·
由于疫苗接种或免疫病理学作用，SARS<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种核酸，其包含至少一个编码序列，该至少一个编码序列编码来自或衍生自SARS
‑
CoV
‑
2冠状病毒的至少一种抗原肽或蛋白，或其免疫原性片段或免疫原性变异体，其中该核酸包含至少一个异源非转译区(UTR)。2.如权利要求1的核酸，其中该核酸适用于疫苗。3.如权利要求1或2的核酸，其中该至少一种抗原肽或蛋白包含或由至少一种肽或蛋白组成，该至少一种肽或蛋白为或衍生自结构蛋白、辅助蛋白或复制酶蛋白或此等中的任一者的免疫原性片段或免疫原性变异体。4.如权利要求3的核酸，其中该结构蛋白为或衍生自棘蛋白(S)、套膜蛋白(E)、膜蛋白(M)或核酸蛋白壳体蛋白(N)或此等中的任一者的免疫原性片段或免疫原性变异体。5.如权利要求1至4中任一项的核酸，其中该至少一种抗原肽或蛋白为或衍生自棘蛋白(S)或其免疫原性片段或免疫原性变异体。6.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该至少一种抗原肽或蛋白包含或由以下氨基酸序列中的至少一者组成，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1
‑
111、274
‑
11663、13176
‑
13510、13521
‑
14123、22732
‑
22758、22917、22923、22929
‑
22964、26938、26939中的任一者或此等中的任一者的免疫原性片段或免疫原性变异体一致或至少70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％一致。7.如权利要求4至6中任一项的核酸，其中该棘蛋白(S)包含或由棘蛋白片段S1或其免疫原性片段或免疫原性变异体组成。8.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该至少一种抗原肽或蛋白包含或由以下氨基酸序列中的至少一者组成，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1
‑
27、29、31
‑
48、58
‑
111、274
‑
1345、1480
‑
1546、1614
‑
11663、13377
‑
13510、13521
‑
14123、22732、22737
‑
22758、22929
‑
22964中的任一者或此等中的任一者的免疫原性片段或免疫原性变异体一致或至少70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％一致。9.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该至少一种抗原肽或蛋白包含或由以下氨基酸序列中的至少一者组成，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：27、1279
‑
1345、29、1480
‑
1546、13243
‑
13309、22733
‑
22736、26938、26939中的任一者或此等中的任一者的免疫原性片段或免疫原性变异体一致或至少70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％一致。10.如权利要求4至9中任一项的核酸，其中该棘蛋白(S)包含或由以下者组成：棘蛋白片段S1或其免疫原性片段或免疫原性变异体，及棘蛋白片段S2或其免疫原性片段或免疫原性变异体。11.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该至少一种抗原肽或蛋白包含或由以下氨基酸序列中的至少一者组成，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1
‑
26、31
‑
48、58
‑
111、274
‑
1278、1614
‑
11663、13377
‑
13510、13521
‑
14177、22732、22737
‑
22758、22929
‑
22964中的任一者或此等中的任一者的免疫原性片段或免疫原性变异体一致或至少70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％一致。12.如权利要求4至11中任一项的核酸，其中该棘蛋白(S)为包含至少一个融合前稳定性突变的融合前稳定化棘蛋白(S_stab)。
13.如权利要求12的核酸，其中该至少一个融合前稳定性突变包含以下氨基酸取代：K986P及V987P。14.如权利要求12或13的核酸，其中该至少一个融合前稳定性突变包含空腔填充突变。15.如权利要求14的核酸，其中该至少一个空腔填充突变是选自包含T887W；A1020W；T887W及A1020W；或P1069F的清单。16.如权利要求12至15中任一项的核酸，其中该至少一个融合前稳定性突变包含突变的质子化位点。17.如权利要求16的核酸，其中该至少一个突变的质子化位点是选自包含H1048Q及H1064N；H1083N及H1101N；或H1048Q及H1064N及H1083N及H1101N的清单。18.如权利要求12至17中任一项的核酸，其中该至少一个融合前稳定性突变产生至少一个人工分子内双硫键。19.如权利要求18的核酸，其中该至少一个人工分子内双硫键是借由以下氨基酸取代产生：I712C及T1077C；I714C及Y1110C；P715C及P1069C；G889C及L1034C；I909C及Y1047C；Q965C及S1003C；F970C及G999C；A972C及R995C；A890C及V1040C；T874C及S1055C或N914C及S1123C。20.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该至少一种抗原肽或蛋白包含或由以下氨基酸序列中的至少一者组成：所述氨基酸序列与SEQ ID NO：10
