近红外光刺激巨噬细胞分泌外泌体的方法和外泌体技术

本申请公开了一种近红外光刺激巨噬细胞分泌外泌体的方法和外泌体，方法包括：制备硒化铋纳米材料；将硒化铋纳米材料和原料巨噬细胞混合培养，以使硒化铋纳米材料存在于原料巨噬细胞内，以制得活性巨噬细胞；对活性巨噬细胞进行近红外线激光照射，以得到目标巨噬细胞；对目标巨噬细胞进行外泌体提取，以得到外泌体。本申请的方法通过利用巨噬细胞内吞摄入硒化铋纳米材料后，结合近红外激光照射促进巨噬细胞外泌体分泌。硒化铋纳米材料和近红外激光照射对巨噬细胞的损伤小，且巨噬细胞活性强度高，存活细胞较多，并且产量可控。并且产量可控。并且产量可控。

【技术实现步骤摘要】
近红外光刺激巨噬细胞分泌外泌体的方法和外泌体


[0001]本申请属于生物
，具体涉及一种近红外光刺激巨噬细胞分泌外泌体的方法和外泌体。

技术介绍

[0002]外泌体是一种由多种细胞分泌的纳米级尺寸(30
ꢀ‑ꢀ
150 nm)的细胞外囊泡(Extracellular vesicles，EVs)，具有磷脂双分子层结构，包含有多种蛋白质、脂质、DNA、小RNA、免疫调节分子等物质。起初人们认为外泌体是细胞的一种排泄方式，进一步的研究发现外泌体也是细胞间信息交换和物质运输的媒介，携带着宿主细胞的蛋白质、脂质和核酸等物质。经研究发现，外泌体尺寸小、生物相容性好、毒性低、在体内的半衰期长，可作为药物递送的载体，可以解决众多药物溶解性差、半衰期短、药物肿瘤靶向效率低等问题。例如，在肿瘤治疗方面，与游离药物相比，由于外泌体固有的肿瘤归巢能力，外泌体递送的抗癌药物具有更低的毒性、更好的肿瘤靶向性和更高的抗肿瘤活性。
[0003]在应用方面，如果外泌体要大规模应用于药物递送，高效大量地获取外泌体是前提。但现有的外泌体分离提取技术获得外泌体的产量通常较低，但生产成本却相对高昂，不利于外泌体的产业化推广与应用。

