用于治疗心脏病的基因疗法载体制造技术

本公开提供了可用于治疗或预防心脏病的方法和组合物。具体地，本公开提供了一种载体，其包括与治疗或预防心脏病，例如心肌病的治疗性基因产物操作性地连接的经修饰的肌钙蛋白T启动子。本公开还提供了重组腺相关病毒(rAAV)病毒粒子、rAAV病毒基因组以及其表达盒和药物组合物。本公开还提供了用于治疗如心脏病等疾病或病症的方法。病或病症的方法。病或病症的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗心脏病的基因疗法载体
[0001]相关申请交叉引用
[0002]本申请要求于2020年7月2日提交的美国临时专利申请序列号63/047,633和于2020年2月13日提交的美国临时专利申请序列号62/976,160的优先权的权益，所述美国临时专利申请的内容特此通过引用整体并入本文。


[0003]本公开涉及用于治疗或预防受试者的心脏病(例如，心肌病)的组合物和方法。具体地，本公开涉及一种载体，其包括与治疗心脏病(例如，心肌病)的治疗性基因产物可操作地连接的心脏特异性启动子。
[0004]对序列表的参考
[0005]本申请经由EFS
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Web电子申请并且包含呈.txt格式的电子提交的序列表。.txt文件含有2021年2月9日创建的名为“TENA_015_02WO_SeqList_ST25.txt”的序列表，并且大小为824千字节。此.txt文件中含有的序列表是说明书的一部分，并且通过引用整体并入本文。

技术介绍

[0006]用于治疗心脏病的基因疗法方法通常采用被配置成有效转导心脏细胞并且以心脏组织特异性方式表达转基因的载体。腺相关病毒(AAV)载体、心脏特异性启动子或两者组合可以用于将编码基因产物(例如，治疗性蛋白)的多核苷酸递送到心脏组织，从而在所述组织中表达基因产物以治疗心脏病。心脏特异性启动子包含肌间线蛋白(Des)、α
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肌球蛋白重链(a
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MHC)、肌球蛋白轻链2(MLC
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2)和心肌肌钙蛋白C(TNNC1或cTnC)启动子以及600个碱基对的心脏肌钙蛋白T(TNNT2)启动子。然而，部分由于病毒载体的包装限制，编码大蛋白的多核苷酸的递送仍然具有挑战性。
[0007]鉴于这些挑战，本领域仍然需要针对心脏病的改进的基因疗法载体。