‑
26、40
‑
48、85
‑
111、341
‑
1278、1681
‑
2618、2686
‑
3623、3691
‑
4628、4696
‑
5633、5701
‑
6638、6706
‑
7643、7711
‑
8648、8716
‑
9653、9721
‑
10658、10726
‑
11663、13377
‑
13510、13521
‑
14123、22732、22738、22740、22742、22744、22746、22748、22750、22752、22754、22756、22758、22947
‑
22964中的任一者或此等中的任一者的免疫原性片段或免疫原性变异体一致或至少70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％一致。21.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该至少一种抗原肽或蛋白包含或由以下氨基酸序列中的至少一者组成：所述氨基酸序列与SEQ ID NO：10
‑
26、341
‑
407、609
‑
1278、13521
‑
13587、22738、22740、22742、22744、22746、22748、22750、22752、22754、22756、22758、22947
‑
22964中的任一者或此等中的任一者的免疫原性片段或免疫原性变异体一致或至少70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％一致。22.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该至少一个编码序列另外编码选自以下者的一或多种异源肽或蛋白元件：信号肽、连接子、辅助表位、抗原簇聚元件、三聚元件、跨膜元件及/或VLP形成序列。23.如权利要求22的核酸，其中该至少一种异源肽或蛋白元件为异源抗原簇聚元件、异源三聚元件及/或VLP形成序列。24.如权利要求22或23的核酸，其中该至少一种异源抗原簇聚元件是选自铁蛋白元件、二氧四氢喋啶(lumazine)合酶元件、B型肝炎病毒的表面抗原(HBsAg)或囊封素(encapsulin)。25.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该至少一种抗原肽或蛋白包含或由以下氨基酸序列中的至少一者组成，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：58
‑
75、85
‑
102、3624
‑
5633、7644
‑
9653、13588
‑
13721、13856
‑
13989、22733、22735、22736中的任一者或此等中的任一者
的免疫原性片段或免疫原性变异体一致或至少70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％一致。26.如权利要求22或23的核酸，其中该至少一种异源三聚元件为折叠子(folden)元件，较佳纤维蛋白(fibritin)折叠子元件。27.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该至少一种抗原肽或蛋白包含或由以下氨基酸序列中的至少一者组成，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：76
‑
84、103
‑
111、5634
‑
6638、9654
‑
10658、13722
‑
13788、13990
‑
14056、22734、26938、26939中的任一者或此等中的任一者的免疫原性片段或免疫原性变异体一致或至少70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％一致。28.如权利要求22或23的核酸，其中该至少一种VLP形成序列为土拨鼠肝炎核心抗原元件(WhcAg)。29.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该至少一种抗原肽或蛋白包含或由以下氨基酸序列中的至少一者组成，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：6639
‑
7643、10659
‑
11663、13789
‑
13855、14057
‑
14123中的任一者或此等中的任一者的免疫原性片段或免疫原性变异体一致或至少70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％一致。30.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该至少一种抗原肽或蛋白包含或由以下氨基酸序列中的至少一者组成，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1、10、21、22、25、27、274、341、408、475、542、743、810、1011、1145、1212、1279、8716、10726、22732
‑
22758、22929
‑
22942、22947
‑
22964中的任一者或此等中的任一者的免疫原性片段或免疫原性变异体一致或至少70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％一致。31.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该至少一种抗原肽或蛋白包含或由以下氨基酸序列中的至少一者组成，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：10、22960、22961或22963中的任一者或此等中的任一者的免疫原性片段或免疫原性变异体一致或至少70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％一致。32.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该至少一个编码序列包含或由至少一种核酸序列组成，该至少一种核酸序列与SEQ ID NO：116
