针对PR的致病生物免疫原的通用疫苗卵子生物特异性和跨组保护制造技术

本公开部分地提供了一种用以开发针对病原体的疫苗的基于载体的初免和加强平台，所述疫苗被定制以引发靶向保守病毒表位的广泛T细胞反应。通用疫苗被制备成针对选自病毒、细菌、真菌或原生动物的感染性病原生物体的免疫原，其包含至少一种核糖核酸(RNA)多核苷酸，所述多核苷酸包含编码至少一种多肽抗原或其免疫原性片段的开放阅读框，其中所述多肽抗原或其所述免疫原性片段包含富含CD8+T细胞识别抗原的保守内部蛋白。所述初免和加强平台的有效性在包括完全功能性人免疫系统的人源化小鼠模型中进行了测试。型中进行了测试。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】针对PR的致病生物免疫原的通用疫苗卵子生物特异性和跨组保护
[0001]相关应用
[0002]本申请要求2020年1月8日提交的美国非临时申请No.16/737,546的优先权，权利为针对Pr的致病生物免疫原的通用疫苗卵形生物特异性和跨组保护这是国际专利申请号的延续。PCT/CN2018/105020，于2018年9月11日向中国国家知识产权局受理局提交。
专利

[0003]所描述的专利技术通常涉及针对提供生物体特异性和跨组保护的致病生物体免疫原的通用疫苗。
[0004]序列表
[0005]即时应用程序包含以ASCII格式以电子方式提交的序列表，特此通过引用将其全部合并。所述ASCII副本创建于2020年12月17日，名为130189
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00420_SL.txt大小为5，275字节。
[0006]背景
[0007]现有传染性和新出现的病原体继续在全世界造成显著的发病率和死亡率。仅在1990年，估计就有1600万人死于感染。尽管从那时起出现了许多新的治疗产品，但在2010年，由感染引起的死亡人数仅下降到1500万。这些死亡中的大多数是由少数病原体引起的：在大约1400种公认的人类病原体和寄生虫中，大多数死亡是由呼吸系统疾病，腹泻，艾滋病毒/艾滋病，结核病，疟疾，脑膜炎，百日咳，麻疹，乙型肝炎和性传播疾病(STDs)引起的(Dye C.2015年后：传染病健康与发展新时代。(2014)伦敦皇家学会哲学学报。B辑，生物科学，369(1645)，20130426.doi：10.1098/rstb.2013.0426).某些疾病被认为特别重要，例如，因为它们在出现时具有100％的致死率，例如，艾滋病毒/艾滋病；或者因为传染性病毒病原体引起的疾病超出了主要感染者的范围，例如由于感染寨卡病毒而出现出生缺陷。
[0008]用于对抗病原体的治疗产品包括预防性免疫接种，如疫苗，以及感染后治疗，如抗菌和抗病毒。疫苗是由致病微生物剂或微生物或病毒体的一种或几种特定抗原组成的治疗方法，其整套抗原在接受个体中诱导免疫反应和/或病原体本身的细胞反应(Cassone，A.，&Rappuoli，R.(2010)。通用疫苗：转向一种疫苗。生物.1(1)，e00042
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10.doi：10.1128/mBio.00042
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10)。疫苗通过诱导能够快速控制复制病原体或灭活其毒性成分的效应机制来保护。
[0009]一般来说，免疫反应是由个体和外来物质(例如，传染性微生物)之间的相遇引发的。受感染个体通过产生针对免疫原的抗原决定簇/表位的抗体分子产生体液免疫反应而快速反应，以及通过抗原特异性调节和效应T淋巴细胞(包括产生细胞因子的细胞和杀伤性T细胞，能够裂解感染细胞)的扩增和分化而介导的细胞免疫反应。具有给定微生物的初级免疫会唤起对该微生物上发现的抗原决定簇/表位具有特异性的抗体和T细胞；这些通常无法识别或仅识别由不相关的微生物表达的不良抗原决定簇(Paul，W.E.，“第1章：免疫系统：介绍”，Fundamental Immunology，第4版，Ed.Paul，W.E.，Lippicott
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Raven出版社，费城，
et al.，Hum.Vaccin.免疫剂。(2014)10:1256
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1265.doi：10.4161/hv.28117).这一策略已被用于许多其他疾病，包括脊髓灰质炎，麻疹和腮腺炎(同上，引用Plitnick L.M.第9章
