一种化学修饰Taq酶储存液制造技术

本发明专利技术提供一种化学修饰Taq酶的储存液及其应用，属于生物技术领域。本发明专利技术的化学修饰Taq酶储存液中通过添加海藻糖和/或山梨醇，不仅有利于在温度变化时维持化学修饰Taq酶的活性，且不会对后续PCR反应产生抑制。且不会对后续PCR反应产生抑制。且不会对后续PCR反应产生抑制。

【技术实现步骤摘要】
一种化学修饰Taq酶储存液


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种化学修饰Taq酶储存液。

技术介绍

[0002]化学修饰Taq酶是通过化学基团与Taq酶中赖氨酸上的∈
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氨基发生化学反应，使Taq酶∈
‑
氨基形成新的化学键连接上新的化学基团，赖氨酸上化学基团的改变会导致蛋白的立体相互作用或者构型发生变化，进而导致蛋白的失活，而这种失活可以通过在提高温度后的温育过程中发生可逆反应，蛋白恢复活性。比如文献报道的柠康酰化、四氟琥珀酰化、乙酰乙酰化、马来酰化、脒化、三氟乙酰化和醛基化等化学修饰Taq酶均是通过该原理来达到Taq酶的热启动效果。这种化学修饰Taq酶另一特点是，随着PCR每进行一个高温变性步骤过程，就会进行一部分DNA聚合酶活性的释放，所以是在PCR循环过程中是进行“缓释”的，这也是该类修饰酶特异性较好的原因之一。
[0003]随着qPCR技术用于诊断行业，对qPCR过程中的各种指标的需求也越来越严格。比如对酶的长时间储存稳定性的需求，或者在一些加压实验中酶活损失尽可能的降低，以避免由于酶活的损失导致各项检测指标(qPCR的检出率或者产量)发生变化。US6183998B1公开了一种Taq酶储存缓冲液的基础成分(20mM Tris
‑
HCl、100mM KCl、1mM DTT、0.1mM EDTA、0.5％Tween 20、50％Glycerol、0.5％NP
‑
40)，然而，关于化学修饰Taq酶的储存缓冲液却鲜有报道。本申请发现使用Taq酶储存液的基础配方储存化学修饰Taq酶，在37℃储存3天会导致酶活显著降低，进而影响化学修饰酶的扩增性能。

