一株耐受己酸的酿酒酵母及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株耐受己酸的酿酒酵母及其应用，所述酿酒酵母分类命名为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)M1，保藏编号为CCTCC NO：M 20191005。该酿酒酵母分离于酒醅，经过多轮诱变和筛选，能耐受100 g/L己酸，并且当己酸浓度达到70 g/L时对乙醇发酵无显著影响。响。

【技术实现步骤摘要】
一株耐受己酸的酿酒酵母及其应用


[0001]本专利技术属于食品酿造
，具体涉及一株耐受己酸的酿酒酵母及其应用。

技术介绍

[0002]酵母菌是浓香型白酒生产的重要微生物之一，也是白酒酿造过程中的主要功能微生物之一。在酒醅发酵过程中，大曲糖化酶将原料中的多糖转化成单糖，然后酵母菌将单糖转化成乙醇，生成的乙醇会与酒醅发酵过程产生的多种有机酸发生酯化反应，生成浓香型大曲酒中的酯类香味物质。因此，酵母菌在酒醅发酵过程中的生长情况将直接影响酒醅的发酵质量及白酒产品风味。尽管如此，酵母菌在酒醅中的生长受到入池条件及原料配比情况的限制。在生产实践中如果只关注入池酸度等表观数据，容易因入池酸度等问题导致白酒产品风味差异明显，这就说明酒醅中的有机酸对酒醅发酵效率具有重要影响。
[0003]低浓度有机酸有利于酵母菌生长，高浓度有机酸会抑制酵母菌生长，使得酵母菌难以在高浓度的有机酸条件下正常进行乙醇发酵，限制了其在部分白酒酿造中的应用。己酸是白酒酿造过程的酯类产香化合物的重要前体物质，但发酵过程中积累的己酸会抑制酿酒酵母合成乙醇，进而降低己酸乙酯等重要指标物质积累。筛选耐受己酸的酿酒酵母菌株，既有利于提高白酒酿造过程的出酒率，也能促进主要香体物质合成。

