鞣酸纯度鉴定方法技术

本发明专利技术公开了一种鞣酸纯度鉴定方法。所述鞣酸纯度鉴定方法包括如下步骤：(1)制备标准品溶液和待测样品溶液；所述标准品溶液包括鞣酸标准品、络合剂和溶剂；所述待测样品溶液包括鞣酸样品、络合剂和溶剂；所述络合剂包括蛋白或多肽；所述标准品溶液和所述待测样品溶液中所述络合剂的浓度均为1～10mg/mL；(2)对所述标准品溶液和所述待测样品溶液进行紫外检测，建立标准曲线，计算纯度。所述方法提高了鞣酸纯度鉴定的准确度，可适用于不同的鞣酸应用环境，成本低廉、可操作性高。可操作性高。可操作性高。

【技术实现步骤摘要】
鞣酸纯度鉴定方法


[0001]本专利技术涉及一种鞣酸纯度鉴定方法。

技术介绍

[0002]鞣酸，又称单宁酸，是从植物五倍子中提取的一种多酚类化合物。其含有的大量的酚羟基，可以与蛋白、多肽发生络合形成悬浮液或沉淀。因此在医药领域有广泛应用，如鞣酸软膏、鞣酸蛋白等鞣酸药物，以及鞣酸小檗碱、鞣酸加压素等缓释药物。鞣酸含有的大量酚羟基，因此易氧化形成黑色的醌，致使纯度下降直接影响其与蛋白的结合能力，进而影响药品质量。在生产实践中，鞣酸往往也会因为储存不当、时间过长等原因，发生氧化、受潮等变质问题影响纯度，最终降低产品质量。
[0003]鞣酸纯度的检验较为困难。通常情况下，可直接观察其颜色、性状，但此方法只能简单的判断鞣酸的好坏，难以指定明量化的标准，作用有限。还可采取液相色谱法，但鞣酸摩尔吸光系数过高，同时其含有的酚羟基会与色谱柱发生紧密的结合，从而污染、堵塞、损坏色谱柱，造成极高的成本。紫外标准曲线法可通过鞣酸最大吸收波长(213nm，276nm)进行分析，但鞣酸分子所具有的25个酚羟基易发生氧化，部分氧化后摩尔吸光系数变化极小，紫外法难以区分，故分析结果会偏高而不准确，即鞣酸氧化所导致的纯度降低，无法以紫外检测得知。因此需要一种精确的、易操作、低成本的方法来检测鞣酸纯度。

