一种可组装超大片段的高效多基因组装载体系统、其构建方法及多基因组装方法技术方案

本发明专利技术公开了一种可组装超大片段的高效多基因组装载体系统，包括供给载体I、供给载体II和接受载体；供给载体I包含顺序串联I

【技术实现步骤摘要】
一种可组装超大片段的高效多基因组装载体系统、其构建方法及多基因组装方法


[0001]本专利技术涉及生物制药
，具体涉及一种可组装超大片段的高效多基因组装载体系统、其构建方法及组装方法。

技术介绍

[0002]合成生物学是一门新兴、交叉、汇聚、颠覆性学科。它在系统生物学基础上，融合工程科学原理，采用自下而上的策略，重编改造天然的或设计合成新的生物体系，以揭示生命规律和构筑新一代生物工程体系，被喻为认识生命的钥匙(建物致知)、改变未来的颠覆性技术(建物致用)。DNA是“生物体储存和传递遗传信息的载体”，如果需要对生物体进行特定的设计、改造和合成，则需要掌握DNA的合成和组装。因此DNA合成和组装是合成生物学中的关键技术。目前最先进的DNA合成技术也只能合成15kb以下的DNA片段，更长片段的DNA合成需进一步通过DNA组装实现。目前比较成熟的是基于酿酒酵母高效同源重组系统的体内DNA组装法，即首先构建单基因的表达单元(含有启动子、ORF、终止子)，并利用PCR将相邻单元之间的同源重组序列预先添加进去，然后将多个表达单元的质粒转化进去酿酒酵母，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可组装超大片段的高效多基因组装载体系统，其特征在于：包括供给载体I、供给载体II和接受载体；所述供给载体I包含顺序串联的I
‑
SceI/Reco1/MCS/Reco3
’
/p1/Reco4
’
/Reco2/I
‑
SceI
‑
R核心元件DNA序列；所述供给载体II包含顺序串联的I
‑
SceI/Reco3/MCS/Reco1
’
/p2/Reco2
’
/Reco4/I
‑
SceI
‑
R核心元件DNA序列；所述接受载体包含顺序串联的LB/p4/Reco1
’
/p2/ccdB/Reco2
’
/RB/p3核心元件DNA序列；其中，I
‑
SceI为归位内切酶I
‑
SceI位点，MCS为多克隆位点，I
‑
SceI
‑
R为I
‑
SceI的反向互补序列，LB为T
‑
DNA左边界序列，RB为T
‑
DNA右边界序列，ccdB为致死基因序列，p1、p2、p3为细菌抗生素选择标记基因，p4为植物抗生素选择标记基因表达盒；Reco1、Reco2、Reco3、Reco4为BP Clonase重组酶或者LR Clonase重组酶识别的特异重组位点；Reco1或者Reco2或者Reco3或者Reco4选自attL1、attL2、attL3、attL4、attR1、attR2、attR3、attR4、attB1、attB2、attB3、attB4、attP1、attP2、attP3、attP4中的任一种，并且Reco1、Reco2、Reco3、Reco4属于同一种酶系对应的att位点，所述酶系包括BP Clonase重组酶和LR Clonase重组酶；Reco1、Reco2、Reco3、Reco4互不相同但均属于attL位点或者attR位点或者attB位点或者attP位点；Reco1
’
为与Reco1发生不可逆重组的对应位点，Reco2
’
为与Reco2发生不可逆重组的对应位点，Reco3
’
为与Reco3发生不可逆重组的对应位点，Reco4
’
为与Reco4发生不可逆重组的对应位点。2.根据权利要求1所述的多基因组装载体系统，其特征在于：所述Reco1、Reco2、Reco3、Reco4分别为attL1、attL2、attL3、attL4，所述Reco1
’
、Reco2
’
、Reco3
’
、Reco4
’
分别为attR1、attR2、attR3、attR4；attL1的序列为：5
’‑
CAAATAATGATTTTATTTTGACTGATAGTGACCTGTTCGTTGCAACAAATTGATGAGCAATGCTTTTTTATAATGCCAACTTTGTACAAAAAAGCAGGCT
‑3’
，attL2的序列为：5
’‑
ACCCAGCTTTCTTGTACAAAGTTGGCATTATAAAAAATAATTGCTCATCAATTTGTTGCAACGAACAGGTCACTATCAGTCAAAATAAAATCATTATTTG
‑3’
，attL3的序列为：5
’‑
AAATAATGATTTTATTTTGACTGATAGTGACCTGTTCGTTGCAACAAATTGATAAGCAATGCTTTTTTATAATGCCAACTTTGTATAATAAAGTTG
‑3’
，attL4的序列为：5
’‑
CAACTTTTCTATACAAAGTTGGCATTATAAAAAAGCATTGCTTATCAATTTGTTGCAACGAACAGGTCACTATCAGTCAAAATAAAATCATTATTT
‑3’
，attR1的序列为：5
’‑
ACAAGTTTGTACAAAAAAGCTGAACGAGAAACGTAAAATGATATAAATATCAATATATTAAATTAGATTTTGCATAAAAAACAGACTACATAATACTGTAAAACACAACATATCCAGTCATATTG
‑3’
，attR2的序列为：5
’‑
CATAGTGACTGGATATGTTGTGTTTTACAGCATTATGTAGTCTGTTTTTTATGCAAAATCTAATTTAAT
ATATTGATATTTATATCATTTTACGTTTCTCGTTCAGCTTTCTTGTACAAAGTGGT
‑3’
，attR3的序列为：5
’‑
CAACTATGTATAATAAAGTTGAACGAGAAACGTAAAATGATATAAATATCAATATATTAAATTAGATTTTGCATAAAAAACAGACTACATAATACTGTAAAACACAACATATCCAGTCACTATGG
‑3’
，attR4的序列为：5
’‑
CCATAGTGACTGGATATGTTGTGTTTTACAGTATTATGTAGTCTGTTTTTTATGCAAAATCTAATTTAATATATTGATATTTATATCATTTTACGTTTCTCGTTCAACTTTTCTATACAAAGTTG
‑3’
。3.根据权利要求1或2所述的多基因组装载体系统，其特征在于：所述p1、p2、p3分别为细菌氨苄霉素筛选标记基因或者细菌氯霉素筛选标记基因或者细菌卡那霉素筛选标记基因，且p1、p2、p3互不相同；p4为植物卡那霉素筛选标记基因表达盒或者植物潮霉素筛选标记基因表达盒；所述MCS序列包含顺序串联的限制性内切酶位点Rest1/Rest2，Rest1、Rest2为任意的不同限制性内切酶位点。4.根据权利要求3所述的多基因组装载体系统，其特征在于：所述Rest1、Rest2为AsiSI或AscI；所述p1为细菌氨苄霉素筛选标记基因，p2为细菌氯霉素筛选标记基因，p3为细菌卡那霉素筛选标记基因；p4为植物卡那霉素筛选标记基因表达盒，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：任茂智，李林宣，翟耀华，
申请(专利权)人：成都天府星际农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：