一种快速检测尿液中HP抗体分型的试剂条及包含其的试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及医学检验技术领域，具体涉及一种快速检测尿液中HP抗体分型的试剂条及包含其的试剂盒。该试纸条金标垫上固化有胶体金标记的抗人IgG兔多克隆抗体，层析膜包括从靠近样品垫端至靠近吸水垫端依次平行设置、且相互间隔的T1检测线、T2检测线和质控线，T1检测线包被有重组HP CagA+VacA融合抗原，T2检测线包被有天然HP尿素酶，质控线包被有羊抗兔IgG抗体；重组HP CagA+VacA融合抗原对应的CagA的蛋白质序列如SEQ ID NO:2所示，VacA的蛋白质序列如SEQ ID NO:4所示，该试纸条能同时检测尿液中的尿素酶、CagA和VacA幽门螺杆菌抗体，并且检测结果与UBT检测方法的一致性能达到97％以上。以上。

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测尿液中HP抗体分型的试剂条及包含其的试剂盒


[0001]本专利技术涉及医学检验
，具体涉及一种快速检测尿液中HP抗体分型的试剂条及包含其的试剂盒。

技术介绍

[0002]幽门螺杆菌(Helicobacter Pylori，Hp)是一种定植在人体胃部的革兰氏阴性致病菌。Warren和Marshall等人通过吞服Hp证实该菌可以在胃部持续定植引起胃炎，进一步的大量研证实Hp可以引起一系列胃肠道疾病，包括慢性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤以及胃癌。Hp在人群中平均感染率为50％，但在不同地域之间差异很大。发展中国家感染率超过80％，而发达国家低于40％。目前公认的Hp传播方式主要是儿童时期通过家庭成员之间的密切接触传播。一旦建立感染，在不进行根除治疗的情况下，可终生带菌，无法产生具有中和作用的抗体实现自身清除。
[0003]精准的检测技术是根除幽门螺杆菌的基础，尽管传统检测技术众多，但都在敏感性与特异性等诸多方面存在不足，在这些检测技术指导下的用药方案也导致诸多问题，如国内外研究均表明，近年来幽门螺杆菌的耐药率明显增加，且有产生多重耐药的趋势。因此，开发特异、敏感且便捷检测方式对公共健康安全具有重要意义。幽门螺杆菌的检测技术主要包括尿素呼气试验、快速尿素酶试验、血清学检查、聚合酶链式反应、内镜检查、组织学检查。
[0004]尿素呼气试验检测技术虽然简便、无创，但是设备仪器昂贵，大量医疗机构不具备检测的条件，同时同位素对孕妇和幼儿有害，不利于针对孕妇和儿童的筛查，此外，该方法仅能检测人是否感染了幽门螺杆菌，不能针对幽门螺杆菌进行分型，因此不利于此后确定针对性的诊疗方案。
[0005]快速尿素酶试验检测技术需要在做胃镜时取胃部组织，然后根据试纸颜色变化来确定病人是否感染幽门螺杆菌。此方法因需要通过胃镜取组织，因此需要病人的配合度很高，不利于针对儿童以及配合性差的病人进行筛查，同时快速尿素酶试验可能会因多种因素产生假阳性，因此此方法不能用于病人的疗效评估。
[0006]内镜检查的局限性在于费用昂贵、会产生不适感，且有并发症风险，如腹胀腹痛、呕吐口臭和烧心等，诊断结果对内镜医生经验及能力的依赖性较高，因此内窥镜检测目前基本不作为幽门螺杆菌确诊的手段。
[0007]组织学检查是通过特殊染色技术对胃活检进行分析，通常被认为是直接检测幽门螺杆菌感染的“金标准”。由于幽门螺杆菌在整个胃中的分布和密度不同，为提高组织学检测的准确性，通常从胃窦和胃体两个部位获取标本，标本数量不少于两个且需进行多次活检。组织学检查亦受到胃活检的部位、数量、大小和染色方法，操作人员经验水平、抗生素及质子泵抑制剂等影响。并且此方法通常需要联合快速尿素酶检测或血清学检测来对病人做出诊断。
[0008]聚合酶链式反应(PCR)检测，具有更高的灵敏度和特异性，达95％以上，尤其针对
有出血症状的患者。检测样本包括胃活检组织、血液、唾液、粪便等。PCR检测方法快速、经济且自动化程度高，不受质子抑制剂、铋剂和抗生素等药物的影响，且能对特定位点的耐药基因的突变进行检测，在幽门螺杆菌耐药情况愈发严重的形势下，具有明显优势，但由于死亡菌体DNA片段的存在或与某些细菌存在共同基因，可能造成假阳性，并且需要专门的设备及人员，成本也较高。
[0009]幽门螺杆菌表面存在多种抗原，如CagA、VacA和UreA/B等，抗原刺激机体产生相应抗体，在此基础上可以进行血清学试剂盒检测。血清学检查不受消化道出血、抗生素、质子抑制剂和铋剂等因素的干扰，而且检测迅速、操作方便、特异性高、灵敏度高等特点，此外，血清学检测还能对幽门螺杆菌进行分型，有利于针对性的制定诊疗方案，因此血清、尿液检测经常被用于大规模筛查，同时也在临床上大规模使用。
[0010]幽门螺杆菌进入胃部后产生多种蛋白以便于自身在胃部定植和繁殖，Hp分泌并利用尿素酶(Urease)可以使其抵御胃液高酸性侵蚀，利用其单极多鞭毛及菌体螺旋形结构迅速移动，通过尿素和碳酸氢盐介导的趋化性运动抵达胃黏膜粘液层，利用BabA、OipA等粘附因子在胃黏膜上皮细胞实现粘附定植，并释放毒素引起细胞病变。Hp的分泌性毒素主要有两种，一是细胞毒素相关蛋白A(Cytotoxin
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associated protein A,CagA)是由一个长40kb左右的cag致病岛编码的Ⅳ型分泌系统产生并输送入上皮细胞引起细胞病变。另一个重要毒素是空泡形成毒素A(Vacuolating cytotoxin A,VacA)，所有菌株均携带vacA基因，但只有50％菌株能够分泌VacA。VacA通过特异受体在细胞膜形成膜通道破坏细胞溶酶体和内质网，导致空泡变性。
[0011]依据其分泌毒素的情况不同，可以将其分为产细胞毒素和非产细胞毒素两大类；能产生毒素的为I型，不能产生毒素的是II型。I型HP由于产生细胞毒素，因此有较强的毒性，与胃十二指肠溃疡、MALT淋巴瘤及胃癌的发生密切相关；II型Hp菌株的由于不能产生细胞毒素毒力低，感染后一般只引起慢性浅表性胃炎。
[0012]对幽门螺杆菌进行分型检测，有重要的临床意义：
[0013]1)有助于临床医生选择是否需要根除的治疗方案：I型有毒株毒性较强，对病人危害较大，和消化性溃疡、胃癌等密切相关，需要做HP的根除治疗；II型无毒株毒性较小，致病力弱，一般表现为轻微消化不良。如果患者感染为无毒株且无临床症状或者临床症状轻微可以不必进行根除治疗；
[0014]2)有助于临床医生选择是否需要根除的治疗方案，使一大部分感染者免除不必要的治疗，避免抗生素过度使用，减少细菌耐药性的产生；
[0015]3)对于健康体检人群开展分型检测，能更早期更精准判断需要干预的人群，有效提示胃癌高发人群，减少不必要的恐慌，有助于节约社会资源，达到提高国民身体素质的目的。
[0016]目前，市面上幽门螺杆菌分型检测试剂，仅有两家，一家是深圳伯劳特幽门螺杆菌抗体分型检测试剂盒(免疫印迹法)，另一家是重庆新赛亚幽门螺杆菌(HP)分型检测试剂盒(量子点免疫荧光法)，这两家试剂盒都是以血清为检测样本。
[0017]尿液样本中含有幽门螺杆菌抗体，采集尿液要比血液更简单，并且是无创的，用尿液作为检测样本比血液更有优势。目前，没有用尿液进行幽门螺杆菌抗体分型的产品及专利文献报道。