技术实现思路

[0004]为解决现有技术中紫外标准曲线法以最大吸收波长进行分析时，因难以检测鞣酸多个酚羟基的氧化状态导致分析结果不准确的问题，本专利技术提供一种鞣酸纯度鉴定方法。所述方法通过不同蛋白或多肽与鞣酸的络合，在特定紫外波长下检测稳定的鞣酸络合物，提高了鞣酸纯度鉴定的准确度，可适用于不同的鞣酸应用环境，成本低廉、可操作性高。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
[0006]本专利技术提供一种鞣酸纯度鉴定方法，其包括以下步骤：
[0007]S1、制备标准品溶液和待测样品溶液；
[0008]所述标准品溶液包括鞣酸标准品、络合剂和溶剂；
[0009]所述待测样品溶液包括鞣酸样品、络合剂和溶剂；
[0010]所述络合剂包括蛋白或多肽；
[0011]所述标准品溶液和所述待测样品溶液中所述络合剂的浓度均可为1～10mg/mL；
[0012]S2、对所述标准品溶液和所述待测样品溶液进行紫外检测，建立标准曲线，计算纯度。
[0013]本专利技术中，所述蛋白或多肽可为本领域常规定义，可与鞣酸形成络合物即可。通常，10～50个氨基酸组成的肽称为多肽；由50个以上的氨基酸组成的肽称为蛋白。
[0014]步骤S1中，所述蛋白或多肽的分子量可为0.5～100KDa。
[0015]步骤S1中，所述蛋白优选为胰蛋白酶、糜蛋白酶、凝血酶、透明质酸酶、促皮质素或
牛血清蛋白；所述多肽优选为缩宫素、加压素或胰岛素。
[0016]在一些优选实施方案中，所述络合剂选自糜蛋白酶(Chymotrypsin，25KDa)、胰蛋白酶(Trypsin，23KDa)或缩宫素(Oxytocin，1007.2Da)。
[0017]步骤S1中，所述标准品溶液中所述鞣酸标准品和所述络合剂的质量比可为(0～0.3448):1。
[0018]步骤S1中，所述待测样品溶液中所述鞣酸样品和所述络合剂的质量比可为(0～0.3448):1。
[0019]步骤S1中，所述溶剂可为水，较佳地为纯化水或去离子水。
[0020]步骤S1中，所述标准品溶液的制备包括：鞣酸标准品溶液的制备和络合剂溶液的制备，将所述鞣酸标准品溶液和所述络合剂溶液混合。
[0021]其中，所述鞣酸标准品溶液的制备可包括：将鞣酸标准品溶解在纯化水中。
[0022]其中，所述鞣酸标准品溶液的系列浓度较佳地为0.1、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9和10mg/mL。
[0023]其中，所述络合剂溶液的制备可包括：将所述络合剂溶解在磷酸缓冲液中。所述磷酸缓冲液的浓度较佳地为0.01～0.2M，例如0.1M。所述磷酸缓冲液的pH较佳地为7.0。
[0024]其中，所述混合的操作较佳地为将鞣酸标准品溶液加入到所述络合剂溶液。
[0025]其中，所述鞣酸标准品溶液和所述络合剂溶液的体积比较佳地为1:29。
[0026]其中，所述混合的步骤较佳地采用摇床进行。所述摇床的转速可为150rad/min。所述摇床的温度可为20～30℃，较佳地为25℃。所述混合的时间可为0.5～2h。
[0027]步骤S1中，所述待测样品溶液的制备包括：鞣酸样品溶液的制备和络合剂溶液的制备，将所述鞣酸样品溶液和所述络合剂溶液混合。
[0028]其中，所述鞣酸样品溶液的制备可包括：将鞣酸样品溶解在纯化水中。
[0029]其中，所述鞣酸样品溶液的系列浓度较佳地为0.1～10mg/mL。
[0030]其中，所述络合剂溶液的制备可包括：将所述络合剂溶解在磷酸缓冲液中。所述磷酸缓冲液的浓度较佳地为0.01～0.2M，例如0.1M。所述磷酸缓冲液的pH较佳地为7.0。
[0031]其中，所述混合的操作较佳地为将鞣酸样品溶液加入到所述络合剂溶液。
[0032]其中，所述鞣酸样品溶液和所述络合剂溶液的体积比较佳地为1:29。
[0033]其中，所述混合的步骤较佳地采用摇床进行。所述摇床的转速可为150rad/min。所述摇床的温度可为20～30℃，较佳地为25℃。所述混合的时间可为0.5～2h。
[0034]步骤S2中，所述紫外检测的波长可为680nm。
[0035]步骤S2中，所述紫外检测的温度可为20～25℃。
[0036]步骤S2中，所述紫外检测可采用本领域常规的紫外分光光度计进行。所述紫外分光光度计的型号例如为MAPADA UV
‑
3100。
[0037]步骤S2中，所述标准曲线可按照本领域常规的方法建立，一般包括：以所述鞣酸标准品溶液的鞣酸浓度为横坐标，以所述紫外检测获得的所述标准品溶液的吸光度为纵坐标，制作吸光度
‑
鞣酸浓度曲线，采用线性方程拟合，获取所述标准曲线。其中，所述线性方程拟合可采用origin数据处理软件进行。
[0038]步骤S2中，所述纯度的计算可为本领域常规，一般包括：将所述紫外检测获得的所述待测样品溶液的吸光度，带入所述标准曲线，获得所述鞣酸样品溶液的鞣酸测定浓度，所
述鞣酸样品溶液的鞣酸测定浓度与所述鞣酸样品溶液的鞣酸浓度的比值即为所述鞣酸样品的纯度。
[0039]在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本专利技术各较佳实例。
[0040]本专利技术所用试剂和原料均市售可得。
[0041]本专利技术的积极进步效果在于：
[0042]本专利技术提出一种鞣酸纯度鉴定方法，通过检测鞣酸与不同蛋白或多肽络合形成混悬液的吸光度制作标准曲线，进而获得鞣酸纯度。所述混悬液较为稳定，提高了鞣酸纯度鉴定的准确度，适用于不同鞣酸应本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鞣酸纯度鉴定方法，其特征在于，所述鞣酸纯度鉴定方法包括如下步骤：(1)制备标准品溶液和待测样品溶液；所述标准品溶液包括鞣酸标准品、络合剂和溶剂；所述待测样品溶液包括鞣酸样品、络合剂和溶剂；所述络合剂包括蛋白或多肽；所述标准品溶液和所述待测样品溶液中所述络合剂的浓度均为1～10mg/mL；(2)对所述标准品溶液和所述待测样品溶液进行紫外检测，建立标准曲线，计算纯度。2.如权利要求1所述的鞣酸纯度鉴定方法，其特征在于，步骤(1)中，所述蛋白或多肽的分子量为0.5～100KDa；和/或，步骤(1)中，所述蛋白为胰蛋白酶、糜蛋白酶、凝血酶、透明质酸酶、促皮质素或牛血清蛋白；优选为胰蛋白酶或糜蛋白酶；和/或，步骤(1)中，所述多肽为缩宫素、加压素或胰岛素；优选为缩宫素。3.如权利要求1所述的鞣酸纯度鉴定方法，其特征在于，步骤(1)中，所述标准品溶液中所述鞣酸标准品和所述络合剂的质量比为(0～0.3448):1；和/或，步骤(1)中，所述待测样品溶液中所述鞣酸样品和所述络合剂的质量比为(0～0.3448):1；和/或，步骤(1)中，所述溶剂为水，优选为纯化水或去离子水。4.如权利要求1所述的鞣酸纯度鉴定方法，其特征在于，步骤(1)中，所述标准品溶液的制备包括：鞣酸标准品溶液的制备和络合剂溶液的制备，将所述鞣酸标准品溶液和所述络合剂溶液混合；其中，较佳地，所述鞣酸标准品溶液的制备包括：将鞣酸标准品溶解在纯化水中；较佳地，所述鞣酸标准品溶液的系列浓度为0.1、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9和10mg/mL；较佳地，所述络合剂溶液的制备包括：将所述络合剂溶解在磷酸缓冲液中；其中，所述磷酸缓冲液的浓度较佳地为0.01～0.2M，更佳地为0.1M；所述磷酸缓冲液的pH较佳地为7.0。5.如权利要求4所述的鞣酸纯度鉴定方法，其特征在于，所述混合的操作为将所述鞣酸标准品溶液加入所述络合剂溶液；其中，较佳地，所述鞣酸标准品溶液和所述络合剂溶液的体积比为1:29；较佳地，所述混合的步骤采用摇床进行；其中，所述摇床的转速较佳地为150rad/min；所述摇...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱俊，汪晨曦，胡懿俊，刘芬，覃艳虹，陈蓓，
申请(专利权)人：上海上药第一生化药业有限公司，
类型：发明
国别省市：