‑
132、134
‑
138、140
‑
143、145
‑
175、11664
‑
11813、11815、11817
‑
12050、12052、12054
‑
13147、13514、13515、13519、13520、14124
‑
14177、22759、22764
‑
22786、22791
‑
22813、22818
‑
22839、22969
‑
23184、23189
‑
23404、23409
‑
23624、23629
‑
23844、23849
‑
24064、24069
‑
24284、24289
‑
24504、24509
‑
24724、24729
‑
24944、24949
‑
25164、25169
‑
25384、25389
‑
25604、25609
‑
25824、25829
‑
26044、26049
‑
26264、26269
‑
26484、26489
‑
26704、26709
‑
26937中的任一者或此等序列中的任一者的片段或变异体一致或至少70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％一致。33.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该至少一种抗原肽或蛋白是包含融合前稳定性K986P及V987P突变的S蛋白，其包含或由氨基酸序列组成，该氨基酸序列与SEQ ID NO：10或此等中的任一者的免疫原性片段或免疫原性变异体一致。34.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该至少一个编码序列为密码子经修饰的编
码序列，其中与借由对应野生型或参考编码序列编码的氨基酸序列相比，借由至少一个密码子经修饰的编码序列编码的该氨基酸序列较佳未经修饰。35.如权利要求34的核酸，其中该至少一个密码子经修饰的编码序列是选自C最大化编码序列、CAI最大化编码序列、人类密码子使用调适编码序列、G/C含量修饰的编码序列及G/C最佳化编码序列，或其任何组合。36.如权利要求34或35的核酸，其中该至少一个密码子经修饰的编码序列为G/C最佳化编码序列、人类密码子使用调适编码序列或G/C含量修饰的编码序列。37.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该至少一个编码序列包含或由G/C最佳化编码序列组成，该编码序列包含核酸序列，该核酸序列与SEQ ID NO：136
‑
138、140、141、148、149、152、155、156、159、162、163、166、169、170、173、11731
‑
11813、11815、11817
‑
11966、12271
‑
12472、12743
‑
12944、13514、13515、14124
‑
14132、14142
‑
14150、14160
‑
14168、22759、22764
‑
22786、22791
‑
22813、22818
‑
22839、22969
‑
23040、23077
‑
23148、23189
‑
23260、23297
‑
23368、23409
‑
23480、23517
‑
23588、23629
‑
23700、23737
‑
23808、23849
‑
23920、23957
‑
24028、24069
‑
24140、24177
‑
24248、24289
‑
24360、24397
‑
24468、24509
‑
24580、24617
‑
24688、24729
‑
24800、24837
‑
24908、24949
‑
25020、25057
‑
25128、25169
‑
25240、25277
‑
25348、25389
‑
25460、25497
‑
25568、25609
‑
25680、25717
‑
25788、25829
‑
25900、25937
‑
26008、26049
‑
26120、26157
‑
26228、26269
‑
26340、26377
‑
26448、26489
‑
26560、26597
‑
26668、26709
‑
26780、26817
‑
26888、26925
‑
26937中的任一者或此等序列中的任一者的片段或变异体一致或至少70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％一致。38.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该至少一个编码序列包含或由人类密码子使用调适编码序列组成，该编码序列包含核酸序列，该核酸序列与SEQ ID NO：142、143、145、150、153、157、160、164、167、171、174、11967
‑
12033、12473
‑
12539、12945
‑
13011中的任一者或此等序列中的任一者的片段或变异体一致或至少70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％一致。39.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该至少一个编码序列包含或由G/C含量修饰的编码序列组成，该编码序列包含核酸序列，该核酸序列与SEQ ID NO：146、147、151、154、158、161、165、168、172、175、12034
‑
12050、12052、12054
‑
12203、12540
‑
12675、13012
‑
13147、13519、13520、14133
‑
14141、14151
‑
14159、14169
‑
14177、23041
‑
23076、23149
‑
23184、23261
‑
23296、23369