技术实现思路

[0018]针对现有技术所存在的技术问题，本专利技术的目的之一在于提供一种快速检测尿液中HP抗体分型的试纸条，所述试纸条包括PVC背板，沿PVC背板宽度方向从下往上依次设置的样品垫、金标垫、层析膜和吸水垫，且相邻组分相互衔接；
[0019]所述金标垫上固化有胶体金标记的抗人IgG兔多克隆抗体，所述层析膜包括从靠近样品垫端至靠近吸水垫端依次平行设置、且相互间隔的T1检测线、T2检测线和质控线，所述T1检测线包被有重组HP CagA+VacA融合抗原，所述T2检测线包被有天然HP尿素酶，所述质控线包被有羊抗兔IgG抗体；...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速检测尿液中HP抗体分型的试纸条，其特征在于，所述试纸条包括PVC背板，沿PVC背板宽度方向从下往上依次设置的样品垫、金标垫、层析膜和吸水垫，且相邻组分相互衔接；所述金标垫上固化有胶体金标记的抗人IgG兔多克隆抗体，所述层析膜包括从靠近样品垫端至靠近吸水垫端依次平行设置、且相互间隔的T1检测线、T2检测线和质控线，所述T1检测线包被有重组HP CagA+VacA融合抗原，所述T2检测线包被有天然HP尿素酶，所述质控线包被有羊抗兔IgG抗体；所述重组HP CagA+VacA融合抗原对应的CagA的蛋白质序列如SEQ IDNO:2所示，VacA的蛋白质序列如SEQ ID NO:4所示。2.根据权利要求1所述的快速检测尿液中HP抗体分型的试纸条，其特征在于，所述重组HP CagA+VacA融合抗原对应的CagA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；和/或VaCA的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。3.根据权利要求2所述的快速检测尿液中HP抗体分型的试纸条，其特征在于，重组HP CagA+VacA融合抗原CagA的核苷酸序列和VacA的核苷酸序列之间的连接序列如SEQ ID NO:5所示。4.根据权利要求1所述的快...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘光桥，刘明，潘文东，刘观慈，
申请(专利权)人：武汉睿奇生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：