海洋球石藻病毒外壳重组蛋白原核表达的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种海洋球石藻病毒外壳重组蛋白原核表达的制备方法，步骤为：ａ）海洋球石藻病毒的纯化与浓缩；ｂ）设计引物；ｃ）提取ＤＮＡ；ｄ）ＰＣＲ扩增海洋球石藻病毒ＥｈＶ外壳蛋白基因；ｅ）ＰＣＲ电泳回收产物转化大肠杆菌感受态细胞，挑取克隆，提取质粒进行酶切后电泳分析ＰＣＲ产物并进行测序鉴定；ｆ）通过双酶切得到目的基因片断，连接质粒，转化大肠杆菌感受态细胞，筛选得到重组载体；ｇ）目的基因的小量表达；ｈ）大量表达；ｉ）ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定蛋白表达量。本发明专利技术获得了大量纯化的重组病毒外壳蛋白，下一步可用于免疫生产抗体，为建立快速、准确检测球石藻病毒感染导致的宿主细胞裂解率的免疫荧光检测技术提供了物质基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种海洋球石藻(Emiliania huxleyi)病毒外壳重组蛋白原核表达的 制备方法。
技术介绍
目前就藻类病毒在全球气候变化、生物地化循环和有害赤潮生消过程中的生态学 作用和意义受到极大关注。在自然海域中，病毒感染是导致浮游植物裂解和自然死亡的主 要因素之一。高达0. 3% /d的浮游植物死亡率情况不仅出现在藻类赤潮暴发后的消亡阶 段。由于缺乏用于病毒诱导的宿主死亡率测定的可靠方法，有关自然海域中病毒对微藻裂 解率的报道很少，尤其是对由于病毒裂解导致的浮游植物原位损失率知之甚少。目前用于估计病毒介导的浮游植物死亡率的方法主要有①用透射电镜观察被感 染的细胞，以被感染细胞出现的频率为基础评估病毒介导的死亡率；②是通过病毒总量和 每个细胞释放的病毒粒子数来计算细胞的裂解率，使用这种方法估计微藻死亡率的前提是 假设病毒粒子的释放量是已知的，而且可以将我们感兴趣的病毒与样品中其它病毒区分开 来；③通过病毒产量估计病毒诱导的宿主死亡率。采用稀释技术推算病毒的产量，但稀释前 的浓缩步骤比较复杂，很难在不影响藻类细胞生理状态的情况下浓缩出相对易碎的藻类细 胞，因此这种技术迟迟本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘静雯，郑天凌，张雅兰，董双林，
申请(专利权)人：集美大学，
类型：发明
国别省市：92