CD24作为Hippo通路失活亚型肝细胞癌生物标志物的应用制造技术

本发明专利技术公开了CD24作为Hippo通路失活亚型肝细胞癌生物标志物的应用，属于生物医药领域。本发明专利技术研究发现CD24在肝细胞癌中表达具有异质性，其可以通过Hippo通路下游转录因子YAP激活的SOX4调节；当Hippo通路失活时，CD24会呈现异常高表达；CD24可通过结合巨噬细胞Siglec10，抑制其吞噬，逃避免疫；降低Hippo通路失活正常肝细胞表达CD24可以抑制肝肿瘤的发生，降低Hippo通路失活肝癌细胞表达CD24可以抑制肿瘤的发展；本发明专利技术提供的Hippo通路失活肝细胞癌亚型的生物标志物可作为该类肝细胞癌预后评价的指标和Hippo通路失活肝细胞癌亚型治疗的药物靶点。亚型治疗的药物靶点。亚型治疗的药物靶点。

【技术实现步骤摘要】
CD24作为Hippo通路失活亚型肝细胞癌生物标志物的应用


[0001]本专利技术涉及生物医药领域，特别是涉及CD24作为Hippo通路失活亚型肝细胞癌生物标志物的应用。

技术介绍

[0002]原发性肝癌(肝细胞癌，hepatocellular carcinoma，HCC)是全世界常见的恶性肿瘤之一。据统计，我国原发性肝癌发病率位居恶性肿瘤的第四位，几乎占全球发病人数的一半，其致死率高居恶性肿瘤第二位。肝癌病人的预后数据显示：肝癌患者五年总生存率仅为14.1％。目前处于临床试验期的HCC治疗方法，大部分是将免疫阻抑点抗体疗法与酪氨酸激酶的小分子或抗体抑制药物联合应用。然而研究表明，尽管酪氨酸激酶通路抑制剂和PD
‑
1/PD
‑
L1抗体药获得了喜人的效果，实际上仅对部分患者有效，大部分患者仍然面临着复发、转移的困境，提示肝细胞癌在靶向药和免疫治疗响应上存在异质性。近年的研究数据表明，临床用药时缺乏将HCC患者按照肿瘤分子分型精细化分层筛选，是影响试验药物最终进入临床应用的关键原因，同时也是部分HCC患者用药后无法获得客观缓解的根本原因。
[0003]随着多组学测序技术突飞猛进，HCC的分子分型已经取得了不少进展，包括利用代谢组学在内的多组学联合分型，将肝癌在大体上可以大致分为三种分子亚型：S
‑Ⅰ
、S
‑Ⅱ
和S
‑Ⅲ
，其中Hippo通路失活的肝癌细胞亚型约占12％，包含在恶性程度较高的S
‑
III大类中，与肝癌患者的不良预后密切相关。
[0004]CD24是一个小分子膜蛋白，常被糖基磷脂酰肌醇修饰，形成复杂的异质化蛋白，分子量在20
‑
70kDa不等，其功能差异可能与其在不同组织器官中的糖基化水平密切相关。研究表明，分化成熟的肝脏细胞不表达CD24，而在肝细胞癌HCC中，约2/3的肿瘤标本中能检测到CD24的表达，并且患者内的肿瘤结节间的CD24表达差异明显，提示CD24在肝细胞癌中的表达异质性。CD24的异常表达与HCC患者肿瘤切除术后的复发转移正相关，提示HCC中CD24可能促进肝细胞癌的发生发展。
[0005]Hippo信号通路是近来受到广泛关注的一条信号通路，其可以参与调控多种细胞和器官的稳态。最近的研究表明，Hippo信号通路在哺乳动物肝脏发育、肝脏细胞命运和死亡，肝脏再生以及肝癌发生发展等生理和病理过程中都发挥了非常重要的调控作用。其中YAP是Hippo信号通路中重要的转录因子，而在许多肿瘤中都能发现YAP对肿瘤细胞的调控作用。但迄今仍未有CD24与Hippo信号通路调控的相关性研究，而CD24通过Hippo通路调控HCC的研究更是未见报道。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供CD24作为Hippo通路失活亚型肝细胞癌生物标志物的应用，本专利技术公开的CD24可作为该类肝细胞癌预后评价的指标和治疗的药物靶点，以解决上述现有技术存在的问题。
[0007]本专利技术的技术方案之一，CD24作为Hippo通路失活亚型肝细胞癌生物标志物的应
用，所述应用包括如下任一应用：
[0008](1)在制备诊断Hippo通路失活亚型肝细胞癌产品中的应用；
[0009](2)在制备预后评价Hippo通路失活亚型肝细胞癌产品中的应用；
[0010](3)在制备防治Hippo通路失活亚型肝细胞癌产品中的应用。
[0011]进一步地，所述防治Hippo通路失活亚型肝细胞癌产品通过下调所述CD24表达，抑制Hippo下游转录因子YAP5SA激活的肝细胞癌发生，减少CD24与巨噬细胞的结合，以防治Hippo通路失活亚型肝细胞癌。
