本发明专利技术涉及一种液相色谱法测定食品中甲醛含量的测定方法，尤其涉及进出口水产、蔬菜（包括香菇）、谷类制品、乳制品、啤酒等中甲醛的测定方法。液相色谱法测定食品中甲醛含量的测定方法，该测定方法由（１）提取、（２）净化、（３）甲醛标准工作溶液的制备、（４）测定、（５）空白试验、（６）结果计算和表述步骤构成。本发明专利技术采用２，４－二硝基苯肼的乙腈／ｐＨ５醋酸缓冲液（１／１，ｖ／ｖ）溶液，直接衍生提取试样中甲醛，液相色谱测定。６０℃水浴提取试样中甲醛的同时，进行衍生化反应。２，４－二硝基苯肼与蛋白质中基团竞争反应溶液中的甲醛，能有效抑制甲醛与试样中蛋白质结合，从而比水浸法有较高的甲醛回收率。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种液相色谱法测定食品中甲醛的测定方法，尤其涉及进出口水产、蔬菜(包括香菇)、谷类制品、乳制品、啤酒等中甲醛的测定方法。
技术介绍
甲醛俗称福尔马林，是无色、具有强烈气味的刺激性气体，其35％～40％的水溶液通称福尔马林。甲醛是原浆毒物，能与蛋白质结合，吸入高浓度甲醛后，会出现呼吸道的严重刺激和水肿、眼刺痛、头痛，也可发生支气管哮喘。皮肤直接接触甲醛，可引起皮炎、色斑、坏死。经常吸入少量甲醛，能引起慢性中毒，出现粘膜充血、皮肤刺激症、过敏性皮炎、指甲角化和脆弱、甲床指端疼痛，孕妇长期吸入可能导致新生婴儿畸形，甚至死亡，男子长期吸入可导致男子精子畸形、死亡，性功能下降，严重的可导致生殖能力缺失，全身症状有头痛、乏力、胃纳差、心悸、失眠、体重减轻以及植物神经紊乱等。 2001年日本炮制香菇中“甲醛事件”日本及境外媒体大量宣传我国出口香菇含致癌甲醛，对香菇进行”进口限量“和”反倾销调查“。我国香菇全部停止出口，造成巨大经济损失。近年来鱿鱼等制品中的“甲醛超标问题”，严重影响了鱿鱼加工产业的发展和鱿鱼制品出口。浙江舟山市作为主要出口基地，受损严重。2007年菲律宾检测大白兔奶糖等4种糖果含有甲醛，菲律宾及海外市场相关产品遭遇撤架，食品安全性再次受到全球性质疑。 由于甲醛具有较高的反应活性，可以和带有-OH(羟基)、-SH(巯基)、-NH2(氨基)基团的分子发生亲核加成反应，动物体的细胞内、酶系统中存在着大量的上述基团，接触甲醛后会立即发生反应，产生细胞毒性，使蛋白质变性。甲醛超强的杀菌能力正是原自这种反应。试样中富含蛋白质时，添加的甲醛易与蛋白质中基团结合，形成甲醛-蛋白质复合物。因此，对食品中内源性甲醛产生机理进行研究，提出一种灵敏度高、操作简便的甲醛测定方法将为我国食品出口突破国际“绿色壁垒”做出贡献。 现有技术中食品中甲醛测定方法如下 1、AOAC 931.08(第17版)蒸馏法，铬变酸定性。 2、SCT 3025-2006水产品中甲醛的测定水蒸气蒸馏法，分光光度法、HPLC法测定。 3、NYT 1283-2007香菇中甲醛含量的测定水蒸气蒸馏法，比色法测定。 4、DB33T 555-2005植物源食品中甲醛残留量的测定高效液相色谱法60℃水浴提取，香菇中甲醛用乙酸锌溶液提取，HPLC法测定。 5、GBT 5009.49-2003发酵酒卫生标准的分析方法水蒸气蒸馏法，比色法测定。 6、SNT 1547-2005进出口食品中甲醛含量测定液相色谱法40℃水浴提取，HPLC法测定。 对于水蒸气蒸馏法利用甲醛易挥发，在酸性条件下，可蒸馏分离得到试样中游离态和可逆结合态的甲醛。但高温可能导致内源性甲醛的产生，而且水蒸气蒸馏法对实验装置的气密性要求高，操作复杂，不利于大批量试样的检测。 对于SN/T 1547-2005采用水浸法提取甲醛用水充分提取试样中甲醛，再将提取液与2，4-二硝基苯肼衍生反应，直接液相色谱测定。水浸法能有效提取试样中游离态的甲醛，但试样(如水产、乳制品等)富含蛋白质时，添加的甲醛易与蛋白质中基团结合，形成甲醛-蛋白质复合物，使得水浸法测定富含蛋白质试样中甲醛的回收率不佳。SN/T 1547-2005采用了甲醛的校正工作溶液，在甲醛含量低的基质中添加不同浓度水平的甲醛，按试样提取操作后液相色谱测定，使得甲醛回收率提高。但是实际操作中，空白基质的选择、甲醛校正工作曲线的制作、不同实验室间结果的比对等，都存在一定的难度。