技术实现思路

[0008]本公开总体涉及用于治疗或预防心脏病(例如心肌病)的组合物和方法。在第一方面，本公开提供了载体，其包括与编码治疗预防心脏病，例如心肌病的治疗性基因产物的多核苷酸可操作地连接的启动子，任选地心脏特异性启动子。所述载体可以是腺相关病毒(AAV)载体。
[0009]在一些方面，本公开提供了一种心肌肌钙蛋白T启动子，其包括具有介于300bp与500bp之间的多核苷酸。在一些实施例中，所述多核苷酸包括与SEQ ID NO:1至85中的任何一个共有至少80％、至少90％或至少100％同一性的序列。在一些实施例中，所述多核苷酸包括与SEQ ID NO:1共有至少80％、至少90％或至少100％同一性的序列。在一些实施例中，所述多核苷酸包括与SEQ ID NO:3共有至少80％、至少90％或至少100％同一性的序列。在一些实施例中，多核苷酸与位于肌钙蛋白T基因的转录起始位点上游并且包含其转录起始
位点的基因组多核苷酸序列共有至少80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。在一些实施例中，相对于肌钙蛋白T基因的转录起始位点，多核苷酸与
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450bp至+1bp的基因组多核苷酸序列共有至少80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。在一些实施例中，相对于肌钙蛋白T基因的转录起始位点，多核苷酸与
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350bp至+1bp的基因组多核苷酸序列共有至少80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。在一些实施例中，相对于肌钙蛋白T基因的转录起始位点，多核苷酸与
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250bp至+1bp的基因组多核苷酸序列共有至少80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。在一些实施例中，相对于肌钙蛋白T基因的转录起始位点，多核苷酸与
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450bp至+50bp的基因组多核苷酸序列共有至少80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。在一些实施例中，相对于肌钙蛋白T基因的转录起始位点，多核苷酸与
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350bp至+50bp的基因组多核苷酸序列共有至少80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。在一些实施例中，相对于肌钙蛋白T基因的转录起始位点，多核苷酸与
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250bp至+50bp的基因组多核苷酸序列共有至少80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。在一些实施例中，所述肌钙蛋白T基因是人肌钙蛋白T基因。
[0010]在一些实施例中，所述启动子是肌肉特异性启动子。在一些实施例中，所述启动子是心脏细胞特异性启动子。在一些实施例中，所述启动子是心肌细胞特异性启动子。在一些实施例中，启动子具有与约600bp的天然肌钙蛋白T启动子相同的细胞类型特异性。在一些实施例中，本文所描述的启动子具有与包括SEQ ID NO:1的参考启动子相同的细胞类型特异性。在一些实施例中，相较于天然肌钙蛋白T启动子，所述启动子表达与其操作性地连接的基因产物高至少约10％、至少约20％、至少约30％。在一些实施例中，本文所描述的启动子表达与其操作性地连接的基因产物比包括SEQ ID NO:1的参考启动子高至少约10％、至少约20％、至少约30％。
[0011]在一些方面，本公开提供了一种载体，其包括与编码基因产物的多核苷酸操作性地连接的本文所描述的启动子中的任何一种启动子。在一些实施例中，所述载体是病毒载体。在一些实施例中，所述病毒载体是腺相关病毒(AAV)载体。在一些实施例中，病毒载体具有至多约5.5kb的包装限制。
[0012]在一些实施例中，基因产物选自MYBPC3、KCNH2、TRPM4、DSG2和ATP2A2蛋白。在一些实施例中，基因产物选自CACNA1C,DMD,DMPK,EPG5,EVC,EVC2,FBN1,NF1,SCN5A,SOS1,NPR1,ERBB4,VIP和MYH7蛋白。在一些实施例中，基因产物是Cas9，任选地选自SpCas9、St1Cas9和SaCas9。
[0013]在一些实施例中，本文所描述的载体包括编码第二基因产物的多核苷酸。在一些实施例中，所述第二基因产物是功能性RNA，任选地微RNA或向导RNA。
[0014]在一些方面，本公开提供了一种分离的细胞，其包括本文所描述的启动子中的任何一种启动子。在一些实施例中，所述分离的细胞是诱导的多能干细胞或分离的心肌细胞。
[0015]在一些方面，本公开提供了一种药物组合物，其包括本文所描述的载体中的任何一种载体。
[0016]在一些方面，本公开提供了一种细胞疗法组合物，其包括本文所描述的分离的细胞中的任何一种分离的细胞。
[0017]在一些方面，本公开提供了一种重组腺相关病毒(AAV)载体基因组，其包括编码