技术实现思路

[0004]本专利技术旨在针对现有技术的不足，提供一种化学修饰Taq酶的储存液，其能够显著提高化学修饰Taq酶的储存稳定性。
[0005]在第一方面，本申请提供一种化学修饰Taq酶的储存液，所述储存液包含Tris
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HCl、KCl、NP
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40、Tween
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20、EDTA、DTT、甘油和添加剂，所述添加剂选自海藻糖、蔗糖、葡萄糖、棉子糖、山梨醇、甘露醇、甜菜碱、PEG2000和PEG8000中的至少一种，例如至少一种、至少两种、至少三种、至少四种、至少五种、至少六、至少七种、至少八种和至少九种，优选一种或两种。
[0006]在一些实施方案中，所述储存液中Tris
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HCl的浓度为15
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25mM，优选18
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22mM，最优选20mM；KCl的浓度为50
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150mM，优选80
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120mM，最优选100mM；NP
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40的浓度为0.2％
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0.8％，优选0.4％
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0.6％，最优选0.5％；Tween
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20的浓度为0.2％
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0.8％，优选0.4％
‑
0.6％，最优选0.5％；EDTA的浓度为0.05
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0.2mM，优选0.08
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0.15mM，最优选0.1mM；DTT的浓度为0.5
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2mM，优选0.8
‑
1.5mM，最优选1mM；甘油的浓度为20％
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70％，优选40％
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60％，最优选50％。
[0007]在一些实施方案中，所述葡萄糖的浓度为50
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500mM，优选100
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300mM，包括所述范围内的100mM，150mM，200mM，250mM，300mM；所述棉子糖的浓度为0.5％
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10％，优选1％
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5％，包括所述范围内的1％，2％，3％，4％和5％；所述PEG2000的浓度为0.5％
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10％，优选1％
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5％，包括所述范围内的1％，2％，3％，4％和5％；所述PEG8000的浓度为0.5％
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10％，优选1％
‑
5％，包括所述范围内的1％，2％，3％，4％和5％。
[0008]在一些实施方案中，所述添加剂选自海藻糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇和甜菜碱中的至少一种，例如至少一种、至少两种、至少三种、至少四种和至少五种，优选一种或两种。
[0009]在一些实施方案中，所述添加剂是海藻糖和/或山梨醇。
[0010]在一些实施方案中，所述蔗糖的浓度为50
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500mM，优选100
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300mM，包括所述范围内的100mM，150mM，200mM，250mM，300mM；所述甘露醇的浓度为50
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500mM，优选100
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300mM，包括所述范围内的100mM，150mM，200mM，250mM，300mM；所述甜菜碱的浓度为200
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1000mM，优选400
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800mM，包括所属范围内的400mM，500mM，600mM，700mM，800mM。
[0011]在一些实施方案中，所述海藻糖的浓度为10
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600mM，优选20
‑
500mM，更优选50
‑
400mM，包括所述范围内的50mM，60mM，70mM，80mM，90mM，100mM，125mM，150mM，175mM，200mM，225mM，250mM，275mM，300mM，325mM，350mM，375mM，400mM。
[0012]在一些实施方案中，所述山梨醇的浓度为10
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600mM，优选20
‑
500mM，更优选50
‑
400mM，包括所述范围内的50mM，60mM，70mM，80mM，90mM，100mM，125mM，150mM，175mM，200mM，225mM，250mM，275mM，300mM，325mM，350mM，375mM，400mM。
[0013]本申请的第二方面提供所述储存液在保存化学修饰Taq酶中的应用。
[0014]在一些实施方案中，所述化学修饰Taq酶是酸酐修饰。在一些实施方案中，所述化学修饰Taq酶是柠康酰基修饰。在一些实施方案中，所述化学修饰Taq酶是四氟琥珀酰基修饰。在一些实施方案中，所述化学修饰Taq酶是乙酰基修饰。在一些实施方案中，所述化学修饰Taq酶是脒基修饰。在一些实施方案中，所述化学修饰Taq酶是三氟乙酰基修饰。在一些实施方案中，所述化学修饰Taq酶是醛基修饰。
[0015]本申请的第三方面提供一种试剂组合物，所述试剂组合物包含化学修饰Taq酶和本申请第一方面所述储存液。
[0016]在一些实施方案中，所述化学修饰Taq酶是酸酐修饰。在一些实施方案中，所述化学修饰Taq酶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种化学修饰Taq酶储存液，其包含Tris
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HCl、KCl、NP
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40、Tween
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20、EDTA、DTT、甘油和添加剂，所述添加剂选自海藻糖、蔗糖、葡萄糖、棉子糖、山梨醇、甘露醇、甜菜碱、PEG2000和PEG8000中的一种或两种。2.权利要求1所述的储存液，其中Tris
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HCl的浓度为15
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25mM，优选18
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22mM，最优选20mM；KCl的浓度为50
‑
150mM，优选80
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120mM，最优选100mM；NP
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40的浓度为0.2％
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0.8％，优选0.4％
‑
0.6％，最优选0.5％；Tween
‑
20的浓度为0.2％
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0.8％，优选0.4％
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0.6％，最优选0.5％；EDTA的浓度为0.05
‑
0.2mM，优选0.08
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0.15mM，最优选0.1mM；DTT的浓度为0.5
‑
2mM，优选0.8
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1.5mM，最优选1mM；甘油的浓度为20％
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70％，优选40％
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【专利技术属性】
技术研发人员：聂俊伟，张力军，曹林，操维芳，张潇飞，
申请(专利权)人：南京诺唯赞生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：