[0012]进一步地，所述下调CD24表达的方法包括使用CD24 shRNA抑制所述CD24的表达。
[0013]进一步地，所述CD24 shRNA的正义链如SEQ ID NO.1所示，反义链如SEQ ID NO.2所示。
[0014]进一步地，所述CD24包括CD24信使RNA或CD24蛋白。
[0015]进一步地，所述诊断或预后评价Hippo通路失活亚型肝细胞癌的产品包括检测CD24表达水平的试剂盒或试剂。
[0016]本专利技术的技术方案之二，一种检测权利要求1中所述的生物标志物的产品，所述产品包括检测CD24信使RNA或CD24蛋白表达水平的产品。
[0017]本专利技术的技术方案之三，一种预防或治疗Hippo通路失活亚型肝细胞癌的药物，所述药物包括抑制CD24表达的shRNA或试剂。
[0018]本专利技术的技术方案之四，一种根据上述的生物标志物在筛选治疗Hippo通路失活亚型肝细胞癌的候选药物中的应用。
[0019]本专利技术的技术方案之五，一种筛选治疗Hippo通路失活亚型肝细胞癌的候选药物的方法，用待筛选物质处理表达CD24基因的培养体系，并检测所述培养体系中CD24基因的表达水平，若所述待筛选的物质可以抑制CD24基因的表达和发挥功能，则表明所述待筛选物质是治疗肝细胞癌的候选物质。
[0020]本专利技术公开了以下技术效果：
[0021]本专利技术提供一组Hippo通路失活肝细胞癌亚型肿瘤标志物，可以应用于该型肝癌的诊断和预后评估。研究发现CD24在肝细胞癌中表达具有异质性，其主要受到Hippo下游转录因子YAP激活通路调节。当Hippo通路失活时，CD24会呈现异常高表达。CD24可通过结合巨噬细胞Siglec10，抑制其吞噬，逃避免疫。将CD24基因敲低的肝癌细胞株通过尾静脉注入小鼠体内，可发现小鼠的成瘤率降低。因此，本专利技术公开的所述标志物CD24检测水平可作为诊断或预后评价的指标，为临床肝癌治疗提供一定的思路，同时所述标志物CD24检测水平可以应用于Hippo通路失活肝细胞癌亚型治疗的药物靶点。
附图说明
[0022]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0023]图1为Hippo通路失活亚型与其他组生存率的比较；
[0024]图2为CD24在Hippo通路失活HCC亚型中的表达；
[0025]图3为人肝癌组织样本和相应的癌旁组织中CD24的表达情况；
[0026]图4为PB
‑
YAP5SA基因质粒(A)和PB
‑
YAP基因质粒(B)的质粒图谱及模拟Hippo通路失活的YAP基因活化突变体基因YAP5SA整合进入小鼠肝脏，诱发小鼠肝癌的原发型肝癌小鼠成瘤模型结果图(C)，其中，CON为YAP基因质粒，HCC为YAP5SA基因质粒；
[0027]图5为Real
‑
time PCR(B)和RNA seq检测(A)肝癌及癌旁组织中CD24的表达情况本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.CD24作为Hippo通路失活亚型肝细胞癌生物标志物的应用，其特征在于，所述应用包括如下任一应用：(1)在制备诊断Hippo通路失活亚型肝细胞癌产品中的应用；(2)在制备预后评价Hippo通路失活亚型肝细胞癌产品中的应用；(3)在制备防治Hippo通路失活亚型肝细胞癌产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述防治Hippo通路失活亚型肝细胞癌产品通过下调所述CD24表达，抑制Hippo下游转录因子YAP5SA激活的肝细胞癌发生，减少CD24与巨噬细胞的结合，以防治Hippo通路失活亚型肝细胞癌。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述下调CD24表达的方法包括使用CD24 shRNA抑制所述CD24的表达。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述CD24 shRNA的正义链如SEQ ID NO.1所示，反义链如SEQ ID NO.2所示。5.根据权利要求1所述的应用，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：何小柏，陈林洁，方权，张杨杨，郑晓光，
申请(专利权)人：杭州医学院，
类型：发明
国别省市：