本发明专利技术公开了一种LAMP检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及呼吸道合胞病毒的试剂盒及引物组合物、方法。该试剂盒包括用于检测甲型流感病毒的第一检测体系、用于检测乙型流感病毒的第二检测体系及用于检测呼吸道合胞病毒的第三检测体系；第一检测体系包括核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.6所示的引物；第二检测体系包括核苷酸序列依次如SEQ ID NO.7～SEQ ID NO.12所示的引物；第三检测体系包括用于检测呼吸道合胞病毒A型的引物组及用于检测呼吸道合胞病毒B型的引物组，A型的引物组包括核苷酸序列依次如SEQ ID NO.13～SEQ ID NO.18所示的引物；B型的引物组包括核苷酸序列依次如SEQ ID NO.19～SEQ ID NO.23所示的引物。本发明专利技术能够快速检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及呼吸道合胞病毒A型和B型。感病毒及呼吸道合胞病毒A型和B型。
【技术实现步骤摘要】
LAMP检测甲流病毒、乙流病毒及呼吸道合胞病毒的试剂盒及引物组合、方法
[0001]本专利技术属于检测试剂盒领域，涉及一种LAMP反应联合检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及呼吸道合胞病毒的试剂盒及引物组合物、方法。
技术介绍
[0002]呼吸道感染是人类最常见的疾病之一，造成呼吸道感染的主要原因是各种呼吸道病毒和一些细菌、支原体、衣原体。其中甲型流感病毒、乙型流感病毒和呼吸道合胞病毒为临床中较为常见且重要的呼吸道病毒。呼吸道病毒引起的感染症状和流行性感冒的症状相似，引起的疫情及对社会造成的危害程度不一样，由于很难靠临床症状确定病原体，因此，快速有效的鉴定呼吸道病原体种类，对于制定治疗和用药方案和疫情控制具有重要意义。
[0003]目前，分离培养是呼吸道病毒检测的“金标准”，但该方法操作复杂，耗时长，不适合用于早期诊断。抗体检测虽然操作简便，但其灵敏度和特异性变化比较大，容易出现假阳性和假阴性。聚合酶链反应(PCR)技术敏感性高，特异性强的特点，但该技术在临床应用过程中也存在易交叉污染、耗时长等方面问题，且对实验室环境要求较高，昂贵的仪器设备也不利于基层医疗机构单位的推广和应用。现有通过环介导等温扩增技术(LAMP)进行体外核酸扩增技术来进行检测，该技术对温度的要求较低，不需要昂贵精密的温度循环装置，只需要恒定温度下就可以完成，有利于降低成本，反应时间比传统的qPCR方法快，最快可以达到15min检测出结果，且结果易于判读，不需要依赖于特定机器，肉眼就可以进行判读。
技术实现思路
[0004]针对上述技术问题，本专利技术的目的是提供一种LAMP联合检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及呼吸道合胞病毒的试剂盒及引物组合物、方法，其能够快速检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及呼吸道合胞病毒，对呼吸道合胞病毒A型和B型两种分型均能够准确快速地检测。
[0005]根据本专利技术的第一个方面，一种LAMP检测甲流病毒、乙流病毒及呼吸道合胞病毒的试剂盒，包括用于检测甲型流感病毒的第一检测体系、用于检测乙型流感病毒的第二检测体系及用于检测呼吸道合胞病毒的第三检测体系；所述第一检测体系包括核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.6所示的外引物对F3 和B3、内引物对FIP和BIP、及环引物对LF和LB；所述第二检测体系包括核苷酸序列依次如SEQ ID NO.7～SEQ ID NO.12所示的外引物对F3和B3、内引物对FIP和BIP、及环引物对LF和LB；所述第三检测体系包括用于检测呼吸道合胞病毒A型的引物组及用于检测呼吸道合胞病毒B型的引物组；用于检测呼吸道合胞病毒A型的引物组包括核苷酸序列依次如SEQ ID NO.13～SEQ ID NO.18 所示的外引物对F3和B3、内引物对FIP和BIP、及环引物对LF和LB；用于检测呼吸道合胞病毒B型的引物组包括核苷酸序列依次如SEQ ID NO.19～SEQ IDNO.23所示的外引物对F3和B3、内引物对FIP和BIP、及环引物LB。
[0006]在一具体且优选的实施例中，各外引物F3和B3的浓度分别为0.1～0.4μM，各内引物FIP和BIP的浓度分别为1～2μM，各环引物的浓度分别为0.1～1μM。。
[0007]在一实施例中，所述第一检测体系、所述第二检测体系及所述第三检测体系还分别包括dATP、dTTP、dCTP、dGTP、甜菜碱、Tris
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HCl、KCl、(NH4)2SO4、 MgSO4、TritonX
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100、Bst DNA聚合酶及核酸染料。
[0008]在一具体且优选的实施例中，dATP、dTTP、dCTP和dGTP的浓度分别为 1.0～2.0mM，(NH4)2SO4的浓度为6～10mM，甜菜碱的浓度为0.5～1.2M，Tris
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HCl 的浓度为9.0～40mM，KCl的浓度为10～20mM，MgSO4的浓度为1～10mM， TritonX
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100的浓度为0.05％～1.0％，Bst DNA聚合酶的浓度为8～20U。进一步地，所述核酸染料为钙黄绿素。