MYBPC3蛋白或其功能变体的MYBPC3多核苷酸以及启动子，其中所述启动子具有介于300bp与500bp之间的多核苷酸。在一些实施例中，所述多核苷酸包括与SEQ 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种经修饰的心肌肌钙蛋白T启动子，其包括具有介于300bp与500bp之间的多核苷酸。2.根据权利要求1所述的启动子，其中所述多核苷酸包括与SEQ ID NO:1至85中的任何一个共有至少80％、至少90％或100％同一性的序列。3.根据权利要求1所述的启动子，其中所述多核苷酸包括与SEQ ID NO:3共有至少80％、至少90％或100％同一性的序列。4.根据权利要求1所述的启动子，其中所述多核苷酸与基因组多核苷酸序列共有至少80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性：(i)所述基因组多核苷酸序列位于肌钙蛋白T基因的转录起始位点上游并且包含所述转录起始位点；或(ii)相对于肌钙蛋白T基因的所述转录起始位点，所述基因组多核苷酸序列为
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450bp至+1bp、
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350bp至+1bp、
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250bp至+1bp、
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450bp至+50bp、
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350bp至+50bp或
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250bp至+50bp；任选地其中所述肌钙蛋白T基因是人肌钙蛋白T基因。5.根据权利要求1至4中任一项所述的启动子，其中所述启动子是：(i)肌肉特异性启动子；和/或(ii)心脏细胞特异性启动子；和/或(iii)心肌细胞特异性启动子。6.根据权利要求1至5中任一项所述的启动子，其中所述启动子具有与以下相同的细胞型特异性：(i)约600bp的天然肌钙蛋白T启动子；和/或(ii)包括SEQ ID NO:1的参考启动子。7.根据权利要求1至6中任一项所述的启动子，其中相较于天然肌钙蛋白T启动子，所述启动子表达与其操作性地连接的基因产物高至少约10％、至少约20％、至少约30％；任选地其中所述天然肌钙蛋白T启动子是包括SEQ ID NO:1的参考启动子。8.一种载体，其包括与编码基因产物的多核苷酸操作性地连接的根据权利要求1至7中任一项所述的启动子。9.根据权利要求8所述的载体，其中所述载体是病毒载体；任选地其中：所述病毒载体是腺相关病毒载体(AAV)和/或其中所述病毒载体具有至多约5.5kB的包装限制；任选地其中所述AAV载体是AAV9或其变体。10.根据权利要求8或权利要求9所述的载体，其中所述基因产物选自：(i)MYBPC3、KCNH2、TRPM4、DSG2和ATP2A2蛋白；或(ii)CACNA1C,DMD,DMPK,EPG5,EVC,EVC2,FBN1,NF1,SCN5A,SOS1,NPR1,ERBB4,VIP和MYH7蛋白。11.根据权利要求8至10中任一项所述的载体，其中所述基因产物是Cas9，任选地选自SpCas9、St1Cas9和SaCas9。12.根据权利要求8至11中任一项所述的载体，其中所述载体包括编码第二基因产物的多核苷酸；任选地其中所述第二基因产物是功能性RNA，任选地微RNA或向导RNA。13.一种分离的细胞，其包括根据权利要求1至7中任一项所述的启动子。
14.根据权利要求13所述的分离的细胞，其中所述分离的细胞是诱导的多能干细胞或分离的心肌细胞。15.一种药物组合物，其包括根据权利要求8至12中任一项所述的载体。16.一种细胞疗法组合物，其包括根据权利要求13或权利要求14所述的细胞。17.一种重组腺相关病毒(AAV)载体基因组，其包括编码MYBPC3蛋白或其功能变体的MYBPC3多核苷酸以及启动子，其中所述启动子是根据权利要求1至7中任一项所述的经修饰的心肌肌钙蛋白T启动子。18.根据权利要求17所述的rAAV载体基因组，其中所述MYBPC3多核苷酸包括至少约3.5kB、包括约3.8kB、为全长MYBPC3或为截短的MYBPC3。19.根据权利要求17或权利要求18所述的rAAV载体基因组，其中所述MYBPC3是人MYBPC3。20.根据权利要求17至19中任一项所述的rAAV载体基因组，其中所述载体以与参考AAV载体约相同、比所述参考AAV载体大至少约10％或大至少约20％的水平表达MYBPC3，所述参考AAV载体包括约600bp的天然肌钙蛋白T启动子。21.一种重组腺相关病毒(AAV)载体基因组，其包括表达盒，所述表达盒按5'至3'的顺序包括：包含启动子的5'区段；多核苷酸，其编码基因产物；以及3'区段，所述3'区段包括polyA信号，所述表达盒任选地侧接有5'末端反向重复序列(ITR)和3'ITR中的一者或两者，其中所述编码所述基因产物的多核苷酸包括3kb到11kb、3kb到5kb、3.5kb到4.5kb或3.7kb到4kb；并且其中：a)所述5'区段和所述3'区段一起包括至多0.8kbp或至多0.9kbp；b)所述5'ITR、5'区段、所述3'区段和3'ITR一起包括或为至多1.2kbp、至多1.3kbp；和/或c)所述载体基因组包括至多4.7kbp、至多4.8kbp、至多4.9kbp、至多5.0kbp或至多5.2kbp。22.根据权利要求21所述的rAAV载体基因组，其中所述5'区段包括至多500bp或至多480bp和/或其中3'区段包括至多200bp或至多150bp。23.根据权利要求21或权利要求22所述的rAAV载体基因组，其中所述编码所述基因产物的多核苷酸包括3.7kbp至3.9kbp，任选地3.8kbp。24.根据权利要求21至23中...

【专利技术属性】
技术研发人员：L，
申请(专利权)人：特纳亚治疗股份有限公司，
类型：发明
国别省市：