建兰花叶病毒外壳蛋白基因的表达及其抗体制备方法技术

本发明专利技术公开了一种建兰花叶病毒（Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ？ｍｏｓａｉｃ？ｖｉｒｕｓ，ＣｙｍＭＶ）外壳蛋白基因的表达及其抗体制备方法。利用原核表达系统表达建兰花叶病毒的外壳蛋白，用原核表达的建兰花叶病毒外壳蛋白免疫兔子、ＢＡＬＢ／Ｃ鼠制备其多抗血清，利用杂交瘤技术制备其单克隆抗体，并用制备的抗体建立了检测ＣｙｍＭＶ高度特异性、灵敏性和正确性的的免疫捕获ＲＴ－ＰＣＲ及ＥＬＩＳＡ方法。为该病毒病的诊断、抗病育种和脱毒苗的培育提供技术支持。本发明专利技术提供的建兰花叶病毒外壳蛋白基因的表达及其抗体制备方法为建兰花叶病毒的快速检测诊断、分型和分子生物学研究提供物质基础和技术支撑，为该兰花病毒病的防治打下基础。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种建兰花叶病毒外壳蛋白基因的表达方法，其特征在于包括如下步骤：　　１）根据ＧｅｎＢａｎｋ中的编码ＣｙｍＭＶ外壳蛋白基因的全长序列设计引物，上游引物ＣＰ－Ｆ为５′－ＣＧＧＧＡＴＣＣＡＴＧＧＧＡＧＡＧＣＣＣＡＣＴＣＣＡ－３′，下游引物ＣＰ－Ｒ为５′－ＣＧＧＴＣＧＡＣＴＴＡＴＴＣＡＧＴＡＧＧＧＧＧＴＧＣＡＧ－３′，上游引物下划线处为ＢａｍＨＩ酶切位点，下游引物下划线处为ＳａｌＩ酶切位点；　　２）利用Ｔｒｉｚｏｌ试剂提取建兰花叶病毒兰花病叶的总ＲＮＡ；　　３）ＲＴ－ＰＣＲ方法克隆ＣｙｍＭＶ外壳蛋白基因：用下游引物按照ＲｅｖｅｒｔＡｉｄＴＭ逆转录试剂盒合成ＣｙｍＭＶ外壳蛋白基因第一链ｃＤＮＡ，利用上述...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴建祥，洪健，孟春梅，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]