小鼠细胞样本HPIC-QE-MS靶标代谢流检测方法及其应用技术

本发明专利技术涉及G01N33/48技术领域，具体为小鼠细胞样本HPIC

【技术实现步骤摘要】
小鼠细胞样本HPIC
‑
QE
‑
MS靶标代谢流检测方法及其应用


[0001]本专利技术涉及G01N33/48
，具体为小鼠细胞样本HPIC
‑
QE
‑
MS靶标代谢流检测方法及其应用。

技术介绍

[0002]代谢组学作为“组学”科学下的新兴技术，通过对各种生物样本包括不同种类生物的尿液、血浆、组织和细胞中的代谢特征进行研究得到相关的信息，为后续各种疾病的抑制或者治疗提供依据。然而代谢组学结果会受到各种因素的影响，包括环境、时间、饮食、生理、药物、疾病、性别、遗传和年龄等因素，因此，目前的代谢组学研究通常是确定测量并解释细胞、组织和生物样本(如血液和尿液)中内源性代谢物随时间变化的浓度，活性和通量，通过筛选实验组和对照组之间的不同代谢物，研究与不同代谢物相关的生物进程，以揭示相关生命活动机制，为后续疾病的预防和治疗提供新的思路。
[0003]中国申请专利(授权公告号为CN110596259B)公开了一种基于代谢组学分析鉴别松花粉储藏时间的方法，具体通过制备松花粉提取液并对提取液进行色谱检测和质谱检测，之后对检测数据进行后续分析，目的在于快速寻找不同储藏时间松花粉的代谢产物，来区分鉴别不同储藏时间的松花粉。中国申请专利(公开号CN115097038A)公开了一种与大豆抗疫霉病相关的代谢产物的筛选鉴定方法及应用，具体通过代谢组学方法从空间和时间两个方向来明确与大豆疫霉病相关的重要代谢产物及代谢物修饰化在大豆抗疫过程中的作用，从而揭示大豆对于大豆疫霉菌疾病应答的生物标记物，但是对于动物源生物样本中代谢物提取及后续分析时，方法不具有普适型，且现有包括基因组学、宏基因组学、转录组学、蛋白质组学和代谢组学进行分析的组组学工具，目前无法充分反映转录后调控、酶活性及细胞过程。

