一种抗体在制备IgA肾病检测试剂中的用途及试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种抗体在制备IgA肾病检测试剂中的用途及试剂盒。本发明专利技术首先对采集自受试者的尿液样品进行离心或者过滤，对尿液中的细胞、细胞碎片和不溶性免疫复合物进行IgA、上皮细胞标志物E

【技术实现步骤摘要】
一种抗体在制备IgA肾病检测试剂中的用途及试剂盒


[0001]本专利技术涉及分子生物和免疫检测领域，尤其涉及一种抗体在制备IgA肾病检测试剂中的用途及试剂盒。

技术介绍

[0002]肾病检测目前的金标准是肾活检病理检测，然而该方法难以重复取样且是一种有创性检测，一般病人进行该项检测时病情已经较严重。目前尚缺少无创而又准确的检测方式以及对疾病进行早期筛查的手段。其中，IgA肾病病理复杂，有多种病因。而引起IgA肾病的则是IgA1蛋白在肾小球沉积，同时这种IgA1蛋白也被证实出现异常，其糖基化相对缺少半乳糖的修饰。以相对缺少半乳糖修饰为基础的检测已有报道并应用于检测，但其准确率不高。近年来，IgA肾病的研究取得了显著进展，这些新近进展包括成功发现了几个遗传易感性位点。迄今为止，发现的大多数IgA肾病易感位点编码的基因都参与了肠上皮屏障的维护和对黏膜病原体的反应，因此肠道上皮已成为潜在治疗干预的新靶点之一。然而，肾脏上皮目前并没有引起医学工作者的足够重视，也没有列入作为病因、治疗和诊断的指标。
[0003]因此，现有技术还有待改进。

