一种融合前构象糖蛋白汉坦病毒疫苗及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及疫苗制备技术领域，具体公开了一种融合前构象糖蛋白汉坦病毒疫苗及其制备方法和应用。通过基酸突变改造汉坦病毒GPC抗原，在Gn

【技术实现步骤摘要】
一种融合前构象糖蛋白汉坦病毒疫苗及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于疫苗制备
，具体涉及一种融合前构象糖蛋白汉坦病毒疫苗及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]汉坦病毒是一组由啮齿类动物传播的病毒，根据其地理分布和自然宿主，分为旧世界汉坦病毒(Old World Hantaviruses，OWHs)和新世界汉坦病毒(New World Hantaviruses，NWHs)，新世界汉坦病毒会导致危及生命的汉坦病毒心肺综合征(Hantavirus Cardiopulmonary Syndrome，HCPS)，SNV(Sin Nombre Orthohantavirus)和ANDV(Andes virus)是美洲HCPS的主要病原体，而旧世界汉坦病毒会导致肾综合征出血热(Haemorrhagic Fever with Renal Syndrome，HFRS)，与HFRS相关的汉坦病毒主要分布在欧亚地区，病死率在0.1％和15％之间，主要是汉滩病毒(Hantaan virus，HTNV)、汉城病毒(Seoul virus，SEOV)本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种融合前构象糖蛋白汉坦病毒疫苗的制备方法，其特征在于，通过氨基酸突变改造汉坦病毒GPC抗原，在Gn
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Gc异源二聚体相互接近的氨基酸之间、Gc四聚体相互接近的氨基酸之间引入稳定Gn
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Gc和Gc四聚体结构的二硫键，获得表达稳定的融合前构象抗原疫苗；所述汉坦病毒包括HTNV、SEOV、PUUV、DOBV、SNV和ANDV。2.根据权利要求1所述的融合前构象糖蛋白汉坦病毒疫苗的制备方法，其特征在于，所述汉坦病毒疫苗还包括HTNV GP抗原疫苗、SEOV GP抗原疫苗、PUUV GP抗原疫苗、DOBV GP抗原疫苗、SNV GP抗原疫苗和ANDV GP抗原疫苗。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述HTNV GP抗原疫苗的制备中的氨基酸突变改造过程为：将731位苏氨酸点突变为半胱氨酸，835位甘氨酸点突变为半胱氨酸，291位点丝氨酸处点突变为半胱氨酸；所述SEOV GP抗原疫苗的制备中的氨基酸突变改造过程为：将729位苏氨酸点突变为半胱氨酸，将833位甘氨酸点突变为半胱氨酸，将289位苏氨酸点突变为半胱氨酸；所述PUUV GP抗原疫苗的制备中的氨基酸突变改造过程为：将741位苏氨酸点突变为半胱氨酸，将845位甘氨酸点突变为半胱氨酸，将301位丙氨酸点突变为为半胱氨酸；所述DOBV GP抗原疫苗的制备中的氨基酸突变改造过程为：将731位苏氨酸点突变为半胱氨酸，将835位甘氨酸点突变为半胱氨酸，将291位苏氨酸点突变为半胱氨酸；SNV GP抗原疫苗的制备中的氨基酸突变改造过程为：将735位苏氨酸点突变为半胱氨酸，将839位甘氨酸点突变为半胱氨酸，将295位亮氨酸点突变为为半胱氨酸；ANDV GP抗原疫苗的制备中的氨基酸突变改造过程为：将734位苏氨酸点突变为半胱氨酸，将838位甘氨酸点突变为半胱氨酸，将294位组氨酸点突变为半胱氨酸。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述HTNV GP抗原疫苗的制备包括如下步骤：S1，通过构建pCAGGS
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opti GPC
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T731C
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Myc单突变质粒将731位苏氨酸点突变为半胱氨酸；S2，通过构建pCAGGS
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opti GPC
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G835C/S291C
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Myc双突变质粒将835位甘氨酸点突变为半胱氨酸，将291位点丝氨酸处点突变为半胱氨酸；S3，构建pCAGGS
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opti GPC
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G835C/S291C/T731C三突变质粒，获得HTNV GP抗原疫苗。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，S1中，以pUC
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opti GPC质粒为模板，设计突变引物opti GPC
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F
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infusion、GPC
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R
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infusion、opti GPC
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T731Cseg 1
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R和opti GPC
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T731C seg 2
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F，分别以opti GPC
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F
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infusion、opti GPC
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T731Cseg 1
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R；opti GPC
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T731C seg 2
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F、GPC
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R
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infusion为引物PCR扩增T731C seg 1和T731C seg 2，然后与经EcoR I和Kpn I双酶切后的pCAGGS
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Myc载体连接，获得单突变质粒pCAGGS
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opti GPC
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T731C
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Myc。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，S2中，先构建pCAGGS
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opti GPC

【专利技术属性】
技术研发人员：叶伟，张芳琳，党亚美，程林峰，张惠，张亮，刘赫，徐志凯，
申请(专利权)人：中国人民解放军空军军医大学，
类型：发明
国别省市：