技术实现思路

[0004]为了解决上述问题，本专利技术提供小鼠细胞样本HPIC
‑
QE
‑
MS靶标代谢流检测方法，通过代谢流组学来全面研究所有代谢物的流率，明确细胞在生理过程中的代谢活性，为疾病发生的临床早期诊断、药物靶点治疗和预后判断提供强有力的科学依据。
[0005]本专利技术一方面提供了一种小鼠细胞样本HPIC
‑
QE
‑
MS靶标代谢流检测方法，至少包括以下步骤：
[0006](1)对小鼠细胞样本中的代谢物进行提取；
[0007](2)对提取的代谢物进行HPIC
‑
QE
‑
MS检测；
[0008](3)对分析后获得的原始数据进行数据处理及数据分析。
[0009]作为一种优选的技术方案，所述步骤(1)中小鼠细胞样本置于
‑
80℃的低温冰箱中保存，其中作为对照组(小鼠培养过程中采用电子直线加速器对小鼠进行1次X射线全身照射，剂量率1.0J
·
kg
‑1·
min
‑1，辐照剂量2.0J
·
kg
‑1，源皮距100cm)的小鼠细胞样本数为3，作为实验组(正常培养，不进行辐射处理)的小鼠细胞样本数为3。
[0010]优选的，所述步骤(1)中提取具体包括以下步骤：
[0011]S1、将小鼠细胞样本在低温下离心后加入水进行涡旋；
[0012]S2、之后放到干冰中预冷，然后在液氮中进行冻融，涡旋后冰水浴超声10
‑
20min得到混合液；
[0013]S3、向混合液中加入一元醇进行涡旋，之后静置、低温离心；
[0014]S4、将离心后的上清液旋干后复溶，过离心管过滤器，取上清液至进样瓶中，用于HPIC
‑
QE
‑
MS检测。
[0015]作为一种优选的技术方案，所述步骤S1中低温离心的条件为：温度为4℃，转速为1000
‑
2000rpm(离心力216(
×
g)，半径8.6cm)，离心时间为4
‑
6min。
[0016]作为一种优选的技术方案，所述步骤S3中低温离心的条件为：温度为4℃，转速为10000
‑
12000rpm(离心力13800(
×
g)，半径8.6cm)，离心时间为15
‑
20min。
[0017]作为一种优选的技术方案，所述步骤S3中一元醇为甲醇、乙醇、异丙醇中的至少一种；所述一元醇与混合液的质量比为(2
‑
4)：1。优选的，所述一元醇为甲醇，所述一元醇与混合液的质量比为3：1。
[0018]作为一种优选的技术方案，所述步骤S3中一元醇在
‑
40℃下预冷后与混合液进行涡旋。
[0019]作为一种优选的技术方案，本申请提取处理中所述涡旋的时间为20
‑
40s。
[0020]作为一种优选的技术方案，所述步骤S3中静置的条件为
‑
35～
‑
40℃下静置0.8
‑
1.5h。
[0021]作为一种优选的技术方案，所述步骤S4中复溶具体采用超纯水进行复溶，所述复溶条件为：涡旋30s后置于冰水浴中超声4
‑
8min。
[0022]基于本明提供的检测方法，通过控制小鼠细胞样本中的代谢物提取过程中的各参数条件，保证样本中代谢物的提取量和提取纯度，使样本中提取到的代谢物能够有效用于后续HPIC
‑
QE
‑
MS检测。专利技术人在进行检测过程中发现，通过对小鼠细胞样本先进行离心后在进行后续提取处理，尤其是在4℃下，在低离心力的条件下，控制转速为1000
‑
2000rpm离心4
‑
6min，有效除去小鼠细胞样本中的磷酸缓冲盐的同时避免细胞样本受损，影响后续代谢物的提取量和提取纯度。进一步的，在与一元醇混合前，依次进行预冷、液氮中反复冻融三次后超声10
‑
20min，得到细胞样本混合液，处理后的细胞样本混合液与一元醇充分接触提取，尤其是采用甲醇，并将甲醇在
‑
40℃下预冷后在与混合液按照质量比为(2
‑
4)：1混合后进行涡旋、静置，保证样本中代谢物提取前后一致性，提高分析结果的可信度。之后对静置后的混合液在高离心力的条件下进行高速离心15
‑
20min，分离代谢提取物，将样本中的代谢物进行充分分离，含有代谢物的上清液旋干并用超纯水复溶后，通过离心管过滤器得到的上清液充分满足HPIC
‑
QE
‑
MS检测要求。
[0023]作为一种优选的技术方案，所述步骤(2)中HPIC
‑
QE
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MS检测具体使用Dionex ICS6000(Thermo Scientific)高效离子色谱仪对目标化合物进行色谱分离；所述本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种小鼠细胞样本HPIC
‑
QE
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MS靶标代谢流检测方法，其特征在于，至少包括以下步骤：(1)对小鼠细胞样本中的代谢物进行提取；(2)对提取的代谢物进行HPIC
‑
QE
‑
MS检测；(3)对分析后获得的原始数据进行数据处理及数据分析。2.根据权利要求1所述的小鼠细胞样本HPIC
‑
QE
‑
MS靶标代谢流检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中提取具体包括以下步骤：S1、将小鼠细胞样本在低温下离心后加入水进行涡旋；S2、之后放到干冰中预冷，然后在液氮中进行冻融，涡旋后冰水浴超声10
‑
20min得到混合液；S3、向混合液中加入一元醇进行涡旋，之后静置、低温离心；S4、将离心后的上清液旋干后复溶，过离心管过滤器，取上清液至进样瓶中，用于HPIC
‑
QE
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MS检测。3.根据权利要求2所述的小鼠细胞样本HPIC
‑
QE
‑
MS靶标代谢流检测方法，其特征在于，所述步骤S1中低温离心的条件为：温度为4℃，转速为1000
‑
2000rpm，离心时间为4
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6min。4.根据权利要求2所述的小鼠细胞样本HPIC
‑
QE
‑
MS靶标代谢流检测方法，其特征在于，所述步骤S3中一元醇为甲醇、乙醇、异丙醇中的至少一种；所述一元醇与混合液的质量比为(2
‑
4)：1。5.根据权利要求4所述的小鼠细胞样本HPIC
‑
QE
‑
MS靶标代谢流检测方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓军亮，郑思炎，
申请(专利权)人：上海阿趣生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：