【技术实现步骤摘要】
双特异性抗体修饰囊泡、双特异性抗体、核酸、重组载体、基因工程细胞、方法和应用
[0001]本专利技术涉及生物医药
,进一步涉及抗体
,特别涉及一种双特异性抗体修饰囊泡、双特异性抗体、核酸、重组载体、基因工程细胞、基因工程细胞的制备方法、双特异性抗体修饰囊泡的制备方法、应用、药物组合物以及双特异性抗体修饰囊泡中双特异性抗体的结合密度的测试方法。
技术介绍
[0002]双特异性抗体(BsAb)是一类在治疗癌症方面有着巨大前景的生物制剂,BsAb由肽链连接两个抗体单链可变片段组成,分别可识别靶细胞和效应细胞,能在两者间起到桥梁连接作用。例如,Bispecific T cell engager(BiTE,双特异性T细胞结合器)是双特异性抗体的一种,其效应细胞识别端通过结合T细胞表面的CD3e可有效激活T细胞,并介导T细胞对肿瘤细胞的不依赖MHC复合物的杀伤效应。又如,(Blinatumomab)是一种结合T细胞上的CD3和靶细胞上的CD19的BiTE,是FDA批准的第一个双特异性免疫治疗药物,已被证明对CD19+B细胞前体ALL(急性淋巴细胞白血病)有效,目前用于费城染色体阴性复发或难治性ALL患者的二线治疗。相比于嵌合抗原受体T细胞(CAR
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T)疗法,前述的BsAb免疫疗法可以引导T细胞向肿瘤细胞趋向,而且双特异性免疫治疗药可以生产为成品药物,易于控制剂量,并且降低了患者个人的用药成本。然而,BiTEs和其他基于双特异性抗体的生物制剂均属于蛋白制剂,半衰期短,使用时不可避免的会有损耗,在临床 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种双特异性抗体(BsAb)修饰囊泡,其特征在于,包括囊泡和结合于所述囊泡表面的双特异性抗体;其中,所述双特异性抗体与所述囊泡表面的膜结构相结合;所述双特异性抗体包括第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域;所述第一抗原结合结构域为CD19抗原结合结构域或HER2抗原结合结构域,所述第二抗原结合结构域为CD3抗原结合结构域。2.如权利要求1所述双特异性抗体修饰囊泡,其特征在于,所述双特异性抗体在所述囊泡表面的结合密度为每平方微米囊泡表面结合的AsAb的平均数量大于100个;和/或,所述双特异性抗体修饰囊泡的直径为80~1000nm,优选平均直径为100~200nm。3.如权利要求2所述双特异性抗体修饰囊泡,其特征在于,任一种所述双特异性抗体独立地为BiTE抗体。4.如权利要求1~3中任一项所述双特异性抗体修饰囊泡,其特征在于,任一种所述双特异性抗体独立地包括依次串联的所述第一抗原结合结构域、连接肽、所述第二抗原结合结构域、铰链区和跨膜结构域;其中,所述跨膜结构域嵌入到所述囊泡表面的磷脂双分子层中而结合。5.如权利要求4所述双特异性抗体修饰囊泡,其特征在于,所述双特异性抗体修饰囊泡满足如下的任意一个特征、任意多个部分特征或全部特征:(a1)所述第一抗原结合结构域包含氨基酸序列如SEQ ID No.:1所示的抗CD19单链抗体可变区,或者,包含氨基酸序列如SEQ ID No.:2所示的抗HER2单链抗体可变区;(a2)所述所第二抗原结合结构域包含氨基酸序列如SEQ ID No.:3所示的抗CD3单链抗体可变区;(a3)所述连接肽的氨基酸序列如SEQ ID No.:4所示;(a4)所述铰链区的氨基酸序列如SEQ ID No.:5所示;和(a5)所述跨膜结构域的氨基酸序列如SEQ ID No.:6所示。6.如权利要求1~3中任一项所述双特异性抗体修饰囊泡,其特征在于,所述囊泡来源于哺乳动物细胞和昆虫细胞中的一种或多种。7.如权利要求6所述双特异性抗体修饰囊泡,其特征在于,所述囊泡来源于HEK
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293T细胞、Nalm6细胞和RAW264.7细胞中的一种或多种。8.一种双特异性抗体,其特征在于,如权利要求1~5中任一项所定义。9.一种核酸,其特征在于,所述核酸的核苷酸序列包括以下至少一组中的核苷酸序列:(i)编码权利要求8所述双特异性抗体的核苷酸序列;和(ii)与(i)中所述的核苷酸序列互补的核苷酸序列;优选地,所述核酸为DNA、mRNA或者其组合。10.如权利要求9所述核酸,其特征在于,在所述双特异性抗体的编码序列上游还包括编码信号肽的核苷酸序列,优选地,所述信号肽的氨基酸序列如SEQ ID No.:7所示。11.一种重组载体,其特征在于,所述重组载体含有权利要求8所述双特异性抗体的编码序列和权利要求9或10所述核酸的核苷酸序列中的一种或多种。12.如权利要求11所述重组载体,其特征在于,所述重组载体为慢病毒载体、逆转录病毒载体、瞬时转染载体和腺病毒载体中的一种或多种。13.一种基因工程细胞,其特征在于,所述基因工程细胞能够内源性分泌囊泡,且所述
基因工程细胞的基因组整合有权利要求8所述双特异性抗体的编码序列和权利要求9或10所述核酸的核苷酸序列中的一种或多种,或者所述基因工程细胞的细胞内含有重组载体,所述重组载体含有权利要求8所述双特异性抗体的编码序列和权利要求9或10所述核酸的核苷酸序列中的一种或多种;其中,所述囊泡的表面具有磷脂双分子层。14.一种基因工程细胞的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:提供能够内源性分泌囊泡的母细胞并提供重组载体;其中,所述囊泡的表面具有磷脂双分子层;所述重组载体含有权利要求8所述双特异性抗体的编码序列和权利要求9或10所述核酸的核苷酸序列中的一种或多种;将所述的重组载体...
【专利技术属性】
技术研发人员:张铮,许谦,徐勇,李锋,
申请(专利权)人:华中科技大学同济医学院附属同济医院,
类型:发明
国别省市:
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