一种可口革囊星虫抗菌肽及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物工程技术领域，特别涉及可口革囊星虫抗菌肽制备及其应用，本发明专利技术首次公开了来源于星虫动物门的抗菌肽，首次从可口革囊星虫转录组文库中获取了一种新颖的Macin抗菌肽家族成员，命名为PhEs_Macin

【技术实现步骤摘要】
一种可口革囊星虫抗菌肽及其应用


[0001]本专利技术属于生物工程
，特别涉及一种可口革囊星虫抗菌肽及其应用。

技术介绍

[0002]星虫动物门的可口革囊星虫(Phascolosoma esculenta)，又名弓形革囊星虫，俗名“泥丁”、“泥虫”，为我国的特有地方种，其个体大、肉质鲜美、营养与药用保健价值高，在我国具有悠久的食用、药用历史，是广受欢迎的海产珍品之一。现代药理研究表明，可口革囊星虫富含星虫多糖、星虫多肽和纤溶酶等多种活性物质，具有保护心脑血管系统、调节免疫、抗疲劳和抗氧化等作用。此外，对可口革囊星虫体壁和体腔液的抗菌活性研究结果显示，其体壁和体腔液中存在抗菌活性物质，并且该活性物质对金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性细菌具有明显的抗菌效果。然而，该活性物质的结构鉴定和制备纯化的方法有待进一步的研究，尚不能大规模制备应用。
[0003]海洋无脊椎动物由于缺乏高等脊椎动物的获得性免疫系统，只能依靠非特异性的先天性免疫系统抵御细菌、病毒和真菌等病害微生物的入侵。抗菌肽(antimicrobial peptides，AMPs)作为先天性免疫系统的重要组成部分，广泛存在于海洋无脊椎动物中，不仅可以作为抗菌活性物质直接抑制杀灭病害微生物，而且可以作为免疫效应分子协调宿主免疫防御系统，是海洋无脊椎动物抵御病害微生物入侵的重要免疫防御机制。目前，已经从刺胞动物、环节动物、软体动物、甲壳动物和棘皮动物等海洋无脊椎动物中发现水母素、贻贝素、防御素、沙虫素、对虾抗菌素和绿球海胆素等广谱抗菌的新型抗菌肽。然而，目前海洋特有的星虫动物门中尚未有抗菌肽被发现和鉴定的研究报道。
[0004]天然的抗菌肽通常由有10～60个氨基酸组成小分子多肽，通常具有广谱抗菌性，对病毒、细菌、真菌和寄生虫等具有明显的抑制杀灭作用。抗菌肽一般带正电荷，具有双亲性(亲脂和亲水)，通常具有α螺旋、β折叠和β发夹等二级结构。近年来，随着我国水产养殖业高速发展，水环境污染和病害生物的大量爆发，制约了水产养殖业的可持续发展。目前，水产养殖业中主要采用抗生素和化学药物防治养殖动物的病害。抗生素和化学药物的大量使用会导致严重的药物残留和病害菌的耐药性增加。然而，天然抗菌肽热稳定性和水溶性较好，并且几乎不会产生耐药性，是一种生物安全的新型抗生素，不仅可替代传统抗生素直接抑杀病害生物，还能增强养殖动物的免疫力，提高生产效益。Macin抗菌肽家族成员是一种带正电荷的分泌性多肽，富含半胱氨基酸，具有广谱抗菌性，2004年首次在环节动物肠蛭(Theromyzon tessulatum)中发现Macin抗菌肽家族成员基因。然而，作为广西北部湾特色海水养殖品种可口革囊星虫中尚未有相关的抗菌肽研究的报道。