‑
23404、23481
‑
23516、23589
‑
23624、23701
‑
23736、23809
‑
23844、23921
‑
23956、24029
‑
24064、24141
‑
24176、24249
‑
24284、24361
‑
24396、24469
‑
24504、24581
‑
24616、24689
‑
24724、24801
‑
24836、24909
‑
24944、25021
‑
25056、25129
‑
25164、25241
‑
25276、25349
‑
25384、25461
‑
25496、25569
‑
25604、25681
‑
25716、25789
‑
25824、25901
‑
25936、26009
‑
26044、26121
‑
26156、26229
‑
26264、26341
‑
26376、26449
‑
26484、26561
‑
26596、26669
‑
26704、26781
‑
26816、26889
‑
26924中的任一者或此等序列中的任一者的片段或变异体一致或至少70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％一致。40.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该至少一个编码序列的G/C含量为至少约50％、55％或60％，较佳约63.9％。
41.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该至少一个编码序列编码包含融合前稳定性K986P及V987P突变的S蛋白，其中该编码序列包含或由G/C最佳化编码序列组成，该编码序列包含核酸序列，该核酸序列与SEQ ID NO：137、23090、23091、23093、23094或其片段或变异体一致。42.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该至少一个异源非转译区是选自至少一个异源5
′‑
UTR及/或至少一个异源3
′‑
UTR。43.如权利要求42的核酸，其中该至少一个异源3
′‑
UTR包含或由核酸序列组成，该核酸序列衍生自选自以下者的基因的3
′‑
UTR：PSMB3、ALB7、α
‑
球蛋白、CASP1、COX6B1、GNAS、NDUFA1及RPS9，或此等基因中的任一者的同源物、片段或变异体。44.如权利要求42的核酸，其中该至少一个异源5
′‑
UTR包含或由核酸序列组成，该核酸序列衍生自选自以下者的基因的5
′‑
UTR：HSD17B4、RPL32、ASAH1、ATP5A1、MP68、NDUFA4、NOSIP、RPL31、SLC7A3、TUBB4B及UBQLN2，或此等基因中的任一者的同源物、片段或变异体。45.如权利要求42的核酸，其中该至少一个异源5
′‑
UTR及该至少一个异源3
′
UTR是选自UTR设计a
‑
1(HSD17B4/PSMB3)、a
‑
3(SLC7A3/PSMB3)、e
‑
2(RPL31/RPS9)及i
‑
3(
‑
/muag)，其中UTR设计a
‑
1(HSD17B4/PSMB3)及i
‑
3(
‑
/muag)是尤其较佳的。46.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该核酸包含至少一个多(A)序列，较佳包含30至200个腺苷核苷酸及/或至少一个多(C)序列，较佳包含10至40个胞嘧啶核苷酸。47.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该核酸包含至少一个组蛋白茎
‑
环。48.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该核酸为DNA或RNA。49.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该核酸为编码RNA。50.如权利要求49的核酸，其中该编码RNA为mRNA、自我复制RNA、环状RNA或复制子RNA。51.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该核酸，较佳该编码RNA，为mRNA。52.如权利要求51的核酸，其中该mRNA不是复制子RNA或自我复制RNA。53.如权利要求51的核酸，其中该mRNA包含至少一个包含30至200个腺苷核苷酸的多(A)序列，且3
′
末端核苷酸为腺苷。54.如权利要求48至51中任一项的核酸，其中该RNA，较佳该编码RNA，包含5
′‑
帽结构，较佳m7G、帽0、帽1、帽2、经修饰的帽0或经修饰的帽1结构，较佳5
′‑
帽1结构。55.如权利要求48至54中任一项的核酸，其中该核酸、较佳该mRNA依5
′‑
至3
′‑
方向包含下列元件：A)5
′‑
帽1结构；B)根据SEQ ID NO.137的编码序列或其片段或变异体；C)较佳根据SEQ ID NO：267或268的衍生自α
‑
球蛋白基因的3
′‑
UTR的3
′‑
UTR；D)包含约64个A核苷酸的多(A)序列；E)包含约30个C核苷酸的多(C)序列；F)根据SEQ ID NO：178或179的组蛋白茎
‑
环。56.如权利要求48至54中任一项的核酸，其中该核酸、较佳该mRNA依5
′‑
至3
′‑
方向包含下列元件：A)5
′‑
帽1结构；B)较佳根据SEQ ID NO：231或232的衍生自HSD17B4基因的5
′‑
UTR的5
′‑
UTR；
C)根据SEQ ID NO.137的编码序列或其片段或变异体；D)较佳根据SEQ ID NO：253或254的衍生自PSMB3基因的3
′‑
UTR的3
′‑
UTR；E)选自SEQ ID NO：178或179的组蛋白茎
‑
环；F)包含约100个A核苷酸的多(A)序列。57.如权利要求56的核酸，其中该3
′
末端核苷酸为腺苷。58.如权利要求48至54中任一项的核酸，其中该核酸、较佳该mRNA依5
′‑
至3
′‑
方向包含下列元件：A)5