技术实现思路

[0004]鉴于此，本申请提供一种近红外光刺激巨噬细胞分泌外泌体的方法和外泌体，旨在提供一种外泌体产量更高且活性更高的方法制备外泌体。
[0005]第一方面，本申请实施例提供了一种近红外光刺激巨噬细胞分泌外泌体的方法，包括：制备硒化铋纳米材料；将硒化铋纳米材料和原料巨噬细胞混合培养，以使硒化铋纳米材料存在于原料巨噬细胞内，以制得活性巨噬细胞；对活性巨噬细胞进行近红外线激光照射，以得到目标巨噬细胞；对目标巨噬细胞进行外泌体提取，以得到外泌体。
[0006]在一些实施例中，硒化铋纳米材料的制备方法，包括：将亚硒酸盐和硝酸铋盐在极性溶剂和带负电荷的表面活性剂的混合物存在的条件下混合，以得到第一混合物；将所述第一混合物在保护气氛中加热至140
‑
200℃并反应，以得到第一反应混合物；将所述第一反应混合物在有机溶剂存在的条件下与反应还原剂混合并反应，以制得所述硒化铋纳米材料。
[0007]在一些实施例中，硒化铋纳米材料的平均粒径为75 nm
‑
85 nm。
[0008]在一些实施例中，原料巨噬细胞通过培养哺乳动物的原代细胞制得。
[0009]在一些实施例中，硒化铋纳米材料和原料巨噬细胞的混合物中，所述硒化铋纳米材料的初始浓度为5 μg/mL
‑
100 μg/mL，所述原料巨噬细胞的加入数量为5000
‑
10000个/孔。
[0010]在一些实施例中，近红外线激光包括808 nm至1064 nm之间的任意一种或几种光线。
[0011]在一些实施例中，对初始浓度为5000个/mL的活性巨噬细胞，进行近红外线激光照射的功率为0.5瓦
‑
3.0瓦，进行近红外线激光照射的时间为5
‑
30 min。
[0012]在一些实施例中，在原料巨噬细胞的生长密度达到孔板面积的80%
‑
90%时，将所述硒化铋纳米材料和原料巨噬细胞混合培养。
[0013]在一些实施例中，将硒化铋纳米材料和原料巨噬细胞温度为30
‑
39℃，含3%
‑
5%二氧化碳气体浓度下，进行混合培养。
[0014]第二方面，本申请实施例提供了一种外泌体，通过第一方面的方法制得。
[0015]与现有技术相比，本申请至少具有以下有益效果：本申请提供的方法，通过利用巨噬细胞内吞摄入硒化铋纳米材料后，结合近红外激光照射促进巨噬细胞外泌体分泌。硒化铋纳米材料和近红外激光照射对巨噬细胞的损伤小，且巨噬细胞活性强度高，存活细胞较多，并且产量可控。在该体系中，巨噬细胞具有主动吞噬外源物质的生物学功能，可以高效地摄入硒化铋纳米材料。此外，硒化铋纳米材料经过实验验证，具有较好的生物相容性与高效的光热转化效率，并且在短时间内可在所分泌的外泌体中进行氧化降解，巨噬细胞可以摄入较高剂量的硒化铋，并且在提取外泌体中可快速降解清除，可控的近红外激光照射促使细胞产生更多的外泌体，从而有效提高巨噬细胞外泌体的分泌数量。
[0016]进一步的，通过控制细胞摄入硒化铋纳米材料的剂量和激光照射时长以及照射功率的大小，可以精确调控对巨噬细胞的刺激强度，使外泌体的分泌量实现可控。
附图说明
[0017]为了更清楚地说明本申请实施例的技术方案，下面将对本申请实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0018]图1示出了本申请实施例提供的硒化铋纳米材料扫描电镜(SEM)图；图2示出了本申请实施例提供的不同浓度的硒化铋纳米悬液在不同时间段的状态；图3示出了本申请实施例提供的硒化铋纳米材料对RAW264.7细胞的毒性结果图；图4示出了本申请实施例提供的巨噬细胞摄入硒化铋材料后的细胞活性状态染色图；图5示出了本申请实施例提供的巨噬细胞摄入硒化铋材料前后的细胞显微图；图6示出了本申请实施例提供的硒化铋受光热后温度变化图；图7示出了本申请实施例提供的808 nm近红外激光照射下不同组别巨噬细胞分泌的外泌体浓度图；图8示出了本申请实施例提供的1064 nm近红外激光照射下不同组别巨噬细胞分
泌的外泌体浓度图；图9示出了本申请实施例提供的巨噬细胞外泌体扫描电镜(SEM)图。
具体实施方式
[0019]为了使本申请的申请目的、技术方案和有益技术效果更加清晰，以下结合实施例对本申请进行进一步详细说明。应当理解的是，本说明书中描述的实施例仅仅是为了解释本申请，并非为了限定本申请。
[0020]为了简便，本申请仅明确地公开了一些数值范围。然而，任意下限可以与任何上限组合形成未明确记载的范围；以及任意下限可以与其它下限组合形成未明确记载的范围，同样任意上限可以与任意其它上限组合形成未明确记载的范围。此外，尽管未明确记载，但是范围端点间的每个点或单个数值都包含在该范围内。因而，每个点或单个数值可以作为自身的下限或上限与任意其它点或单个数值组合或与其它下限或上限组合形成未明确记载的范围。
[0021]在本申请的描述中，需要说明的是，除非另有说明，“以上”、“以下”为包含本数，“一种或多种”中的“多种”的含义是两种及其两种以上。
[0022]本申请的上述申请内容并不意欲描述本申请中的每个公开的实施方式或每种实现方式。如下描述更具体地举例说明示例性实施方式。在整篇申请中的多处，通过一系列实施例提供了指导，这些实施例可以以各种组合形式使用。在各个实例中，列举仅作为代表性组，不应解释为穷举。
[0023]第一方面，本申请实施例提供了一种近红外光刺激巨噬细胞分泌外泌体的方法，包括：制备硒化铋纳米材料；将所述硒化铋纳米材料和原料巨噬细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种近红外光刺激巨噬细胞分泌外泌体的方法，其特征在于，包括：制备硒化铋纳米材料；将所述硒化铋纳米材料和原料巨噬细胞混合培养，以使所述硒化铋纳米材料存在于所述原料巨噬细胞内，以制得活性巨噬细胞；对所述活性巨噬细胞进行近红外线激光照射，以得到目标巨噬细胞；对所述目标巨噬细胞进行外泌体提取，以得到外泌体。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述硒化铋纳米材料的制备方法，包括：将亚硒酸盐和硝酸铋盐在极性溶剂和带负电荷的表面活性剂的混合物存在的条件下混合，以得到第一混合物；将所述第一混合物在保护气氛中加热至140
‑
200℃并反应，以得到第一反应混合物；将所述第一反应混合物在有机溶剂存在的条件下与反应还原剂混合并反应，以制得所述硒化铋纳米材料。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述硒化铋纳米材料的平均粒径为75 nm
‑
85 nm。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述原料巨噬细胞通过培养哺乳动物的原代细胞制得。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述硒化铋纳米材料和原料巨噬细胞的混合物中，所述硒化铋纳...

【专利技术属性】
技术研发人员：李志斌，张晓琦，
申请(专利权)人：深圳市第二人民医院深圳市转化医学研究院，
类型：发明
国别省市：