技术实现思路

[0004]鉴于上述现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种抗体在制备IgA肾病检测试剂中的用途及试剂盒，旨在结合上皮细胞标志性染色、核染色和免疫复合物染色，找到一种明显的IgA肾病的鉴别与分型依据，解决现有技术中不容易重复取样、有创和过程复杂等问题。
[0005]本专利技术的技术方案如下：
[0006]一种抗体在制备IgA肾病检测试剂中的用途，其中，所述抗体包括抗
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IgA抗体、抗
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E
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cadherin抗体以及细胞核染色剂，所述检测试剂用于免疫荧光染色检测受试者的上皮细胞是否脱核，以及IgA荧光信号与核染色信号是否重合。
[0007]所述的抗体在制备IgA肾病检测试剂中的用途，其中，所述抗
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IgA抗体为抗
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IgA1抗体。
[0008]所述的抗体在制备IgA肾病检测试剂中的用途，其中，所述检测试剂的应用方法包括步骤：
[0009]收集受试者的尿液样本；
[0010]将所述尿液样本离心或者用滤膜过滤，收集沉降物；
[0011]将所述沉降物用缓冲液重悬，得到尿液悬浮液；
[0012]将所述尿液悬浮液固定后进行IgA1抗体、E
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cadherin抗体和细胞核免疫荧光染色，鉴定IgA1抗体、E
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cadherin抗体的阴阳性，并判断荧光信号是否与细胞核重合；
[0013]根据IgA1荧光信号是否与核染色信号重合，以及上皮细胞是否脱核对受试者的IgA肾病进行鉴定和分型。
[0014]所述的抗体在制备IgA肾病检测试剂中的用途，其中，将所述尿液样本在1000
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4000转/分的转速下离心10min
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20min，或者用孔径0.4μm的滤膜过滤，收集沉降物。
[0015]所述的抗体在制备IgA肾病检测试剂中的用途，其中，所述沉降物包含细胞、细胞碎片、附着在细胞或细胞碎片上的免疫复合物中的一种或多种。
[0016]所述的抗体在制备IgA肾病检测试剂中的用途，其中，所述缓冲液包括PBS缓冲液。
[0017]所述的抗体在制备IgA肾病检测试剂中的用途，其中，所述IgA肾病的分型包括上皮细胞脱落型、核染色型和脱核型。
[0018]所述的抗体在制备IgA肾病检测试剂中的用途，其中，所述上皮细胞脱落型的免疫荧光染色结果以及上皮细胞特征为：IgA阳性，E
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cadherin阳性，上皮细胞脱落，IgA信号在上皮细胞的表面或细胞外；所述核染色型的免疫荧光染色结果以及上皮细胞特征为：IgA阳性，E
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cadherin阳性，IgA信号与核染色信号重合；所述脱核型的免疫荧光染色结果以及上皮细胞特征为：IgA阳性，E
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cadherin阳性，上皮细胞脱核。
[0019]一种用于IgA肾病检测的试剂盒，其中，所述试剂盒包括载片试剂、抗
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IgA抗体、抗
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E
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cadherin抗体、细胞核染色剂、荧光标记的二抗，以及多聚甲醛和缓冲液；所述试剂盒用于免疫荧光染色检测受试者的上皮细胞是否脱核，以及IgA荧光信号与核染色信号是否重合。
[0020]所述的试剂盒，其中，所述抗
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IgA抗体为抗
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IgA1抗体。
[0021]有益效果：本专利技术提供了一种抗体在制备IgA肾病检测试剂中的用途及试剂盒。本专利技术首先对采集自受试者的尿液样品进行离心或者过滤，对尿液中的细胞、细胞碎片和不溶性免疫复合物进行IgA、上皮细胞标志物E
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cadherin和细胞核染色，同时根据样品的细胞类型及其形态和免疫复合物的定位的形式进行鉴定分型。最终，根据IgA信号、上皮细胞脱落情况、细胞的形态以及IgA与核染色信号定位情况等检测结果将IgA肾病分为三种类型：上皮细胞脱落型、核染色型和脱核型。这种综合式检测鉴定除了具有高检出率和准确率之外，还将给临床提供一种新的诊治依据。与传统方法相比，本专利技术使得诊断取样更便利和可重复，使得这项检测具有了早期筛查的可能；本专利技术同时使得临床上可以进行连续追踪疾病进展的检测，为后继治疗带来方便；不仅如此，本专利技术提出的新的IgA分型法将成为现有分类的补充和有利于对疾病的准确治疗。
附图说明
[0022]图1为本专利技术实施例提供的所述检测试剂的检测流程示意图。
[0023]图2为本专利技术实施例提供的常见肾病的IgA1免疫荧光染色结果示意图。
[0024]图3为本专利技术实施例提供的IgAN、IgAV和LN的荧光信号和DIC图像比较示意图。
[0025]图4为本专利技术实施例提供的IgAN的三种类型示意图。
[0026]图5为本专利技术实施例提供的上皮细胞标志物E
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Cadherin染色结果示意图。
具体实施方式
[0027]本专利技术提供一种抗体在制备IgA肾病检测试剂中的用途及试剂盒，为使本专利技术的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本专利技术进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0028]本专利技术实施例提供一种抗体在制备IgA肾病检测试剂中的用途，所述抗体包括抗
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IgA抗体、抗
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E
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cadherin抗体以及细胞核染色剂，所述检测试剂用于免疫荧光染色检测受试者的上皮细胞是否脱核，以及IgA荧光信号与核染色信号是否重合。
[0029]在一些实施方式中，所述抗
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IgA抗体为抗
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IgA1抗体。
[0030]在一些实施方式中，所述检测试剂的应用方法包括步骤：...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗体在制备IgA肾病检测试剂中的用途，其特征在于，所述抗体包括抗
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IgA抗体、抗
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E
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cadherin抗体以及细胞核染色剂，所述检测试剂用于免疫荧光染色检测受试者的上皮细胞是否脱核，以及IgA荧光信号与核染色信号是否重合。2.根据权利要求1所述的抗体在制备IgA肾病检测试剂中的用途，其特征在于，所述抗
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IgA抗体为抗
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IgA1抗体。3.根据权利要求2所述的抗体在制备IgA肾病检测试剂中的用途，其特征在于，所述检测试剂的应用方法包括步骤：收集受试者的尿液样本；将所述尿液样本离心或者用滤膜过滤，收集沉降物；将所述沉降物用缓冲液重悬，得到尿液悬浮液；将所述尿液悬浮液固定后进行IgA1抗体、E
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cadherin抗体和细胞核免疫荧光染色，鉴定IgA1抗体、E
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cadherin抗体的阴阳性，并判断荧光信号是否与细胞核重合；根据IgA1荧光信号是否与核染色信号重合，以及上皮细胞是否脱核对受试者的IgA肾病进行鉴定和分型。4.根据权利要求3所述的抗体在制备IgA肾病检测试剂中的用途，其特征在于，将所述尿液样本在1000
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4000转/分的转速下离心10min
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20min，或者用孔径0.4μm的滤膜过滤，收集沉降物。5.根据权利要求3所述的抗体在制备IgA肾病检测试剂中的用途，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏庆宁，祝胜郎，苏文颀，
申请(专利权)人：澳世科技深圳有限公司，
类型：发明
国别省市：