一种增强型StayGold黄色荧光蛋白及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种增强型StayGold黄色荧光蛋白及其应用，涉及重组蛋白技术领域，该增强型StayGold黄色荧光蛋白为StayGold的氨基酸序列中包含了192位赖氨酸突变酪氨酸氨基酸，即可将绿色的荧光StayGold蛋白变成黄色的YStayGold。本发明专利技术提供的YStayGold的最大激发波长为500nm，最大发射波长为515nm。本发明专利技术提供的YStayGold具有很强的热稳定性，Tm大于95℃。比市场上常用的YFP黄色荧光蛋白的Tm值高出15℃，且荧光强度也高出8倍，说明YStayGold黄色荧光蛋白明显比市场上常用的YFP黄色荧光蛋白具有更广阔的应用市场。蛋白具有更广阔的应用市场。蛋白具有更广阔的应用市场。

【技术实现步骤摘要】
一种增强型StayGold黄色荧光蛋白及其应用


[0001]本专利技术涉及重组蛋白
，具体涉及一种增强型StayGold黄色荧光蛋白及其应用。

技术介绍

[0002]运用荧光蛋白监测细胞活动、标记蛋白表达的技术已经深入蛋白质组学的研究。最早的荧光蛋白是在1962年由下村修等人在Aequorea victoria水母中发现的绿色荧光蛋白。在绿色荧光蛋白蛋白广泛应用后，科学人员发现单纯的绿色荧光蛋白通常不能完全满足研究需要，比如在很多实验中需要同时标记两种以上的细胞或蛋白。因此，科研人员后期通过研究绿色荧光蛋白的结构特点，通过对绿色荧光蛋白的某些氨基酸进行突变，从而获得了不同颜色的变种蛋白，如黄色、蓝色、青色以及红色等。多种颜色荧光蛋白的发现不仅为科研提供了方便，同时也扩展了荧光蛋白的应用市场。
[0003]Hirano，Masahiko等人在2022年从Cytaeis uchidae水母中发现了一种新的绿色荧光蛋白StayGold，该荧光蛋白的光稳定性比目前常用的荧光蛋白都高出一个数量级，已经很好地应用于观察内质网的动态成像[Hirano，Masahiko et al.“Ahighlyphotostable and bright green fluorescent protein.”Nature biotechnology，10.1038/s41587
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022
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01278
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2.25Apr.2022]，该荧光蛋白比目前常用的绿色荧光蛋白具有更强的光稳定性，提示着其具有更广泛的应用市场。目前对于该绿色荧光蛋白的开发研究还欠缺，因其绿色荧光稳定性比其他荧光蛋白要强，因此基于其绿色荧光设计出其变种蛋白，也具有很高的市场应用价值。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于克服现有StayGold绿色荧光蛋白的一些应用限制，提供了一种增强型StayGold黄色荧光蛋白及其应用。
[0005]本专利技术通过以下技术方案来实现上述目的：
[0006]本专利技术提供一种增强型StayGold黄色荧光蛋白，命名为YStayGold，该增强型StayGold黄色荧光蛋白序列为野生型StayGold蛋白的突变序列，且所述突变序列中的突变为K192Y，即野生型StayGold蛋白的第192位氨基酸残基由赖氨酸突变成酪氨酸，即可将绿色的荧光StayGold蛋白变成黄色的YStayGold。
[0007]进一步改进在于，所述增强型StayGold黄色荧光蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0008]本专利技术还提供一种多核苷酸，所述多核苷酸编码上述增强型StayGold黄色荧光蛋白。
[0009]进一步改进在于，所述多核苷酸的序列如SEQ ID NO.2所示。
[0010]本专利技术还提供一种重组质粒，所述重组质粒为含有上述多核苷酸且能够翻译表达出上述增强型StayGold黄色荧光蛋白的表达载体。
[0011]进一步改进在于，所述表达载体为pET
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28a载体。
[0012]本专利技术还提供一种蛋白表达系统，为转入上述重组质粒的大肠杆菌BL21菌株。
[0013]本专利技术还提供一种上述增强型StayGold黄色荧光蛋白的制备方法，构建pET28a
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6His
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Strep II
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TEV
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GG
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YStayGold(K192Y)重组质粒并转化BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞中表达所述重组质粒，再使用亲和层析His FF富集纯化获得所述黄色荧光蛋白。
[0014]本专利技术还提供一种上述增强型StayGold黄色荧光蛋白在检测蛋白的标记、表达定位中的应用。
[0015]本专利技术的有益效果在于：本专利技术根据现有的研究结果，扩展了StayGold蛋白的应用，在绿色荧光蛋白的基础上开发了一种新的黄色YStayGold蛋白。该黄色荧光蛋白有很强的热稳定性，Tm约为95℃，比市场上常用的YGFP的Tm值高出15℃，且荧光强度也高8倍。YStayGold黄色荧光蛋白比市场上常用的YFP黄色荧光蛋白具有更广阔的应用市场。