技术实现思路

[0004]本专利技术第一目的在于提供一株耐受己酸的酿酒酵母，该酿酒酵母是一类对己酸具有较高抗性的高效菌，能够耐受高浓度的己酸，同时可以在较高浓度己酸存在下进行正常的乙醇发酵，可以用于白酒酿造的有效候选菌株。
[0005]为实现上述技术目的，本专利技术采用如下技术方案：一株耐受己酸的酿酒酵母，其分类命名为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)M1，保藏编号为CCTCC NO：M 20191005。
[0006]本专利技术的另一目的在于提供上述酿酒酵母在生产乙醇中的应用。
[0007]本专利技术提供了一种具体的应用方式，包括将酿酒酵母经平板培养、种子培养后，种子液接入含己酸的发酵培养基进行发酵培养，生产乙醇。
[0008]作为一种优选的实施方式，平板培养、种子培养的培养基分别为YPD固体培养基、YPD液体培养基，且种子培养的培养基中添加40
‑
60g/L己酸。
[0009]作为一种优选的实施方式，发酵培养基中己酸浓度为0.1
‑
100 g/L。
[0010]作为一种优选的实施方式，平板培养、种子培养和发酵培养温度为25
‑
36℃。
[0011]作为一种优选的实施方式，平板培养、种子培养和发酵培养温度为34
‑
36℃。
[0012]作为一种优选的实施方式，发酵培养基的碳源为葡萄糖、甘油、糖蜜、淀粉中的一种或几种；发酵培养基的氮源为酵母粉、蛋白胨、豆粕中的一种或几种。
[0013]作为一种优选的实施方式，种子液接种量为5~10%。
[0014]作为一种优选的实施方式，发酵培养的时间为48
‑
72h。
[0015]本专利技术的酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae M1对浓度100 g/L己酸具有抗逆性，同时70 g/L己酸不影响酵母本身的乙醇生产能力。该菌株作为白酒酿造过程乙醇合成的微生物菌株，无论在开发新的酿造工艺还是提高生产效率方面都具有很好的应用前景，具有极大的经济效益。
具体实施方式
[0016]下面的实施例对本专利技术方法作详细说明，但对本专利技术没有限制。
[0017]本专利技术涉及的生物材料，其分类命名为：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)M1，已保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏编号为CCTCC NO: M 20191005，保藏日期为2019年12月4日，保藏地址：中国武汉。
[0018]实施例使用的原始菌株是从汤沟酒厂酒醅中筛选得到的野生型酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae A（何珣，蒋学剑，花加伟，陈可泉，柏建新. 原位预处理甘蔗糖蜜对耐高温酿酒酵母突变株Saccharomyces cerevisiae AQ生产乙醇的影响[J]. 广西科学，23（1）：1
‑
6.）诱变、筛选得到。酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae M1形态：呈卵圆形，菌株颜色呈乳白色。
[0019]培养温度范围为25
‑
36 ℃，最佳34 ℃，pH范围为4.0
‑
6.0，最佳为5.0。
[0020]实施例使用的培养基如下：平板培养基：即YPD固体培养基，成分组成为1% Yeast Extract（酵母膏）、2% Peptone（蛋白胨）、2% Dextrose (glucose)（葡萄糖）、2%琼脂粉。
[0021]种子培养基：即YPD液体培养基，成分组成为1% Yeast Extract（酵母膏）、2% Peptone（蛋白胨）、2% Dextrose (glucose)（葡萄糖）、20
‑
60 g/L己酸。
[0022]发酵培养基：即含有己酸的YPD液体培养基，成分组成为1% Yeast Extract（酵母膏）、2% Peptone（蛋白胨）、2% Dextrose (glucose)（葡萄糖）、0.1
‑
100 g/L己酸。
[0023]发酵培养基中的碳源可以等量替换为葡萄糖、甘油、糖蜜和/或淀粉；氮源可以等量替换为酵母粉、蛋白胨和/或豆粕。
[0024]实施例1本实施例具体说明酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae M1的筛选方法。
[0025]获取酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae M1的具体步骤如下：1）菌悬液制备取30 ℃恒温培养1d的原始菌株新鲜斜面，加无菌水15 mL，刮洗下菌株并转入带有玻璃珠的250 mL三角瓶内，向三角瓶中加入含2%氯化锂的无菌水制成菌悬液，调整酵母菌浓度在103个/mL；2）紫外
‑
氯化锂复合诱变取15mL步骤1）的菌悬液，转入含有磁力转子的无菌空平板中，在50 rpm搅拌速度下，置于30 W紫外灯下25 cm处进行紫外照射诱变，照射时间为60 s，诱变结束后取菌悬液涂布于含2%氯化锂的平板培养基中，在30℃下避光倒置培养3 d；3）低能离子注入诱变用无菌水洗涤步骤2）中培养后的酵母菌2次，并制成菌悬液，取0.1 mL菌悬液均匀涂布于无菌空平皿上，以无菌风吹干，在3kV/cm
×
2min，注入剂量为20
×
10
14
ions/cm2条件
下对大肠杆菌进行氮离子注入，离子注入完毕后，取出平皿，在无菌条件下用1 mL无菌水洗脱，涂布到平板培养基上，30℃下避光倒置培养3d；4）初筛将步骤3）诱变得到的若干单菌落接种至斜面培养基上活化，在30℃下倒置培养2 d后，用接种环分别挑取一环活化菌株至其种子培养本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. 一株耐受己酸的酿酒酵母，其特征在于，分类命名为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)M1，保藏编号为CCTCC NO：M 20191005。2.权利要求1所述酿酒酵母在生产乙醇中的应用。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，将酿酒酵母经平板培养、种子培养后，种子液接入含己酸的发酵培养基进行发酵培养，生产乙醇。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，平板培养、种子培养的培养基分别为YPD固体培养基、YPD液体培养基，且种子培养的培养基中添加40
‑
60g/L己酸。5. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于，发酵培养基中己酸浓度为0.1
...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋学剑，张亮，周达中，何珣，朱耀汇，
申请(专利权)人：江苏汤沟两相和酒业有限公司，
类型：发明
国别省市：