一种诱导多能干细胞分化为肝细胞的试剂盒、方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种诱导多能干细胞分化为肝细胞的试剂盒、方法及其应用。试剂盒中包含低浓度的白藜芦醇，本发明专利技术首次发现添加低浓度白藜芦醇诱导所得肝细胞的白蛋白分泌量，药物代谢酶基因表达水平以及极化基因等肝功能相关基因表达水平都显著升高，并且可以减少高浓度且昂贵的生长因子的使用，进一步促进人多功能干细胞的肝向分化；通过采用本发明专利技术提供的试剂盒建立了一条由人多功能干细胞3D悬浮定向分化为肝细胞的方法；大大加快了干细胞的肝分化进程，同时也降低了分化成本，提高肝细胞的成熟度和药物代谢能力，更加高效简便。更加高效简便。

【技术实现步骤摘要】
一种诱导多能干细胞分化为肝细胞的试剂盒、方法及其应用


[0001]本专利技术属于生物医学
，具体涉及一种诱导多能干细胞分化为肝细胞的试剂盒、方法及其应用。

技术介绍

[0002]目前，全世界范围内肝脏疾病的发病率在显著增加，原位供体肝移植是治疗末期肝脏疾病首要的方法。在供体肝器官短缺的情况下，临床上对末期肝病患者以及急性肝衰患者进行肝细胞移植或生物人工肝进行治疗，每次进行肝细胞移植治疗或生物人工肝治疗都需要10
10
方百亿数量级的肝细胞
[1]。然而，由于同样肝源缺乏，无法获得足够的肝细胞限制在肝细胞移植和生物人工肝在临床上的应用。此外，肝是人体内药物代谢的主要器官，新药研发和药物筛选等也需要大量的功能性肝细胞进行药物代谢以及毒理测试。
[0003]目前通过3D分化方法获得的人多能干细胞(hPSCs)源肝细胞在肝功能上和新鲜分离的人原代肝细胞仍存在一定差距。
[0004]新鲜分离的原代人肝细胞(PHHs)在体外培养会迅速丧失其特性和功能，因此目前在临床和生物制药领域上，培养出功能可以媲美PHHs的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种试剂盒，包含(a1)～(a3)中的至少一种；a1第一培养基、第二培养基和第三培养基；a2第四培养基；a3第五培养基；所述第一培养基、第二培养基、第三培养基、第四培养基、第五培养基中包含10nM～10μM Resveratrol；所述第一培养基、第二培养基和第三培养基中还包含Activin A；所述第四培养基中还包含BMP2和BMP4；所述第五培养基中还包含抑瘤素M。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第一培养基、第二培养基和第三培养基中Activin A的浓度为80～120ng/mL；所述第四培养基中BMP2的浓度为5～15ng/mL，BMP4的浓度为5～15ng/mL；所述第五培养基中抑瘤素M的浓度为40～60ng/mL。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述第一培养基还包含GSK3β抑制剂、基础培养基；优选地，所述第二培养基还包含KSR、基础培养基；优选地，所述第三培养基还包含KSR、基础培养基；优选地，所述第四培养基还包含FBS、L
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谷氨酰胺、胰岛素、1
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硫代甘油、FGF
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4、HGF、地塞米松、二甲基亚砜、基础培养基；优选地，所述第五培养基还包含HGF、二甲基亚砜、地塞米松、FGF
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4、第一添加剂、基础培养基；优选地，所述第一添加剂包含：抗坏血酸、BSA
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FAF、氢化可的松、转铁蛋白、胰岛素、基因重组人表皮生长因子和GA
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1000。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述第一培养基的基础培养基为DMEM高糖、DMEM
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F12和RPMI1640培养基中的至少一种；优选地，所述第二培养基的基础培养基为DMEM高糖、DMEM
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F12和RPMI1...

【专利技术属性】
技术研发人员：段玉友，汪怡玙，吴海滨，陈洪林，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：