附图说明
[0016]图1为YStayGold小量表达检测图；
[0017]图2为YStayGold与StayGold、YFP颜色对比图；
[0018]图3为YStayGold镍柱纯化图；
[0019]图4为YFP镍柱纯化图；
[0020]图5为YStayGold与StayGold、YFP激发波长和发射波长测定图；
[0021]图6为YStayGold与YFP黄色荧光蛋白Tm值检测图；
[0022]图7为YStayGold与YFP黄色荧光蛋白荧光强度检测图。
具体实施方式
[0023]下面结合附图对本申请作进一步详细描述，有必要在此指出的是，以下具体实施方式只用于对本申请进行进一步的说明，不能理解为对本申请保护范围的限制，该领域的技术人员可以根据上述申请内容对本申请作出一些非本质的改进和调整。
[0024]1、材料
[0025]本实施例所用方法如无特别说明均为本领域的技术人员所知晓的常规方法，所用的试剂等材料，如无特别说明，均为市售购买产品。
[0026]2、方法
[0027]2.1YStayGold蛋白质粒构建及表达
[0028]2.1.1YStayGold质粒构建
[0029]本专利技术用基因合成技术获得StayGold的基因，其基因是合成在pET28a载体上，获得pET28a
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6His
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Strep II
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TEV
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GG
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StayGold质粒。YStayGold的质粒是以StayGold的基因为模板，设计K192Y突变氨基酸引物：
[0030]正向引物：ATCACTGGATTCGTTATCAATACACACAAA；
[0031]反向引物：TTTGTGTGTATTGATAACGAATCCAGTGAT；
[0032]按照常规定点突变PCR的方法，获得pET28a
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6His
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Strep II
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TEV
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GG
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YStayGold(K192Y)重组质粒。所有重组质粒均测序正确。YStayGold的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码YStayGold蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0033]2.1.2YStayGold小量表达
[0034]将构建成功且测序正确的pET28a
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6His
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Strep II
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TEV
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GG
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YStayGold(K本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种增强型StayGold黄色荧光蛋白，其特征在于，该增强型StayGold黄色荧光蛋白序列为野生型StayGold蛋白的突变序列，且所述突变序列中的突变为K192Y，即野生型StayGold蛋白的第192位氨基酸残基由赖氨酸突变成酪氨酸。2.根据权利要求1所述的增强型StayGold黄色荧光蛋白，其特征在于，所述增强型StayGold黄色荧光蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。3.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码如权利要求1
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2任一所述的增强型StayGold黄色荧光蛋白。4.根据权利要求3所述的一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的序列如SEQ ID NO.2所示。5.一种重组质粒，其特征在于，所述重组质粒为含有如权利要求3
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4任一所述的多核苷酸且能够翻译表达出如权利要求1
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2任一所述增强型StayGol...

【专利技术属性】
技术研发人员：王峰，杨益虎，陈倩，桂文君，吕志佳，
申请(专利权)人：佰翱得无锡新药开发有限公司，
类型：发明
国别省市：