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全球疫苗监管指南。在：Plitnick L.M.，Herzyk D.J.，编辑。新型生物制剂，生物仿制药，疫苗和专业生物制剂的非临床开发。学术出版社；美国加利福尼亚州圣地亚哥：(2013年)。第225
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241页)。此外，与其他疫苗策略相比，减毒疫苗的生产具有成本效益且相当简单。
[0020]虽然减毒活疫苗具有能够通过单剂量引发免疫反应的优点，但缺点包括由于存在不良反应的风险，其在免疫功能低下或妊娠患者中的使用有限。事实上，由于这些疫苗含有活病毒，因此在减毒的疫苗株中可能会发生突变，并恢复到毒力，如口服脊髓灰质炎疫苗所示，这导致约200万受体中有一人瘫痪。此外，它们可能在免疫力受损的受试者中引起重大疾病，正如抗结核疫苗Bacille Calmette Gu
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rin(BCG)在给予免疫缺陷患者(包括人类免疫缺陷病毒(HIV)感染患者)时所看到的那样。
[0021]接下来，研究人员开发了杀死病原体然后使用的灭杀疫苗。这些疫苗通常免疫原性差，并且经常引起显着的副作用，因此全细胞疫苗在很大程度上已经让位于亚单位疫苗，以及其他类型的疫苗。(一般见格林伍德B。疫苗接种对全球健康的贡献：过去、现在和未来。(2014).伦敦皇家学会哲学学报.B辑，生物科学，369(1645)，20130433.doi：10.1098/rstb.2013.0433).亚单位疫苗包括病原体的片段，即蛋白质或肽(Ghaffar，K.A.等人，“寨卡疫苗的快速通道和路障”，疫苗(2018)6，77；doi：10.3390/vaccines040077)。虽然亚单位疫苗通常是更安全的选择，因为它们往往免疫原性较差，因此需要佐剂和/或多剂量。
[0022]mRNA疫苗的使用是一种相对较新的趋势，已经越来越受欢迎(Ghaffar，K.A.等人，“寨卡疫苗的快速通道和障碍”，(2018)疫苗6，77；doi：10.3390/vaccines040077引用Plitnick L.M.第9章
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疫苗全球监管指南。在：Plitnick L.M.，Herzyk D.J.，编辑。新型生物制剂，生物仿制药，疫苗和专业生物制剂的非临床开发。学术出版社；美国加利福尼亚州圣地亚哥：(2013年)。第225
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241页)。作为最小的遗传构建体，mRNA仅包含表达特定编码蛋白质区域所需的元素。此外，mRNA无法与基因组相互作用，而只是作为信息的短暂载体。其用作疫苗平台的其他优点包括其安全性(Id.引用Lundstrom，K.，Futre Sci.OA(2018)4：FSO300 doi：10.4155/fsoa
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2017
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0151)。然而，利用mRNA作为疫苗设计方法的缺点之一是其被核糖核酸快速降解。
[0023]DNA疫苗是ZIKV爆发后最早为人体临床试验提出的疫苗平台之一(Id)。还探索了使用编码各种抗原的基因工程DNA质粒来诱导体液和细胞反应，以对抗寄生虫引起的各种传染病(Id.citing Cherif，MS等人，疫苗(2011)29：9038
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9050；Cheng，PC et al.，PLoS Neg.Trop Dis.(2016)10：e00044594；doi：10.1371/journal.pntd.0004459)，细菌(同上，引用Li，X.et al.，Cl本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种针对选自病毒、细菌、真菌或原生动物的感染性病原生物体的免疫原的通用疫苗，其包含至少一种核糖核酸(RNA)多核苷酸，所述多核苷酸包含编码至少一种多肽抗原或其免疫原性片段的开放阅读框，其中所述多肽抗原或其所述免疫原性片段包含富含CD8+T细胞识别抗原的保守内部蛋白，(a)其中细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位由长度为8