技术实现思路
为了解决上述的甲醛含量的测定方法中存在的技术缺陷，本专利技术的目的是提供一种，该方法直接提取衍生样品中甲醛，将甲醛校正工作溶液改为甲醛标准工作溶液，提高了富含蛋白质试样中甲醛的回收率，测定低限改为“液体类试样中 甲醛的测定低限为2.0mg/L，固体类试样中甲醛的测定低限为5.0mg/kg”。 为了实现上述的目的，本专利技术的由以下的步骤构成 (1)提取 ①固体类试样称取试样2g，精确至0.01g，置于50mL具塞塑料离心管中，准确加入20.0mL衍生液；旋紧塞子，混匀后置于60℃恒温振荡器中，150r/min振摇，间隔20min取出混匀，振摇1h后取出冷却；上述的衍生液为2，4-二硝基苯肼乙腈溶液与pH 5的缓冲溶液构成的混合溶液，2，4-二硝基苯肼乙腈溶液的浓度为0.6g/L，衍生液中乙腈∶缓冲溶液的体积比为1∶1；； ②液体类试样移取试样1mL，精确至0.1mL，置于10mL具塞比色管中，加入4.0mLpH 5的缓冲溶液，用2，4-二硝基苯肼乙腈溶液定容至10mL，盖上塞后混匀，60℃水浴加热1h，取出冷却；上述的2，4-二硝基苯肼乙腈溶液的浓度为0.6g/L； (2)净化 ①固体类试样将上述制得的固体类试样提取液，以不低于4000r/min离心5min；对于离心后溶液澄清，过微孔滤膜后，直接供HPLC测定；对于离心后溶液浑浊，在提取液中加入8g硫酸铵，混匀，以不低于4000r/min离心5min，移取上清液，下层溶液用10mL乙腈重复萃取1次，合并萃取液，用乙腈定容至20mL，混匀后过微孔滤膜，滤液供HPLC测定； ②液体类试样提取液的净化方法与固体类试样相同，所用试剂量减半； (3)甲醛标准工作溶液的制备 分别取5档或以上不同浓度的甲醛标准工作溶液，甲醛标准工作溶液的制备方法如下移取试样1mL，精确至0.1mL，置于10mL具塞比色管中，加入4.0mLpH 5的缓冲溶液，用2，4-二硝基苯肼乙腈溶液定容至10mL，盖上塞后混匀，60℃水浴加热1h，取出冷却；冷却后过微孔滤膜，滤液供HPLC测定；上述的2，4-二硝基苯肼乙腈溶液的浓度为0.6g/L； (4)测定 根据样液中甲醛浓度的情况选定峰面积相近的标准工作溶液系列，标准工作溶液和样液中甲醛衍生物的响应值均应在仪器检测的线性范围内，标准工作溶液和样液等体积参插进样测定，用保留时间定性，外标法定量； (5)空白试验 除不加试样外，均按上述(1)～(4)操作步骤进行； (6)结果计算和表述 按以下公式计算试样中甲醛的残留量或采用色谱数据处理系统计算，计算结果需扣除空白值 式中 X——试样中甲醛的残留量，单位为mg/kg； A——样液中甲醛衍生物的峰面积； c——标准溶液中甲醛衍生物的浓度，单位为mg/L； V——样液最终定容体积，单位为mL； As——标准溶液中甲醛衍生物的峰面积； m——试样溶液所代表的试样质量，单位为g。 作为进一步改进的方案，上述的液相色谱条件为 a)色谱柱C18柱，250mm×4.6mm(内径)，5μm，或相当者； b)流动相甲醇-水(70+30，V+V)， c)流速1.0mL/min； d)检测波长365nm； e)进样量20μL。 作为进一步改进的方案，对于步骤(2)固体类试样中脂肪含量较高，用乙腈饱和的正己烷液-液分配除脂净化。 作为进一步改进的方案，上述的pH 5的缓冲溶液采用称取2.64g乙酸钠，以适量水溶解，加入1.0mL冰乙酸，用水定容至500mL制成。 作为优选，上述的试样为银鱼、香菇、面粉、奶粉、奶糖、奶油、乳饮料或啤酒本文档来自技高网...
