水解酶NUDIX在降解赭曲霉毒素A中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种水解酶NUDIX及其编码基因、重组载体及应用，水解酶NUDIX能够降解饲料或食品中的赭曲霉毒素A，减少解赭曲霉毒素A对动物及人类健康的危害。动物及人类健康的危害。动物及人类健康的危害。

【技术实现步骤摘要】
水解酶NUDIX在降解赭曲霉毒素A中的应用


[0001]本专利技术涉及生物
，更具体地，涉及一种水解酶NUDIX在降解赭曲霉毒素A中的应用。

技术介绍

[0002]赭曲霉毒素是由曲霉属的7种曲霉和青霉属的6种青霉菌产生的一组重要的、污染食品的真菌毒素，其中，毒性最大、分布最广、产毒量最高、对农产品的污染最重、与人类健康关系最密切的是赭曲霉毒素A(OchratoxinA，OTA)。OTA具有肾脏毒性、肝脏毒性、免疫毒性，以及致畸、致癌和致突变作用等多种毒性，对动物和人体健康有很大的潜在危害。世界各国均重视对OTA的检测和控制，制定了相关限量标准，以便于确保食品安全和消除国际贸易中的技术壁垒。因此，开展赭曲霉毒素的抑制与去除技术研究，对于保护人类和动物健康，确保国家食品安全和粮食安全具有重大的意义。

技术实现思路

[0003]本专利技术的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
[0004]本专利技术还有一个目的是提供一种水解酶NUDIX，能够降解赭曲霉毒素A，减少解赭曲霉毒素A对动物及人类健康的危害。
[0005]为了实现根据本专利技术的这些目的和其它优点，本专利技术提供了水解酶NUDIX，编码所述水解酶NUDIX的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0006]优选的，还包括氨基酸序列SEQ ID NO.1中的至少一个氨基酸突变形成的氨基酸序列。
[0007]本专利技术提供了编码所述的水解酶NUDIX的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0008]本专利技术提供了包括所述基因的重组载体。
[0009]本专利技术提供了水解酶NUDIX在降解赭曲霉毒素A中的应用。
[0010]优选的是，所述的应用包括降解饲料或食品中的赭曲霉毒素A。
[0011]本专利技术至少包括以下有益效果：
[0012]本申请提供的水解酶NUDIX够降解赭曲霉毒素A，减少解赭曲霉毒素A对动物及人类健康的危害。
[0013]本专利技术的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本专利技术的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
附图说明
[0014]图1为水解酶NUDIX的SDS
‑
PAGE纯化图；
[0015]图2为水解酶NUDIX在不同温度下的活性图；
[0016]图3为水解酶NUDIX在不同pH下的活性图。
[0017]其中，图1中1：蛋白marker；2：水解酶NUDIX；3：对照组。
具体实施方式
[0018]下面结合实施例对本专利技术做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
[0019]应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不排除一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
[0020]本申请的实施例提供了水解酶NUDIX，编码所述水解酶NUDIX的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，SEQ ID NO.1为：MAQGAFVIIQNDGRDILLVKRKHSLMGFARRRDRRRNTSRSRQRGLRRNRLRDHHKKSRVKAGIRYTARFHRSHYRRNSADERAGNRRLTLVFPKPAAAVHGAEQKTANKRRTQWGGKSGSPRPESVIHPSAKKKAESI；
[0021]其中，该酶基因编码139个氨基酸和一个终止密码子，没有信号肽，因此，成熟的水解酶NUDIX的理论分子量为17kDa。
[0022]本申请的实施例提供了编码所述的水解酶NUDIX的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，SEQ ID NO.2为：atggcacaaggcgcttttgtcatcatacaaaatgacgggcgggacatattgctcgtaaaacgaaaacattcccttatgggatttgcccggcggcgggatcgcagaaggtgaaacacctgaagccgcagccgtcagagaggccttcgaagaaaccggttataacgtgaccatcataaaaaaagccggtgagtatgaaaggccggcatttgaagatacacagcacgttttcatcggagccattaccggaggaactccgctgatgaacgggccggaaaccgccgccttacgctggttttccccaaaccggctgccgctgttcatggtgccgaacagaaaacagcaaataaaagacggactcaatggggcggcaaatcataaggcagtccttaaagaccggaatctgttatccatccttgatctgctaagaaaaaagctgagagtatag；
[0023]其中，本申请通过全基因合成的方法获得了本申请的成熟的水解酶NUDIX基因，DNA全序列分析结果表明，水解酶NUDIX结构基因全长445bp。将水解酶NUDIX序列及其氨基酸序列在GenBank中进行BLAST比对，其氨基酸序列与来源于贝莱斯芽孢杆菌NUDIX氨基酸序列一致性为86％，说明本专利技术的水解酶NUDIX是一种新的OTA解毒酶。
[0024]本申请提供了包括所述基因的重组载体，本申请优选的重组载体命名为pET28a
‑
NUDIX。将本专利技术的水解酶NUDIX基因插入到表达载体合适的限制性酶切位点之间，使其核苷酸序列可操作的与表达调控序列相连接。作为本专利技术的一个最优选的实施方案，优选为将本专利技术的水解酶NUDIX基因插入到质粒pET28a上的BamHI和HindIII限制性酶切位点之间，使该核苷酸序列位于T7启动子的下游并受其调控，得到重组大肠表达质粒pET28a
‑
NUDIX。
[0025]示例性地，本申请优选的水解酶NUDIX的重组菌株为大肠杆菌。
[0026]示例性地，水解酶NUDIX的制备方法，包括以下步骤：
[0027]1.用包含编码水解酶NUDIX的基因的重组载体转化宿主细胞，得到重组菌株；
[0028]2.培养重组菌株，诱导水解酶NUDIX表达；
[0029]3.分离纯化获得的水解酶NUDIX。
[0030]通过上述方法制备的水解酶NUDIX的最适温度37℃，最适pH为7.0，在pH6.0
‑
7.0范围内仍保持60％以上的活性。在最适温度和最适pH下，本专利技术的水解酶NUDIX对OTA的降解率为66％。
[0031]本申请提供了水解酶NUDIX在降解赭曲霉毒素A中的应用。
[0032]在另一种技术方案中，所述的应用包括降解饲料或食品中的赭曲霉毒素A。
[0033]该酶可以应用于农业、饲料和食品等工业，减少OTA对动物及人类健康的危害。
[0034]实施例
[0035]一、试验材料和试剂
[0036]1、菌株及载体：大肠杆菌表达载体pET28a及大肠杆菌菌株Bl21(DE3)；
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.水解酶NUDIX，其特征在于，编码所述水解酶NUDIX的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.根据权利要求1所述的水解酶NUDIX，其特征在于，还包括氨基酸序列SEQ ID NO.1中的至少一个氨基酸突变形成的氨基酸序列。3.编码如权利要求1所述的水解酶NU...

【专利技术属性】
技术研发人员：邢福国，邰博文，伊斯拉特，
申请(专利权)人：中国农业科学院农产品加工研究所，
类型：发明
国别省市：