′‑
帽1结构；B)根据SEQ ID NO.23090或23091的编码序列或其片段或变异体；C)较佳根据SEQ ID NO：267或268的衍生自α
‑
球蛋白基因的3
′‑
UTR的3
′‑
UTR；D)包含约64个A核苷酸的多(A)序列；E)包含约30个C核苷酸的多(C)序列；F)根据SEQ ID NO：178或179的组蛋白茎
‑
环。59.如权利要求48至54中任一项的核酸，其中该核酸、较佳该mRNA依5
′‑
至3
′‑
方向包含下列元件：A)5
′‑
帽1结构；B)较佳根据SEQ ID NO：231或232的衍生自HSD17B4基因的5
′‑
UTR的5
′‑
UTR；C)根据SEQ ID NO.23090或23091的编码序列或其片段或变异体；D)较佳根据SEQ ID NO：253或254的衍生自PSMB3基因的3
′‑
UTR的3
′‑
UTR；E)选自SEQ ID NO：178或179的组蛋白茎
‑
环；F)包含约100个A核苷酸的多(A)序列。60.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该核酸包含或由核酸序列、较佳RNA序列组成，该序列与以下者一致或至少70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％一致：选自由SEQ ID NO：148
‑
175、12204
‑
13147、14142
‑
14177、22786
‑
22839、23189
‑
23404、23409
‑
23624、23629
‑
23844、23849
‑
24064、24069
‑
24284、24289
‑
24504、24509
‑
24724、24729
‑
24944、24949
‑
25164、25169
‑
25384、25389
‑
25604、25609
‑
25824、25829
‑
26044、26049
‑
26264、26269
‑
26484、26489
‑
26704、26709
‑
26937148组成的群的核酸序列或此等序列中的任一者的片段或变异体。61.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该核酸包含或由核酸序列、较佳RNA序列组成，该序列与以下者一致或至少70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％一致：选自由SEQ ID NO：149、156、12338、150、157、151、158、12541、163、170、12810、164、171、165、172、13013、12342
‑
12351、12545
‑
12554、12814
‑
12823、13017
‑
13026、14133组成的群的核酸序列或此等序列中的任一者的片段或变异体，较佳选自SEQ ID NO：149、150、151、163、164、165或此等序列中的任一者的片段或变异体。62.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该核酸包含或由核酸序列、较佳RNA序列组成，该序列与选自SEQ ID NO：163的核酸序列或其片段或变异体一致或至少70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％一致。
63.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该核酸包含或由核酸序列、较佳RNA序列组成，该序列与选自SEQ ID NO：149的核酸序列或其片段或变异体一致或至少70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％一致。64.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该核酸包含或由核酸序列、较佳RNA序列组成，该序列与选自SEQ ID NO：24837的核酸序列或其片段或变异体一致或至少70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％一致。65.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该核酸包含或由核酸序列、较佳RNA序列组成，该序列与选自由SEQ ID NO：23311、23531、24851组成的群的核酸序列或其片段或变异体一致或至少70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％一致。66.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该核酸包含或由核酸序列、较佳RNA序列组成，该序列与选自由SEQ ID NO：23310、23530、24850组成的群的核酸序列或其片段或变异体一致或至少70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％一致。67.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该核酸包含或由核酸序列、较佳RNA序列组成，该序列与选自由SEQ ID NO：23313、23533、24853、23314、23534、24854组成的群的核酸序列或其片段或变异体一致或至少70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％一致。68.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该核酸为不包含1
‑