【技术保护点】
衍生提取法测定食品中甲醛的方法，其特征在于该测定方法由以下的步骤构成：（１）提取①固体类试样：称取试样２ｇ，精确至０．０１ｇ，置于５０ｍＬ具塞塑料离心管中，准确加入２０．０ｍＬ衍生液；旋紧塞子，混匀后置于６０℃恒温振荡器中，１５０ｒ／ｍｉｎ振摇，间隔２０ｍｉｎ取出混匀，振摇１ｈ后取出冷却；上述的衍生液为２，４－二硝基苯肼乙腈溶液与ｐＨ５的缓冲溶液构成的混合溶液，２，４－二硝基苯肼乙腈溶液的浓度为０．６ｇ／Ｌ，衍生液中乙腈∶缓冲溶液的体积比为１∶１；②液体类试样：移取试样１ｍＬ，精确至０．１ｍＬ，置于１０ｍＬ具塞比色管中，加入４．０ｍＬｐＨ５的缓冲溶液，用２，４－二硝基苯肼乙腈溶液定容至１０ｍＬ，盖上塞后混匀，６０℃水浴加热１ｈ，取出冷却；上述的２，４－二硝基苯肼乙腈溶液的浓度为０．６ｇ／Ｌ；（２）净化①固体类试样：将上述制得的固体类试样提取液，以不低于４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ；对于离心后溶液澄清，过微孔滤膜后，直接供ＨＰＬＣ测定；对于离心后溶液浑浊，在提取液中加入８ｇ硫酸铵，混匀，以不低于４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，移取上清液，下层溶液用１０ｍＬ乙腈重复萃取１次，合并萃取液，用乙腈定容至２０ｍＬ，混匀后过微孔滤膜，滤液供ＨＰＬＣ测定；②液体类试样：提取液的净化方法与固体类试样相同，所用试剂量减半；（３）甲醛标准工作溶液的制备分别取５档或以上不同浓度的甲醛标准工作溶液，甲醛标准工作溶液的制备方法如下：移取试样１ｍＬ，精确至０．１ｍＬ，置于１０ｍＬ具塞比色管中，加入４．０ｍＬｐＨ５的缓冲溶液，用２，４－二硝基苯肼乙腈溶液定容至１０ｍＬ，盖上塞后混匀，６０℃水浴加热１ｈ，取出冷却；冷却后过微孔滤膜，滤液供ＨＰＬＣ测定；上述的２，４－二硝基苯肼乙腈溶液的浓度为０．６ｇ／Ｌ；（４）测定根据样液中甲醛浓度的情况选定峰面积相近的标准工作溶液系列，标准工作溶液和样液中甲醛衍生物的响应值均应在仪器检测的线性范围内，标准工作溶液和样液等体积参插进样测定，用保留时间定性，外标法定量；（５）空白试验除不加试样外，均按上述（１）～（４）操作步骤进行；（６）结果计算和表述按以下公式计算试样中甲醛的残留量或采用色谱数据处理系统计算，计算结果需扣除空白值：Ｘ＝Ａ×ｃ×Ｖ／Ａｓ×ｍ式中：Ｘ－－试样中甲醛的残留量，单位为ｍｇ／ｋｇ；Ａ－－样液中甲醛衍生物的峰面积；ｃ－－标准溶液中甲醛衍生物的浓度，单位为ｍｇ／Ｌ；Ｖ－－样液最终定容体积，...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：吕春华，陈笑梅，刘海山，史颖珠，谢文，黄超群，朱晓雨，
申请(专利权)人：浙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]
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