nCoV-L在制备抗肿瘤药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及抗肿瘤药物技术领域，特别是涉及nCoV

【技术实现步骤摘要】
nCoV
‑
L在制备抗肿瘤药物中的应用


[0001]本专利技术涉及抗肿瘤药物
，特别是涉及nCoV
‑
L及其在制备抗肿瘤药物中的应用。

技术介绍

[0002]模式识别受体(Pattern recognition receptors,PRRs)主要由免疫细胞表达，通过识别微生物特定分子结构，发挥激活固有免疫、诱导适应性免疫的重要作用。PPRs主要包括Toll样受体(Toll
‑
like receptors)，C型凝集素受体(C
‑
type lectin receptors)，RIG
‑
I样受体(RIG
‑
I
‑
like receptors)，NOD样受体(Nod
‑
like receptors)和AIM2样受体(AIM2
‑
like receptors)。当PRRs识别配体后，启动信号级联反应，激活细胞凋亡等信号，诱导促凋亡蛋白Noxa、Puma及肿瘤细胞表面肿瘤坏死因子等表达，从而促进肿瘤细胞凋亡。由于PRRs在免疫系统的关键作用，靶向PRRs的配体可作为潜在的抗肿瘤候选药物或佐剂。
[0003]在我国，RIG
‑
I配体药物的分子机制研究及应用鲜有报道。因此，筛选靶向RIG
‑
I受体的配体作为潜在的癌症治疗药物，在肿瘤免疫治疗中具有较大的潜力和广阔的应用前景。

技术实现思路

[0004]为了解决上述问题，本专利技术提供了nCoV
‑
L及其在制备抗肿瘤药物中的应用。本专利技术提供的nCoV
‑
L在体内能够激活机体抗肿瘤免疫，发挥抗肿瘤作用，是一种具有潜在前景的抗肿瘤药物。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]本专利技术提供了nCoV
‑
L在制备抗肿瘤药物中的应用，所述nCoV
‑
L为5
’
端含有三个磷酸基团的RNA；所述RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0007]优选的，所述肿瘤包括肝癌、肺癌和结肠癌中的一种或多种。
[0008]有益效果：
[0009]本专利技术提供了nCoV
‑
L在制备抗肿瘤药物中的应用，所述nCoV
‑
L为5
’
端含有三个磷酸基团的RNA；所述RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本专利技术提供的nCoV
‑
L，其分子内部碱基高度互补配对，形成茎环结构，能够特异性激活RIG
‑
I受体，在体内能够激活机体抗肿瘤免疫，发挥抗肿瘤作用，是一种具有潜在前景的抗肿瘤药物。
附图说明
[0010]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0011]图1为实施例1构建的表达载体部分示意图；
[0012]图2为电泳鉴定结果图；
[0013]图3应用例1～3的实验结果图；
[0014]图4为应用例4～8的实验结果图；
[0015]图5为应用例9和10的实验结果图。
具体实施方式
[0016]本专利技术提供nCoV
‑
L在制备抗肿瘤药物中的应用，所述nCoV
‑
L为5
’
端含有三个磷酸基团的RNA；所述RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，具体如下：GGUUUAAUACCUAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA AAAUCCCUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUAGGU AUUAAACC。
[0017]本专利技术所述nCoV
‑
L的5
’
端含有三个磷酸基团，即PPP基团，所述PPP基团通过磷酸二酯键和所述RNA连接在一起。
[0018]本专利技术提供的nCoV
‑
L，其分子内部碱基高度互补配对，形成茎环结构，能够特异性激活RIG
‑
I受体，从而发挥抗肿瘤的作用。具体作用机理如下：RIG
‑
I受体能够识别具有5
’
PPP(即5
’
端带有三个磷酸基团)的双链RNA，通过促进肿瘤抗原加工与提呈过程或诱导细胞因子表达，进而招募自然杀伤细胞(Natural killer cell,NK)、细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic lymphocyte,CTL)细胞和树突状细胞(Dendric cell,DC)，有效促进免疫原性细胞死亡(Immunogenic cell death,ICD)。同时，RIG
‑
I活化还能够激活细胞凋亡等信号，通过诱导促凋亡蛋白Noxa、Puma或肿瘤细胞表面肿瘤坏死因子等表达，促进细胞凋亡。除此之外，RIG
‑
I信号的激活还能协同CTLA
‑
4抗体，阻断CTLA
‑
4、诱导抗原特异性CD8
+
T细胞的扩增和活化，增强肿瘤的免疫原性细胞死亡。
[0019]在本专利技术中，所述肿瘤优选包括肝癌、肺癌和结肠癌中的一种或多种。
[0020]为了进一步说明本专利技术，下面结合实施例和附图对本专利技术提供的nCoV
‑
L及其在制备抗肿瘤药物中的应用进行详细地描述，但不能将它们理解为对本专利技术保护范围的限定。
[0021]以下应用例中的转染均使用Lipofectamine 3000(Invitrogen，cat#L3000008)进行转染，体外转染96孔板转染体积为10μL/孔，6孔板转染体积为200μL，小鼠体内转染体积为100μL/只，转染体系的配制方法为：将nCoV
‑
L和Li pofectamine3000试剂混合在Opti
‑
MEM培养基(Gibco，USA)中孵育10min。所述nCoV
‑
L和Lipofectamine3000试剂的混合比例为10μg：15μL。
[0022]以下应用例中所有细胞均购自ATCC，培养基中均含有胎牛血清(FBS)，所述胎牛血清在培养基中的体积分数为10％。
[0023]实施例1
[0024]1)委托生工生物工程(上海)股份有限公司通过化学合成法合成体外转录模板序列并链接至pUC19载体中(图1)，体外转录模板序列具体如SEQ IDNO.2所示：5
’‑
TAATACGACTCACTATAGGTTTAATACCTAAAAAAAAAAAAA AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAATCCCTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTAGGTATTAAACCTGAGACG
‑3’
；
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.nCoV
‑
L在制备抗肿瘤药物中的应用，所述nCoV
‑
L为5
’
端含有三个磷酸基...

【专利技术属性】
技术研发人员：王茜，宋子扬，安超强，梁争论，毛群颖，吴星，高帆，卞莲莲，刘明琛，贺倩，刘建阳，白玉，宋丽芳，张佳璐，刘东，高秋爽，
申请(专利权)人：中国食品药品检定研究院，
类型：发明
国别省市：