甲基假尿苷取代的RNA。69.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该核酸为不包含经化学修饰的核苷酸的RNA。70.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该核酸为试管内转录RNA，其中RNA试管内转录已在序列最佳化核苷酸混合物及帽类似物存在下进行，较佳其中该序列最佳化核苷酸混合物不包含经化学修饰的核苷酸。71.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该核酸为经纯化的RNA，较佳为已借由RP
‑
HPLC及/或TFF纯化的RNA。72.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该核酸为经纯化的RNA，其已借由RP
‑
HPLC及/或TFF纯化且包含比尚未用RP
‑
HPLC及/或TFF纯化的RNA少约5％、10％或20％的双股RNA副产物。73.如前述权利要求中任一项的核酸，其中该核酸为经纯化的RNA，其已借由RP
‑
HPLC及/或TFF纯化且包含比已用Oligo dT纯化、沉淀、过滤及/或阴离子交换层析纯化的RNA少约5％、10％或20％的双股RNA副产物。74.一种组成物，其包含至少一种如权利要求1至73中任一项的核酸，其中该组成物视需要包含至少一种医药学上可接受的载剂。75.如权利要求74的组成物，其中该组成物包含根据SEQ ID NO：149、163、24837、23311、23531、23310、23530、23313或23533的mRNA或此等序列中的任一者的片段或变异体。76.如权利要求74的组成物，其中该组成物为包含多种或至少多于一种如权利要求1至
73中任一项的核酸的多价组成物。77.如权利要求76的组成物，其中所述多价组成物的多种或至少多于一种核酸序列各自编码不同的棘蛋白，较佳融合前稳定化棘蛋白。78.如权利要求77的组成物，其中所述不同的棘蛋白或融合前稳定化棘蛋白是衍生自不同SARS
‑
CoV
‑
2病毒变异体/分离株。79.如权利要求78的组成物，其中所述不同的棘蛋白或融合前稳定化棘蛋白是至少衍生自B.1.1.7、B.1.351、P.1或CAL.20C。80.如权利要求78的组成物，其中所述不同的棘蛋白或融合前稳定化棘蛋白在S蛋白中具有氨基酸变化，所述氨基酸变化包含：(i)delH69、delV70、Y453F、D614G、I692V及M1229I；(ii)delH69、delV70、delY144、N501Y、A570D、D614G、P681H、T716I、S982A及D1118H；(iii)L18F、D80A、D215G、delL242、delA243、delL244、R246I、K417N、E484K、N501Y、D614G及A701V；(iv)L18F、T20N、P26S、D138Y、R190S、K417T、E484K、N501Y、D614G、H655Y及T1027I；及/或(v)S13I、W152C、L452R及D614G。81.如权利要求76至78中任一项的组成物，其中该多价组成物包含至少两种核酸物种，所述核酸物种包含编码氨基酸序列的编码序列，该氨基酸序列与SEQ ID NO：10、22961；22960、22963、22941、22964中的任一者一致或至少70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％一致。82.如权利要求76至78中任一项的组成物，其中该多价组成物包含至少两种RNA物种，所述RNA物种与SEQ ID NO：149或24837、23531或24851、23530或24850、23533或24853、23439或24759或23534或24854中的任一者一致或至少70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％一致。83.如权利要求74至80中任一项的组成物，其中该组成物包含具有70％或更高的RNA完整性的mRNA。84.如权利要求74至83中任一项的组成物，其中该组成物包含具有70％或更高的加帽度的mRNA，较佳其中至少70％、80％或90％的所述mRNA物种包含帽1结构。85.如权利要求74至84中任一项的组成物，其中该至少一种核酸与一或多种阳离子或聚阳离子化合物，较佳阳离子或聚阳离子聚合物、阳离子或聚阳离子多糖、阳离子或聚阳离子脂质、阳离子或聚阳离子蛋白、阳离子或聚阳离子肽或其任何组合复合或缔合或至少部分复合或部分缔合。86.如权利要求85的组成物，其中该至少一种核酸是与一或多种脂质或基于脂质的载体复合或缔合，从而形成脂质体、脂质纳米粒子(LNP)、脂复合体(lipoplex)及/或纳米脂质体，较佳囊封该至少一种核酸。87.如权利要求85或86的组成物，其中该至少一种核酸与一或多种脂质复合，从而形成脂质纳米粒子。88.如权利要求86或87的组成物，其中该LNP包含根据式III
‑
3的阳离子脂质：
89.如权利要求86至88中任一项的组成物，其中该LNP包含式(IVa)的PEG脂质：其中n具有范围为30至60的平均值，较佳其中n具有约45、46、47、48、49、50、51、52、53、54的平均值，最佳其中n具有49或45的平均值。90.如权利要求86至88中任一项的组成物，其中该LNP包含式(IVa)的PEG脂质：其中n为经选择以使得该PEG脂质的平均分子量为约2500g/mol的整数。91.如权利要求86至90中任一项的组成物，其中该LNP包含一或多种中性脂质及/或一或多种类固醇或类固醇类似物。92.如权利要求91的组成物，其中该中性脂质为1，2
‑
二硬脂酰基
‑
sn
‑
甘油
‑3‑
磷酸胆碱(DSPC)，较佳其中该阳离子脂质与DSPC的摩尔比在约2∶1至约8∶1范围内。93.如权利要求91的组成物，其中该类固醇为胆固醇，较佳其中该阳离子脂质与胆固醇的摩尔比在约2∶1至约1∶1范围内。94.如权利要求86至93中任一项的组成物，其中该LNP包含(i)至少一种阳离子脂质，较佳式(III)的脂质，更佳脂质III
‑
3；(ii)至少...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏珊娜，
申请(专利权)人：奎尔法克股份有限公司，
类型：发明
国别省市：