[0009]在一实施例中，LAMP扩增反应程序为55～65℃下反应18～42min。
[0010]根据本专利技术的第二个方面，一种LAMP检测甲流病毒、乙流病毒及呼吸道合胞病毒的引物组合物，包括用于检测甲型流感病毒的第一引物组、用于检测乙型流感病毒的第二引物组、用于检测呼吸道合胞病毒A型的第三引物组及用于检测呼吸道合胞病毒B型的第四引物组；所述第一引物组包括核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.6所示的外引物对F3和B3、内引物对FIP和BIP、及环引物对LF和LB；所述第二引物组包括核苷酸序列依次如SEQ ID NO.7～SEQ ID NO.12所示的外引物对F3和B3、内引物对FIP和BIP、及环引物对LF 和LB；所述第三引物组包括核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.6所示的外引物对F3和B3、内引物对FIP和BIP、及环引物对LF和LB；所述第四引物组包括核苷酸序列依次如SEQ ID NO.7～SEQ ID NO.12所示的外引物对F3和 B3、内引物对FIP和BIP、及环引物LB。
[0011]在一实施例中，各外引物F3和B3的浓度分别为0.1～0.4μM，各内引物FIP 和BIP的浓度分别为1～2μM，所述第一引物组及所述第二引物组的各环引物LF 和LB的浓度分别为0.1～1μM。
[0012]根据本专利技术的第三个方面，一种非诊断治疗目的的甲流病毒、乙流病毒及呼吸道合胞病毒的检测方法，包括使用上述的试剂盒或引物组合物进行LAMP扩增反应。
[0013]在一实施例中，所述LAMP扩增反应的程序为55～65℃下反应18～42min。
[0014]本专利技术采用以上方案，相比现有技术具有如下优点：
[0015]本专利技术的引物组合物及试剂盒，能够通过LAMP反应快速、准确地检测甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒A型和B型，检测灵敏度和特异性均较好，同时检测时间较短，节约了生产成本和检测成本，又提高了检测效率。
附图说明
[0016]为了更清楚地说明本专利技术的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0017]图1是实施例1的甲型流感病毒的扩增结果图；
[0018]图2是甲型流感病毒的最低检测限实验结果图；
[0019]图3是乙型流感病毒的最低检测限实验结果图；
[0020]图4是呼吸道合胞病毒A型的最低检测限实验结果图；
[0021]图5是呼吸道合胞病毒B型的最低检测限实验结果图。
具体实施方式
[0022]下面结合附图对本专利技术的较佳实施例进行详细阐述，以使本专利技术的优点和特征能更易于被本领域的技本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种LAMP检测甲流病毒、乙流病毒及呼吸道合胞病毒的试剂盒，其特征在于：包括用于检测甲型流感病毒的第一检测体系、用于检测乙型流感病毒的第二检测体系及用于检测呼吸道合胞病毒的第三检测体系；所述第一检测体系包括核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.6所示的外引物对F3和B3、内引物对FIP和BIP、及环引物对LF和LB；所述第二检测体系包括核苷酸序列依次如SEQ ID NO.7～SEQ ID NO.12所示的外引物对F3和B3、内引物对FIP和BIP、及环引物对LF和LB；所述第三检测体系包括用于检测呼吸道合胞病毒A型的引物组及用于检测呼吸道合胞病毒B型的引物组；用于检测呼吸道合胞病毒A型的引物组包括核苷酸序列依次如SEQ ID NO.13～SEQ ID NO.18所示的外引物对F3和B3、内引物对FIP和BIP、及环引物对LF和LB；用于检测呼吸道合胞病毒B型的引物组包括核苷酸序列依次如SEQ ID NO.19～SEQ ID NO.23所示的外引物对F3和B3、内引物对FIP和BIP、及环引物LB。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，各外引物F3和B3的浓度分别为0.1～0.4μM，各内引物FIP和BIP的浓度分别为1～2μM，各环引物的浓度分别为0.1～1μM。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述第一检测体系、所述第二检测体系及所述第三检测体系还分别包括dATP、dTTP、dCTP、dGTP、甜菜碱、Tris
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HCl、KCl、(NH4)2SO4、MgSO4、TritonX
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100、Bst DNA聚合酶及核酸染料。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，dATP、dTTP、dCTP和dGTP的浓度分别为1.0～2.0mM，(NH4)2SO4的浓度为6～10mM，甜菜碱的浓度为0.5～1.2M，Tris
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HCl的浓度为9.0～40mM，KCl的浓度...
【专利技术属性】
技术研发人员：颜菁，袁青，刘艳，周雁云，刘文彬，
申请(专利权)人：江苏汇先医药技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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