技术实现思路

[0005]鉴于上述内容，本申请提供一种PhEs_Macin
‑
1_α抗菌肽，可以用作水产养殖中生态安全的抗菌添加剂，具有广泛的应用前景。
[0006]为达到上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：
[0007]本专利技术提供一种可口革囊星虫PhEs_Macin
‑
1抗菌肽，所述抗菌肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；具体为：
[0008]MAVMRSLGLVLGCCLLVAVMWAPPAEGALCYTSWSRCSRWSSWGTGWLWKSCNDRCKELGRRGGRCRLADAKDCPLVKKAYQCQCY。
[0009]本专利技术的另一目的是提供一种可口革囊星虫PhEs_Macin
‑
1_α抗菌肽，为选自PhEs_Macin
‑
1抗菌肽具有抗菌活性的多肽片段，该多肽片段可形成两亲性的α螺旋结构，带有5个正电荷，是一种α螺旋阳离子抗菌肽，命名为：PhEs_Macin
‑
1_α。其氨基酸序列为SEQ ID NO.2；具体为：
[0010]WLWKSCNDRCKELGRRGGRCRL。
[0011]上述可口革囊星虫PhEs_Macin
‑
1_α抗菌肽的应用也在本专利技术的保护范围之内，所述抗菌肽的应用包括：在水产养殖业中作为抗菌添加剂使用。
[0012]一种含有上述抗菌肽的多肽或蛋白质也在本专利技术的保护范围之内。
[0013]本专利技术具有如下有益效果：
[0014]本专利技术首次提供了一种来源于海洋星虫动物的具有广谱抗菌活性的Macin抗菌肽家族成员，该抗菌肽活性片段能够通过固相化学合成进行大量制备，并且该抗菌肽活性片段对水产行业中常见的致病菌和食源性致病菌均具有较强的抑制和杀灭作用，可以用作水产养殖中生态安全的抗菌添加剂，具有广泛的应用前景。
附图说明
[0015]图1是PhEs_Macin
‑
1抗菌肽的成熟肽三级蛋白结构图；
[0016]图2是PhEs_Macin
‑
1_α抗菌肽两亲性的α螺旋结构图；图中，深黑色底色代表亲水性氨基酸，浅白色底色代表疏水性氨基酸，箭头所指方向为α螺旋结构的疏水面；
[0017]图3是PhEs_Macin
‑
1_α抗菌肽杀灭副溶血弧菌的培养皿的照片。
具体实施方式
[0018]为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本专利技术的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本专利技术。但是本专利技术能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本专利技术内涵的情况下做类似改进，因此本专利技术不受下面公开的具体实施的限制。
[0019]实施例1：
[0020]可口革囊星虫PhEs_Macin
‑
1抗菌肽基因序列的获取：
[0021]收集可口革囊星虫的肾管、肠、体壁和吻等组织，对这些组织分别提取总RNA，质检合格后开展转录组文库测序，并利用trinity软件完成可口革囊星虫参考转录本的组装，最后利用blastp软件采用同源比对的方式首次筛选到一种可口革囊星虫PhEs_Macin
‑
1抗菌肽基因全长cDNA序列，其基因全长cDNA序列如下：
[0022]ATGGCAGTCATGAGAAGCCTGGGGCTCGTGCTGGGATGCTGTCTTCTGGTAGCTGTAATGTGGGCTCCACCAGCAGAGGGCGCCCTGTGTTACACGTCCTGGAGCCGCTGTAGCAGGTGGAGCTCGTGGGGAACTGGATGGCTGTGGAAGAGCTGTAACGACCGATGCAAGGAGCTTGGACGCCGTGGTGGAAGGTGTCGCCTCGCTGATGCCAAAGATTGCCCCCTTGTCAAAAAAGCCTACCAGTGTCAGTGTTATTAG。
[0023]将PhEs_Macin
‑
1抗菌肽基因全长cDNA转译为氨基酸序列，PhEs_Macin
‑
1抗菌肽全长氨基酸序列为SEQ ID NO.1，具本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可口革囊星虫PhEs_Macin
‑
1抗菌肽，其特征在于，所述抗菌肽的氨基酸序列为SEQ ID NO.1。2.如权利要求1所述可口革囊星虫PhEs_Macin
‑
1的抗菌肽，其特征在于，所述抗菌肽的抗菌活性中心肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述活性中心肽段命名为PhEs_Macin
‑<...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟声平，李婷婷，黄国强，黄亮华，赵龙岩，
申请(专利权)人：广西中医药大学，
类型：发明
国别省市：