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11个残基的肽组成，并且(b)其中响应于所述疫苗而引发的免疫反应包括以下中的一个或多个：相比于对照(i)激活针对所述疫苗中存在的至少一种抗原的一种或多种T细胞群；或(ii)中和所述病原体的感染性；或(iii)包括所述病原体的破坏的抗原特异性反应；感染所述病原体的细胞的裂解，或两者。2.根据权利要求1所述的通用疫苗，其中所激活的细胞群包括激活的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。3.根据权利要求2所述的通用疫苗，其中所述激活的CTL包括NK细胞群、NKT细胞群、LAK细胞群、CIK细胞群、MAIT细胞群、CD8+CTL群或CD4+CTL群中的一个或多个。4.根据权利要求1所述的通用疫苗，其中所述保守的免疫原性多肽或免疫原性片段是病毒内部基质蛋白、病毒衣壳蛋白、病毒核蛋白、病毒核蛋白质、病毒糖蛋白、病毒磷蛋白、病毒包膜蛋白、病毒蛋白酶、逆转录酶或病毒聚合酶。5.根据权利要求1所述的通用疫苗，其通过包括以下的方法制备：a.从共有氨基酸序列中鉴定并选择感染性病原体或其免疫原性片段的富含CD8+T细胞识别抗原的高度保守的内部蛋白；b.构建(a)中的所述高度保守的内部蛋白的免疫原序列；c.构建：i.包含(b)的所述免疫原序列的链霉菌属噬菌体SV1.0 DNA载体；ii.包含(b)的所述免疫原序列的腺病毒基(AdV)载体；iii.包含(b)的所述免疫原序列的减毒的复制型重组牛痘病毒基(VV)载体；d.分别繁殖(c)中包含所编码的免疫原的所述重组载体中的每一种，以用于在体内以有效引发或刺激针对所述感染性病原体的感染的治疗性或预防性的细胞介导的免疫反应的量免疫受试者，这通过以下来实现：i.通过用(c)(i)的所述噬菌体DNA载体进行免疫来初免完全人免疫系统；ii.通过先使用(c)(ii)的所述AdV载体，接着使用(c)(iii)的所述VV载体，或先使用(c)(iii)的所述VV载体，接着使用(c)(ii)的所述AdV载体进行免疫来加强完全人免疫系统。6.根据权利要求5所述的通过所述方法制备的通用疫苗，其中所述保守的免疫原性蛋白或免疫原性片段是病毒内部基质蛋白、病毒衣壳蛋白、病毒核蛋白、病毒核蛋白质、病毒糖蛋白、病毒磷蛋白、病毒包膜蛋白、病毒蛋白酶、逆转录酶或病毒聚合酶。7.一种编码至少一种RNA多核苷酸的工程化核酸，所述多核苷酸包含编码至少一种多肽抗原或其免疫原性片段的开放阅读框，其中所述多肽抗原或其所述免疫原性片段包含根据权利要求1所述的通用疫苗的富含CD8+T细胞识别抗原的保守内部蛋白。
8.一种表达载体，其包含编码至少一种RNA多核苷酸的工程化核酸，所述多核苷酸包含编码至少一种多肽抗原或其免疫原性片段的开放阅读框，其中所述多肽抗原或其所述免疫原性片段包含根据权利要求1所述的通用疫苗的富含CD8+T细胞识别抗原的保守内部蛋白。9.一种宿主细胞，其包含编码至少一种RNA多核苷酸的工程化核酸，所述多核苷酸包含编码至少一种多肽抗原或其免疫原性片段的开放阅读框，其中所述多肽抗原或其所述免疫原性片段包含根据权利要求1所述的通用疫苗的富含CD8+T细胞识别抗原的保守内部蛋白。10.一种诱导受试者的免疫反应的方法，所述方法包括向所述受试者施用针对选自病毒、细菌、真菌或原生动物的感染性病原生物体的免疫原的通用疫苗，其包含至少一种核糖核酸(RNA)多核苷酸，所述多核苷酸包含编码至少一种抗原性多肽或其免疫原性片段的开放阅读框，其中所述抗原性肽或其所述免疫原性片段包含富含CD8+T细胞识别抗原的保守内部蛋白，其中CD8+T细胞识别抗原由长度为8
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11个残基的肽组成，并且其中响应于所述疫苗而产生的免疫反应包括以下中的一个或多个：相比于对照(i)激活针对所述疫苗中存在的一种或多种抗原的一种或多种T细胞群；或(ii)中和所述病原体的感染性；或(iii)包括所述感染性病原生物体的破坏的抗原特异性反应；感染所述感染性病原生物体的细胞的裂解，或两者。11.根据权利要求10所述的方法，其包括用包含编码富含CD8+T细胞识别抗原的保守内部蛋白的第一免疫原序列的链霉菌属噬菌体SV1.0 DNA载体对所述受试者进行初免，并且接着用包含编码富含CD8+T细胞识别抗原的...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐建青，X，
申请(专利权)人：中美生物科技控股公司，
类型：发明
国别省市：